一种利用LPS和泰洛沙泊构建小鼠动脉粥样硬化模型的方法技术

本发明专利技术公开了一种利用LPS和泰洛沙泊构建小鼠动脉粥样硬化模型的方法。本发明专利技术首次利用LPS和泰洛沙泊长期诱导小鼠动脉粥样硬化模型。通过实验证实，在该模型小鼠血清中甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白(LDL)的含量均显著增高，并在小鼠主动脉瓣处形成动脉粥样硬化斑块。本发明专利技术通过利用LPS和泰洛沙泊成功构建了小鼠动脉粥样硬化模型，该发明专利技术实验成本低，成模周期短，成模率高，且稳定性好。本发明专利技术为研究动脉粥样硬化的病因以及筛选治疗动脉粥样硬化的药物提供了更加有效的经济模型。

【技术实现步骤摘要】
一种利用LPS和泰洛沙泊构建小鼠动脉粥样硬化模型的方法
本专利技术涉及动物实验模型
，特别涉及一种利用LPS和泰洛沙泊构建小鼠动脉粥样硬化模型的方法。本专利技术属于生物

技术介绍
动脉粥样硬化是一种慢性疾病，是大多数心血管疾病发生的根本原因。动脉粥样硬化导致的心血管疾病在世界范围具有较高的死亡率。其中，动脉粥样硬化性心血管疾病的病理特征主要表现为动脉内皮细胞功能障碍。在过去，动脉粥样硬化的发病机制被认为是血管壁脂质积聚。然而，现研究发现动脉粥样硬化的发病机制复杂，其中免疫细胞和炎症以及高脂血症对动脉粥样硬化的形成起着关键作用。所以，获得一种成模稳定性好、速度快、成本低的动脉粥样硬化动物模型，对研究动脉粥样硬化的发生发展机制与筛选治疗动脉粥样硬化的药物意义重大。理想的动脉粥样硬化动物模型应类似于人体解剖学和病理生理学，才有可能用于医学和药学研究，以获得可外推到人类医学的结果。而且，它必须易于获得，能够以合理的成本维持，易于处理，并且与人类具有相同的病变情况。一般来说，动脉粥样硬化的动物模型是由富含胆固醇的饮食导致的斑块加速形成以及引发动脉粥样硬化其他危险因素的发生。在动脉粥样硬化模型动物的选取中，小鼠和兔子被广泛使用，其次是猪和非人灵长类动物。每种模型都有其优点和局限性。小鼠具有繁殖快、易于操作、能在合理的时间内监测动脉粥样硬化的发生等优点。因此以小鼠为基础构建动脉粥样硬化模型具有科学性和合理性。目前，诱导小鼠动脉粥样硬化模型的方法主要分为：高脂饲喂诱导小鼠模型；高胆固醇饲喂诱导小鼠模型；载脂蛋白E(ApoE-/-)基因敲除小鼠模型；低密度脂蛋白受体(LDL-R-/-)敲除模型；ApoE-/-和LDL-R-/-小鼠模型；此外，还有许多基因的敲除有利于小鼠动脉粥样硬化的形成，如ApoA-1、ApoA-II、ApoA-IV、以及卵磷脂胆固醇酰基转移酶和磷脂转运蛋白等转基因小鼠。但是以上诱导小鼠动脉粥样硬化的方法还有许多缺陷，如高脂饲喂等饲喂法可导致小鼠厌食，不利于成模的稳定性；另外，高脂饲喂等饲喂法还有造膜周期长，实验成本大的问题；基因敲除小鼠模型不但实验成本昂贵，为达到更优的效果，还要利用高脂粮饲喂小鼠，这无疑又进一步加大了实验成本。所以找到一种实验成本低，造模周期短的造模方法对动脉粥样硬化的深入研究是刻不容缓的。众所周知，动脉粥样硬化的发生离不开炎症反应与高脂血症。近年来研究发现，一些肠道菌群与牙龈卟啉单胞菌等细菌可加速动脉粥样硬化的发生，这与其产生大量的LPS有关。由于LPS过多产生引起机体强烈的炎症反应，而持续的炎症反应是动脉粥样硬化发生的重要因素。所以，LPS对动脉粥样硬化的影响是不容忽视的。泰洛沙泊是一类表面活性剂，将其注射体内可导致高脂血症。高脂血症是动脉粥样硬化发生的重要诱因。但是，LPS与泰洛沙泊联合使用对小鼠构建动脉粥样硬化模型的作用效果还没有研究。
技术实现思路
(一)解决的技术问题针对现有技术的不足之处，本专利技术提供了一种利用LPS和泰洛沙泊构建小鼠动脉粥样硬化模型的方法。该方法可降低实验成本，并且造模成功率高，得到的模型小鼠可以较为方便的研究动脉粥样硬化发病机制及筛选治疗动脉粥样硬化的药物。(二)技术方案为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种利用LPS和泰洛沙泊构建小鼠动脉粥样硬化模型的方法。优选的，所述小鼠为雄性C57BL/6小鼠。优选的，利用50μg的LPS通过腹腔注射的方式注入小鼠体内。优选的，LPS的诱导时间为每周一次，持续8周。优选的，利用500mg/kg的泰洛沙泊通过腹腔注射的方式注入小鼠体内。优选的，泰洛沙泊的诱导时间为隔天一次，持续8周。优选的，LPS和泰洛沙泊同时诱导小鼠模型。