高浓度重组蛛丝蛋白纺丝液的制备方法及其纺丝技术

一种高浓度重组蛛丝蛋白纺丝液的制备方法及其纺丝，该重组蛛丝蛋白的分子结构为NTD‑(RP)n‑CTD，其中整数n代表RP重复结构域的重复次数，每个RP重复结构域的氨基酸序列如Seq ID No.1或Seq ID No.2所示。本发明专利技术能够高效、低成本的制备高浓度重组蛛丝蛋白纺丝液并得到易于修饰和改性且力学性能优良的人造蜘蛛丝。

【技术实现步骤摘要】
高浓度重组蛛丝蛋白纺丝液的制备方法及其纺丝
本专利技术涉及的是一种生物高分子领域的技术，具体是一种浓度达到50-500mg/mL的重组蛛丝蛋白的纯化和液-液相分离浓缩方法及其人造蜘蛛丝的制备方法。
技术介绍
蜘蛛牵引丝作为最强韧的生物材料之一，由于兼具高强度和良好的延展性，使其具有优于绝大多数合成材料的超强韧性。Nephilaclavipes牵引丝由MaSp1和MaSp2两种高分子量蛛丝蛋白组成，其中超过80％都为MaSp1。制备高浓度的蛋白纺丝液是进行重组蛛丝蛋白仿生纺丝的重要前提之一。现有技术采用将纯化后的低浓度蛛丝蛋白溶液通过离心浓缩至高浓度并进行仿生纺丝；或将纯化后的蛛丝蛋白溶液进行冷冻干燥，再用六氟异丙醇等强溶剂将蛛丝蛋白冻干粉溶解成高浓度的蛛丝蛋白纺丝液。离心浓缩方法需要耗费较长的时间且容易导致高分子量蛛丝蛋白在浓缩过程中发生无序聚集现象；而利用六氟异丙醇等强溶剂溶解蛛丝蛋白会造成环境污染且会导致高分子量蛛丝蛋白的降解及末端结构域功能丧失，因此上述方法不适于带有两个末端结构域的类天然高分子量重组蛛丝蛋白的纺丝液制备。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一类重组蛛丝蛋白，其特征在于，分子结构为NTD-(RP)n-CTD，其中整数n代表RP重复结构域的重复次数，每个RP重复结构域的氨基酸序列如Seq ID No.1或Seq ID No.2所示；/n所述的重复次数为1-128；/n所述的NTD，即氨基端结构域的氨基酸序列如Seq ID No.3所示；/n所述的CTD，即羧基端结构域的氨基酸序列如Seq ID No.4所示；/n所述的RP重复结构域的氨基酸序列来源于Nephila clavipes MaSp1或Nephilaclavipes MaSp2。/n

【技术特征摘要】
1.一类重组蛛丝蛋白，其特征在于，分子结构为NTD-(RP)n-CTD，其中整数n代表RP重复结构域的重复次数，每个RP重复结构域的氨基酸序列如SeqIDNo.1或SeqIDNo.2所示；
所述的重复次数为1-128；
所述的NTD，即氨基端结构域的氨基酸序列如SeqIDNo.3所示；
所述的CTD，即羧基端结构域的氨基酸序列如SeqIDNo.4所示；
所述的RP重复结构域的氨基酸序列来源于NephilaclavipesMaSp1或NephilaclavipesMaSp2。


2.一种制备权利要求1所述重组蛛丝蛋白的方法，其特征在于，通过将表达有重组蛛丝蛋白的大肠杆菌菌体破壁后经过酸处理、透析、加热、硫酸铵沉淀，实现重组蛛丝蛋白溶液从其良溶剂向不良溶剂的转变。


3.根据权利要求2所述的方法，其特征是，所述的转变，通过透析实现；透析所使用的重组蛛丝蛋白良溶剂为含有10摩尔以下尿素和/或0.5摩尔以下氯化钠的溶液；透析所使用的重组蛛丝蛋白不良溶剂为含有0.5摩尔以下尿素和/或0.1摩尔以下氯化钠的溶液。


4.根据权利要求3所述的方法，其特征是，向含有蛛丝蛋白的良溶剂中直接添加大分子拥挤剂实现重组蛛丝蛋白溶液从其良溶剂向不良溶剂的转变，其中：重组蛛丝蛋白良溶剂为含有1摩尔以下...

【专利技术属性】
技术研发人员：夏小霞，胡春飞，钱志刚，
申请(专利权)人：上海交通大学，
类型：发明
国别省市：上海;31