快速鉴别小麦AL型不育系的方法及所用的引物技术

本发明专利技术涉及一种快速分子鉴别小麦AL型不育系和保持系的方法及所用的引物，通过开发一种dCAPS分子标记，通过该分子标记对小麦AL型不育系和保持系，即A系和B系的快速和早期的分析鉴别。与现有技术相比，本发明专利技术可以在苗期就对育苗进行高效准确快捷的鉴定，及时采取不正当的手段相应的措施，可以进一步对后期的培育试验工作进行优化，提高试验的可靠性，并且降低或减少无用工作。

【技术实现步骤摘要】
快速鉴别小麦AL型不育系的方法及所用的引物
本专利技术涉及一种快速鉴别小麦AL型不育系和保持系的方法及所用的引物。
技术介绍
小麦AL型不育系和保持系在生长过程中的形态非常相近。传统的区别方法是在小麦抽穗期通过观察进行鉴别，一是看农艺性状是否相近。如果相近，在抽穗期再观察散粉情况，不育系正常情况不散粉，保持系散粉。其缺点缺陷是：用肉眼观察的准确性较低，特别是到了抽穗期之后，育种试验的大部分工作已经完成，如果出现杂株较多的情况，试验就会报废，而即便出现的杂株在可以忍受的范围内，也会在一定程度上造成工作的浪费。因此，一种利用分子标记技术快速、准确鉴别小麦AL型不育系和保持系，即A系和B系鉴别开来的方法就应运而生。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种快速鉴别小麦AL型不育系和保持系的方法及所用的引物，通过开发一种dCAPS分子标记，通过该分子标记可以用于小麦AL型不育系和保持系，即A系和B系的快速和早期的分析鉴别，以进一步对后期的培育试验工作进行优化，提高试验的可靠性，并且降低或减少无用工作。为实现上述目的，本专利技术提供以下的技术方案：本专利技术的快速鉴别小麦AL型不育系和保持系的引物为序列表中的DNA序列<210>3和序列<210>2。根据上述的引物，建立一种dCAPS分子标记，通过该分子标记可以用于小麦AL型不育系和保持系，即A系和B系的快速和早期的分析鉴别，以进一步对后期的培育试验工作进行优化，提高试验的可靠性，并且降低或减少无用工作。本专利技术的快速鉴别小麦AL型不育系和保持系的方法如下：根据差异SNP位点的基因序列，在保守区域设计引物：TaChl-F1：TTTGCGAATTCCTACTTTGT；TaChl-R1：GTGTATGTAGATCTAATTCT。通过TaChl-F1/R1引物对，对提取的6个gDNA进行扩增，扩增产物用F1引物进行测序。测序比对结果显示，在156碱基处A系品种碱基为A，B系品种碱基为C。根据上面的测序结果，进行序列分析，选用限制性内切酶XmnI，并设计突变引物：TaChl-F2(XmnI)：TTTTTATTTTATAGTATTACTTCGAATTAATT。XmnI的切割序列为GAANNNNTTC，利用F2/R1引物对扩增出的序列为A系：TTTTTATTTTATAGTATTACTTCGAATTAATTA或B系：TTTTTATTTTATAGTATTACTTCGAATTAATTC。只有引物下游序列的第一个碱基为C的PCR产物才能被XmnI切开。利用引物F2/R1对鉴定目标gDNA进行扩增，扩增产物(如图3)回收后均用XmnI进行酶切，酶切产物用2.0％的高分辨率的琼脂糖凝胶进行电泳，结果(如图4)显示B系的所有产物均被切开，而A系的所有产物没有被切开。这说明本实验设计的dCAPS标记引物可以用来区分此SNP，只有此位点为C的碱基才会被XmnI切开，而其它三种碱基则不会被切开。从而保持系的所有产物均被切开，而不育系的所有产物没有被切开。因此，采用引物TaChl-F2(XmnI)和R1引物能将A系和B系区别开来。所需要的PCR反应体系如下：PCR反应体系：反应条件：dCAPS酶切体系：进一步地，PCR反应体系如下：反应条件：dCAPS酶切体系：与现有技术相比，本专利技术通过建立一种dCAPS分子标记，通过该分子标记可以用于小麦AL型不育系和保持系，即A系和B系的快速和早期的分析鉴别，可以在苗期就对育苗进行高效准确快捷的鉴定，及时采取不正当的手段相应的措施，可以进一步对后期的培育试验工作进行优化，提高试验的可靠性，并且降低或减少无用工作。