优选的，采用普通日粮构建小鼠模型。小鼠模型构建完成后，测定小鼠血清中TC、TG和LDL的含量；并利用HE染色和油红O染色观察小鼠主动脉瓣斑块形成情况。(三)有益效果与现有技术相比，具备以下有益效果：本专利技术首次公开了LPS和泰洛沙泊可成功构建小鼠动脉粥样硬化模型。本专利技术可在短期的8周内成功诱导小鼠动脉粥样硬化模型，这极大的缩短了造模时间，成功的解决了造模时间长的问题。本专利技术不需要高脂饲喂，这大大降低了实验成本，提高实验的可行性。本专利技术实验技术简单，操作方便，有利于模型的成模率增高。本专利技术通过利用LPS和泰洛沙泊长期诱导小鼠，可成功使小鼠血清中TC、TG和LDL的含量升高，并且导致小鼠主动脉瓣中泡沫细胞的形成及脂质浸润的发生并形成动脉粥样硬化斑块。构建的小鼠模型为研究心血管疾病的机制功能以及治疗心血管疾病药物的筛选提供了更多的选择，具有非常重要的理论和实际意义。附图说明图1是用LPS和泰洛沙泊诱导小鼠模型的操作流程图；图2是小鼠用LPS和泰洛沙泊诱导8周以后血清中TC，TG，LDL含量结果图；图3是小鼠用LPS和泰洛沙泊诱导8周以后主动脉瓣HE染色结果图；图4是小鼠用LPS和泰洛沙泊诱导8周以后主动脉瓣油红O染色结果图；*表示与空白组相比，*p<0.05，**p<0.01；缩写词：LPS：细菌内毒素，TC：总胆固醇，TG：甘油三酯，LDL：低密度脂蛋白。具体实施方式下面结合具体实施例和附图来进一步描述本专利技术，本专利技术的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本专利技术的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本专利技术的精神和范围下可以对本专利技术技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本专利技术的保护范围内。本实施例详细操作方法如下：材料SPF级雄性C57BL/6小鼠，20-22g，由辽宁长生生物技术有限公司提供，实验动物生产许可证号：SCXK2010-0001；LPS和泰洛沙泊购自Sigma公司；TC、TG、LDL测量试剂盒购自南京建成生物工程研究所。所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，为可从商业途径得到的试剂和材料。实施例1LPS和泰洛沙泊诱导小鼠模型的操作流程小鼠饲养环境清洁，饲养温度为24±1℃，相对湿度为40％-80％。将小鼠分为四组：空白组(生理盐水)，LPS组(50μg)，泰洛沙泊组(500mg/kg)，LPS(50μg)+泰洛沙泊组(500mg/kg)。LPS和泰洛沙泊的给药方式为腹腔注射。LPS的给药周期为每周一次，泰洛沙泊的给药周期为隔天一次，LPS和泰洛沙泊均给药8周。其中，LPS(50μg)+泰洛沙泊组(500mg/kg)诱导小鼠模型的操作流程如图1所示。所有小鼠均食用普通日粮，自由饮水。附图1显示，造模周期为8周，其中LPS在每周的第一天腹腔注射一次，同时泰洛沙泊隔天注射一次。实施例2小鼠血清中TC、TG、LDL含量的测定实验方法：(1)实施例1完成后，利用眼球采血的方法收集小鼠血液，室温静置2h后，等待血清析出。将收集的血液3000rpm每本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种利用LPS和泰洛沙泊构建小鼠动脉粥样硬化模型的方法，其特征在于：利用LPS和泰洛沙泊联合使用构建小鼠动脉粥样硬化模型。/n

【技术特征摘要】
1.一种利用LPS和泰洛沙泊构建小鼠动脉粥样硬化模型的方法，其特征在于：利用LPS和泰洛沙泊联合使用构建小鼠动脉粥样硬化模型。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述小鼠为雄性C57BL/6小鼠。


3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，利用50μg的LPS通过腹腔注射的方式注入小鼠体内。


4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，LPS的诱导时间为每周一次...

【专利技术属性】
技术研发人员：冯海华，金美玉，阚兴池，沈冰玉，覃海燕，王齐，严斯如，李金霞，
申请(专利权)人：吉林大学，
类型：发明
国别省市：吉林;22