生物合成石竹烯的聚球藻基因工程菌及其构建方法与应用技术

本发明专利技术公开了生物合成石竹烯的聚球藻基因工程菌及其构建方法与应用，构建方法为：分别构建基础载体pSI‑SPE、pSII‑CM和pSIII‑KAN：再进一步构建pSI‑ispA‑gpps‑idi1sc、pSII‑idi1

【技术实现步骤摘要】
生物合成石竹烯的聚球藻基因工程菌及其构建方法与应用
本专利技术属于工业微生物领域，具体涉及一种生物合成石竹烯的聚球藻基因工程菌及其构建方法与应用。
技术介绍
β-石竹烯(β-caryophyllene，简称为石竹烯)是一种双环倍半萜类化合物，分子式为C15H24，常温下不溶于水，仅溶于乙醇、氯仿等有机熔剂，石竹烯广泛存在于各种植物之中，在植物抵抗细菌、真菌感染以及虫害中有重要作用。石竹烯常温下为无色至微黄色液体，有丁香气味，味道温和，因此在中国被批准为允许使用的食品香料(GB2760-1996)，此外在药品、化妆品等方面都有广泛应用。同时又由于其有较高的密度和燃烧热，因此被列为下一代航空燃料。目前石竹烯的来源主要依赖自植物中提取，同时早在1964年就实现了石竹烯的化学合成，但这些方法都面临着效率低，浓度低，类似物难以分离，回收率低等问题。近年来随着“微生物细胞工厂”的兴起，以微生物作为宿主生产化合物受到了更多的关注，为石竹烯的合成提供了新的思路。与其他萜烯类化合物的合成类似，在合成石竹烯的宿主中，经由甲羟戊酸(MVA)途径或2-C-基-本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.生物合成石竹烯的聚球藻基因工程菌的构建方法，其特征是包括如下步骤：/n(1)分别构建基础载体pSI-SPE、pSII-CM和pSIII-KAN：/n按照pBR322质粒骨架、中性位点NSI上游同源臂基因、壮观霉素抗性基因spe

【技术特征摘要】
1.生物合成石竹烯的聚球藻基因工程菌的构建方法，其特征是包括如下步骤：
(1)分别构建基础载体pSI-SPE、pSII-CM和pSIII-KAN：
按照pBR322质粒骨架、中性位点NSI上游同源臂基因、壮观霉素抗性基因speR、启动子PCPC560、终止子Trbcl、中性位点NSI下游同源臂基因的顺序组装成载体pSI-SPE；
按照pBR322质粒骨架、中性位点NSII上游同源臂基因、氯霉素抗性基因cmR,、启动子PCPC560、终止子Trbcl、中性位点NSII下游同源臂基因的顺序组装成载体pSII-CM；
按照pBR322质粒骨架、中性位点NSIII上游同源臂基因、卡那霉素抗性基因kanR、启动子PCPC560、终止子Trbcl、中性位点NSIII下游同源臂基因的顺序组装成载体pSIII-KAN；
pBR322基本骨架如SEQIDNO.56所示；
所述中性位点NSI上游同源臂基因的核苷酸序列如SEQIDNO.3所示；
所述壮观霉素抗性基因speR的核苷酸序列如SEQIDNO.9所示,
所述启动子PCPC560的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示；
所述终止子Trbcl的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示；
所述中性位点NSI下游同源臂基因的核苷酸序列如SEQIDNO.4所示；
所述中性位点NSII上游同源臂基因的核苷酸序列如SEQIDNO.5所示；
所述氯霉素抗性cmR的核苷酸序列如SEQIDNO.10所示；
所述中性位点NSII下游同源臂基因的核苷酸序列如SEQIDNO.6所示；
所述中性位点NSIII上游同源臂基因的核苷酸序列如SEQIDNO.7所示；
所述卡那霉素抗性基因kanR的核苷酸序列如SEQIDNO.11所示；
所述中性位点NSIII下游同源臂基因的核苷酸序列如SEQIDNO.8所示；
(2)用启动子Ppsba1替换pSI-SPE中的启动子PCPC560，在启动子Ppsba1终止子Trbcl之间按顺序插入牻牛儿基焦磷酸/法尼基焦磷酸合酶基因ispA、蓝细菌用高强度核糖体结合位点...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈磊，李树斌，孙韬，张卫文，
申请(专利权)人：天津大学，
类型：发明
国别省市：天津;12