附图说明图1：小麦叶片和gDNA电泳图谱。图2：gDNA的PCR产物电泳图谱，所用的引物为F1/R1。图3：gDNA的PCR产物电泳图谱，所用的引物为F2/R1。图4：F2/R1PCR产物的酶切产物电泳图谱，所用的限制性内酶切为Xmnl。图5：DNAmarke示意图。图6：突变引物序列图，序列中下划线标记所示碱基是引物中引入的突变位点。具体实施方式下面详细说明本专利技术的优选实施方式。本专利技术通过建立一种dCAPS分子标记，通过该分子标记可以用于小麦AL型不育系和保持系，即A系和B系的快速和早期的分析鉴别，以进一步对后期的培育试验工作进行优化，提高试验的可靠性，并且降低或减少无用工作。为实现上述目的，本专利技术提供以下的技术方案：本专利技术的快速检测小麦AL型不育系的引物为序列表中的DNA序列<210>3和序列<210>2。根据上述的引物，建立一种dCAPS分子标记，通过该分子标记可以用于小麦AL型不育系和保持系，即A系和B系的快速和早期的分析鉴别，以进一步对后期的培育试验工作进行优化，提高试验的可靠性，并且降低或减少无用工作。本专利技术的快速检测小麦AL型不育系的方法如下：根据差异SNP位点的基因序列，进行网上blast，在保守区域设计引物：TaChl-F1：TTTGCGAATTCCTACTTTGT；TaChl-R1：GTGTATGTAGATCTAATTCT。通过TaChl-F1/R1引物对，对提取的6个gDNA进行扩增，扩增产物用F1引物进行测序。测序比对结果显示，在156碱基处A系品种碱基为A，B系品种碱基为C。根据上面的测序结果，进行序列分析，选用限制性内切酶XmnI，并设计突变引物：TaChl-F2(XmnI)：TTTTTATTTTATAGTATTACTTCGAATTAATT。XmnI的切割序列为GAANNNNTTC，利用F2/R1引物对扩增出的序列为A系：TTTTTATTTTATAGTATTACTTCGAATTAATTA或B系：TTTTTATTTTATAGTATTACTTCGAATTAATTC。只有引物下游序列的第一个碱基为C的PCR产物才能被XmnI切开。利用引物F2/R1对鉴定目标gDNA进行扩增，扩增产物(如图3)回收后均用XmnI进行酶切，酶切产物用2.0％的高分辨率的琼脂糖凝胶进行电泳，结果(如图4)显示B系的所有产物均被切开，而A系的所有产物没有被切开。这说明本实验设计的dCAPS标记引物可以用来区分此SNP，只有此位点为C的碱基才会被XmnI切开，而其它三种碱基则不会被切开。从而保持系的所有产物均被切开，而不育系的所有产物没有被切开。因此，采用引物TaChl-F2(XmnI)和R1引物能将A系和B系区别开来。所需要的PCR反应体系如下：PCR反应体系：反应本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种快速鉴别小麦AL型不育系和保持系的引物，其特征在于：所述的引物为序列表中的DNA序列<210>3和序列<210>2。/n

【技术特征摘要】
1.一种快速鉴别小麦AL型不育系和保持系的引物，其特征在于：所述的引物为序列表中的DNA序列<210>3和序列<210>2。


2.一种快速鉴别小麦AL型不育系和保持系的方法，其特征在于：根据权利要求1所述的引物，建立一种dCAPS分子标记，通过该分子标记用于小麦AL型不育系和保持系的分析鉴别。


3.根据权利要求1所述的快速鉴别小麦AL型不育系和保持系的方法，其特征在于：所述的分析鉴别：
选用限制性内切酶XmnI，XmnI的切割序列为GAANNNNTTC，
利用所述的引物F2/R1对鉴定目标gDNA进行扩增，扩增产物...

【专利技术属性】
技术研发人员：聂迎彬，田笑明，孔德真，崔凤娟，穆培源，徐红军，桑伟，韩新年，刘鹏鹏，
申请(专利权)人：新疆农垦科学院，
类型：发明
国别省市：新疆;65