一种新型冠状病毒COVID-19抗原荧光检测试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，提供了一种新型冠状病毒COVID‑19抗原荧光检测试剂盒及其制备方法，该试剂盒包括底板，底板上铺设有样品垫、结合垫、包被膜和吸水纸；结合垫上含有荧光微球标记的新型冠状病毒COVID‑19 Spike蛋白单克隆抗体和荧光微球标记的羊抗鸡抗体；包被膜包含检测区包被T和质控区包被C，检测区包被T有与结合垫上的新型冠状病毒COVID‑19 Spike蛋白单克隆抗体不同表位的新型冠状病毒COVID‑19 Spike蛋白单克隆抗体，质控区包被C有鸡IgY抗体。本发明专利技术的试剂盒可精准检测样本中是否存在新型冠状病毒Spike蛋白，实现现场快速检测。

A novel coronavirus COVID-19 antigen fluorescence detection kit and its preparation method

【技术实现步骤摘要】
一种新型冠状病毒COVID-19抗原荧光检测试剂盒及其制备方法
本专利技术涉及生物
，尤其是涉及一种新型冠状病毒COVID-19抗原荧光检测试剂盒及其制备方法。
技术介绍
2019新型冠状病毒COVID-19属于正冠状病毒亚科(OrthocoronS1virinS1e)。从发现病毒性肺炎是由该病毒引起的数十日内，由于人口流动性的原因，全国范围内相继出现确诊病例。该病毒的潜伏期长达14天，在无症状的情况下也可传染。国家卫生健康委员会决定将新型冠状病毒感染的肺炎纳入法定传染病乙类管理，采取甲类传染病的预防、控制措施。目前市场上暂无2019新型冠状病毒COVID-19抗原检测产品，因此，亟需一种快速、特异、精准检测的新型冠状病毒COVID-19病毒抗原荧光检测试剂盒。
技术实现思路
针对现有技术存在的不足，本专利技术的第一目的在于提供一种新型冠状病毒COVID-19抗原荧光检测试剂盒，该试剂盒可快速、特异、精准的检测出新型冠状病毒COVID-19Spike蛋白的含量，具有灵敏、准确、稳定的优点，可以对待测样品实现快速、超敏、准确的现场检测，并且提供定量的检测结果。为实现上述目的，本专利技术提供了如下技术方案：一种新型冠状病毒COVID-19抗原荧光检测免疫层析试剂盒，该试剂盒包括底板，所述底板上铺设有样品垫、结合垫、包被膜和吸水纸，所述样品垫和吸水纸分别位于底板的两端，所述样品垫搭接于结合垫，所述结合垫搭接于包被膜，所述吸水纸搭接于包被膜；样品垫优选为玻璃纤维材料，经Tris盐溶液浸泡处理后热烘干处理后裁切制成，包被膜优选为硝酸纤维素膜。所述结合垫上含有荧光微球标记的新型冠状病毒COVID-19Spike蛋白单克隆抗体和荧光微球标记的羊抗鸡抗体；所述包被膜包含检测区包被T和质控区包被C，所述检测区包被T有与结合垫上的新型冠状病毒COVID-19Spike蛋白单克隆抗体不同表位的新型冠状病毒COVID-19Spike蛋白单克隆抗体，所述质控区包被C有鸡IgY抗体。本专利技术进一步设置为：所述结合垫上的新型冠状病毒COVID-19Spike蛋白单克隆抗体浓度为0.5～2.5mg/mL，所述羊抗鸡抗体浓度为0.5-2.0mg/mL，所述结合垫上的新型冠状病毒COVID-19Spike蛋白单克隆抗体固化后的含量为0.8～1.5μg/cm2，所述结合垫上的羊抗鸡抗体固化后的含量为0.8～1.0μg/cm2。本专利技术进一步设置为：所述结合垫通过结合垫处理液处理；所述结合垫处理液包括以下原料：5％～10％甜菜碱，3％～5％酪蛋白，5％～10％吐温-100溶解于0.01M及pH值为6.2～7.2的磷酸盐缓冲盐溶液。本专利技术进一步设置为：所述样品垫含有浓度为0.5～2.0mg/ml的鼠IgG抗体。本专利技术进一步设置为：所述检测区包被T上的新型冠状病毒COVID-19Spike蛋白单克隆抗体的浓度为0.5-2.5mg/ml，用量为26μl/27-29cm。本专利技术进一步设置为：所述鸡IgY抗体浓度为0.5-2.0mg/ml、用量为26μl/27-29cm。本专利技术进一步设置为：所述荧光微球的粒径为0.1～0.5μm，所述荧光微球的激发光和发射光波长为400～750nm。