一种提高非整合减毒李斯特菌疫苗安全性的方法技术

本公开涉及一种提高非整合减毒李斯特菌疫苗安全性的方法。具体来说，本公开的方法包括将重组核酸分子插入质粒或表达载体中来构建重组质粒或重组表达载体的步骤，以及将所述重组质粒或重组表达载体转染至李斯特菌中来得到重组李斯特菌的步骤。本公开的方法通过对载体上LLO进行不同程度缺失突变，检测突变后疫苗的表达、溶血性及抗肿瘤效应，获得优化疫苗载体，进一步提高李斯特菌疫苗安全性。

A method to improve the safety of non integrated attenuated Listeria vaccine

【技术实现步骤摘要】
一种提高非整合减毒李斯特菌疫苗安全性的方法
本公开主要涉及生物
具体来说，本公开提供一种提高疫苗安全性的方法。更具体来说，本公开提供一种提高非整合减毒李斯特菌疫苗安全性的方法。
技术介绍
单核细胞增生性李斯特菌(Listeriamonocytogenes，Lm)是一种革兰氏阳性的胞内寄生菌[1]，可在上皮细胞、单核细胞及吞噬细胞等内存活并繁殖。由于其独特的侵染过程因此能够同时诱导炎症反应和激活MHCI型和II型抗原呈递途径的组合，使得李斯特菌成为一个具有很大应用前景的疫苗载体[2-4]。单增李斯特菌溶血素LLO(ListeriolysinO)是单增李斯特菌对数生长后期分泌的一种外毒素，隶属于胆固醇细胞溶素家族(cholesterol-dependentcytolysins-CDCs)。LLO由hly基因编码，分子量约为58kDa。单增李斯特菌已进化出多种相互协同作用的毒力因子，这些毒力因子可破坏宿主细胞的功能以逃避免疫系统攻击。LLO在单增李斯特菌从吞噬泡内逃逸至细胞质中至关重要，同时LLO在细菌侵袭入细胞的过程中也发挥作用，并本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种制备重组李斯特菌的方法，其包括以下步骤：/n(1)将重组核酸分子插入质粒或表达载体中，构建重组质粒或重组表达载体；/n(2)将所述重组质粒或重组表达载体转染至李斯特菌中，得到重组李斯特菌；/n其中，所述重组核酸分子包含编码重组多肽的开放阅读框，所述重组多肽包含融合至衍生李斯特菌溶血素(LLO)多肽的异源性抗原，所述重组的核酸分子还包含第一启动子序列；其中，所述衍生李斯特菌溶血素(LLO)多肽选自：如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ IDNO:8、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:14所示的氨基酸序列或如SEQ ID NO:4、...

【技术特征摘要】
1.一种制备重组李斯特菌的方法，其包括以下步骤：
(1)将重组核酸分子插入质粒或表达载体中，构建重组质粒或重组表达载体；
(2)将所述重组质粒或重组表达载体转染至李斯特菌中，得到重组李斯特菌；
其中，所述重组核酸分子包含编码重组多肽的开放阅读框，所述重组多肽包含融合至衍生李斯特菌溶血素(LLO)多肽的异源性抗原，所述重组的核酸分子还包含第一启动子序列；其中，所述衍生李斯特菌溶血素(LLO)多肽选自：如SEQIDNO:4、SEQIDNO:6、SEQIDNO:8、SEQIDNO:10、SEQIDNO:12或SEQIDNO:14所示的氨基酸序列或如SEQIDNO:4、SEQIDNO:6、SEQIDNO:8、SEQIDNO:10、SEQIDNO:12或SEQIDNO:14所示的氨基酸序列经过取代、重复、缺失或添加一个或多个氨基酸，且具有或部分具有如SEQIDNO:2所示的李斯特菌溶血素(LLO)多肽的活性的多肽。


2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述异源性抗原选自肿瘤抗原或非肿瘤抗原；可选的，所述非肿瘤抗原选自OVA或具有OVA功能的片段。


3.根据权利要求2所述的方法，其中，所述OVA或具有OVA功能的氨基酸片段选自包含如SEQIDNO:17所示的氨基酸序列；优选的，编码所述OVA或具有OVA功能的氨基酸片段的核苷酸包含如SEQIDNO:16所示的核苷酸序列。


4.根据权利要求1所述的方法，其中，所述重组核酸分子还包含连接序列，所述连接序列连接编码所述衍生李斯特菌溶血素(...

【专利技术属性】
技术研发人员：代楠，张可，韩毅峰，赵勇刚，
申请(专利权)人：上海若泰医药科技有限公司，苏州若泰医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31