本专利技术还提供了一种新型冠状病毒COVID-19抗原荧光检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤：S1、荧光微球的清洗与活化：将荧光微球悬液离心处理后，加入吗啉乙磺酸溶液进行超声处理，接着依次加入碳二亚胺和N-羟基硫代琥珀酰亚胺溶液，室温混匀后离心处理，弃上清液，再用吗啉乙磺酸溶液重悬，重复清洗后超声混匀备用；S2、荧光微球标记抗体的制备：在步骤S1活化后得到的荧光微球悬液中，分别逐滴加入新型冠状病毒COVID-19Spike蛋白单克隆抗体和羊抗鸡抗体，混匀后室温反应，离心清洗，沉淀用含有5％牛血清白蛋白的磷酸缓冲盐溶液重悬后室温反应，离心清洗，沉淀再用含1％牛血清白蛋白的TBST缓冲液超声重悬，得到荧光微球标记的新型冠状病毒COVID-19Spike蛋白单克隆抗体和荧光微球标记的羊抗鸡抗体；S3、结合垫的制备：将制作样品垫的材料裁切成条状，将步骤S2得到的两种荧光微球标记抗体和含有5％～10％甜菜碱，3％～5％酪蛋白，5％～10％吐温-100溶解于0.01M及pH值为6.2～7.2的磷酸盐缓冲盐溶液的结合垫处理液稀释，喷涂在结合垫上，烘干备用；S4、包被膜的制备：分别将另一种新型冠状病毒COVID-19Spike蛋白单克隆抗体和鸡IgY抗体用磷酸缓冲盐溶液调节浓度，然后将二者分别在检测区包被T和质控区包被C划膜，烘干备用；S5、样品垫的制备：将制作样品垫的材料裁切成条状，用含5％～8％葡萄糖、1％～2％吐温-100的Tris溶液浸泡，浸泡充分后烘干，烘干后上面喷涂鼠IgG抗体；S6、纸条的组装：在底板上顺次粘贴样品垫、结合垫、包被膜和吸水纸，所述样品垫、结合垫、包被膜和吸水纸之间互相搭接，然后切割成试纸条。本专利技术进一步设置为：所述步骤S1中加入的吗啉乙磺酸溶液体积为20～50mM，pH为5.0～6.5。本专利技术进一步设置为：所述步骤S4中，检测区包被T上与结合垫上的新型冠状病毒COVID-19Spike蛋白单克隆抗体不同表位的新型冠状病毒COVID-19Spike蛋白单克隆抗体和质控区包被C上的鸡IgY抗体两者间隔5～8mm。通过采用上述技术方案，Spike蛋白是新型冠状病毒COVID-19的膜融合蛋白，本专利技术是通过利用粒径为0.1～0.5μm的荧光微球上的羧基、醛基、羟甲基等基团共价偶联抗体上，样本经过样品垫前处理后流经结合垫时，样本中的新型冠状病毒spike蛋白与结合垫上的含有荧光微球标记的新型冠状病毒COVID-19Spike蛋白单克隆抗体或羊抗鸡抗体结合，在层析作用下移动至包被膜，被检测区包被T上的另一新型冠状病毒spike蛋白抗体捕获，形成三明治结构的抗体-抗原-抗体复合物并聚集在检测区域，当荧光微球受到光源激发并释放出其特定波长400～750nm的发射光，通过荧光检测系统将收集到的光信号转化为数字信号，从而可快速精准的测定样本中新型冠状病毒spike蛋白的含量，在本专利技术中鼠IgG抗体用于消除样本中的人抗鼠IgG抗体，防止其对检测区包被T和质控区包被C测试的影响。本专利技术将结合垫处理液对制备得到的荧光微球标记的抗体进行稀释，结合垫处理液为甜菜碱、酪蛋白、吐温-100溶解于pH值为6.2～7.2的磷酸盐缓冲盐溶液，使得样品中的新型冠状病毒spike蛋白流经至结合垫时，可更好的与结合垫上的新型冠状病毒COVID-19Spike蛋白单克隆抗体或羊抗鸡抗体结合，进而使得抗体-抗原-抗体复合物结合的更佳紧密，使得待测样品精确度更高，灵敏度更高，优于市面上的检测水平。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：1.本专利技术提供的新型冠状病毒COVID-19抗原荧光检测试剂盒，可用于大规模疑似和接触性病例的新冠肺炎的筛查，操作简单，只需样本本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种新型冠状病毒COVID-19抗原荧光检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括底板，所述底板上铺设有样品垫、结合垫、包被膜和吸水纸，所述样品垫和吸水纸分别位于底板的两端，所述样品垫搭接于结合垫，所述结合垫搭接于包被膜，所述吸水纸搭接于包被膜；/n所述结合垫上含有荧光微球标记的新型冠状病毒COVID-19Spike蛋白单克隆抗体和荧光微球标记的羊抗鸡抗体；/n所述包被膜包含检测区包被T和质控区包被C，所述检测区包被T有与结合垫上的新型冠状病毒COVID-19Spike蛋白单克隆抗体不同表位的新型冠状病毒COVID-19Spike蛋白单克隆抗体，所述质控区包被C有鸡IgY抗体。/n

【技术特征摘要】
1.一种新型冠状病毒COVID-19抗原荧光检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括底板，所述底板上铺设有样品垫、结合垫、包被膜和吸水纸，所述样品垫和吸水纸分别位于底板的两端，所述样品垫搭接于结合垫，所述结合垫搭接于包被膜，所述吸水纸搭接于包被膜；
所述结合垫上含有荧光微球标记的新型冠状病毒COVID-19Spike蛋白单克隆抗体和荧光微球标记的羊抗鸡抗体；
所述包被膜包含检测区包被T和质控区包被C，所述检测区包被T有与结合垫上的新型冠状病毒COVID-19Spike蛋白单克隆抗体不同表位的新型冠状病毒COVID-19Spike蛋白单克隆抗体，所述质控区包被C有鸡IgY抗体。


2.根据权利要求1所述的新型冠状病毒COVID-19抗原荧光检测试剂盒，其特征在于，所述结合垫上的新型冠状病毒COVID-19Spike蛋白单克隆抗体浓度为0.5～2.5mg/mL，所述羊抗鸡抗体浓度为0.5-2.0mg/mL，所述结合垫上的新型冠状病毒COVID-19Spike蛋白单克隆抗体固化后的含量为0.8～1.5μg/cm2，所述结合垫上的羊抗鸡抗体固化后的含量为0.8～1.0μg/cm2。


3.根据权利要求1所述的新型冠状病毒COVID-19抗原荧光检测试剂盒，其特征在于，所述结合垫通过结合垫处理液处理；所述结合垫处理液包括以下原料：5％～10％甜菜碱，3％～5％酪蛋白，5％～10％吐温-100溶解于0.01M及pH值为6.2～7.2的磷酸盐缓冲盐溶液。


4.根据权利要求1所述的新型冠状病毒COVID-19抗原荧光检测试剂盒，其特征在于，所述样品垫含有浓度为0.5～2.0mg/ml的鼠IgG抗体。


5.根据权利要求1所述的新型冠状病毒COVID-19抗原荧光检测试剂盒，其特征在于，所述检测区包被T上的新型冠状病毒COVID-19Spike蛋白单克隆抗体的浓度为0.5-2.5mg/ml，用量为26μl/27-29cm。


6.根据权利要求1所述的新型冠状病毒COVID-19抗原荧光检测试剂盒，其特征在于，所述鸡IgY抗体浓度为0.5-2.0mg/ml、用量为26μl/27-29cm。


7.根据权利要求1所述的新型冠状病毒COVID-19抗原荧光检测试剂盒，其特征在于，所述荧光微球的粒径为0.1～0.5μm，所述荧光...

【专利技术属性】
技术研发人员：操凤，郑志，于洪波，
申请(专利权)人：深圳市梓健生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44