【技术实现步骤摘要】
一种蛋白质的纯化方法
本专利技术涉及一种蛋白质的纯化方法，具体地本专利技术涉及一种用于真核表达的蛋白质的纯化方法。
技术介绍
蛋白质的原核表达具有操作简单，表达周期短及生产成本低的优势，但是通过原核表达系统表达的蛋白质没有经过修饰，一般不具有天然蛋白质结构及功能，需要后期修饰。真核表达系统表达的蛋白质可以克服上述缺陷，其可以表达类似天然的蛋白质，并具有相应的功能，也是现有市售蛋白质药物的常用表达系统。CHO表达系统是被目前被广泛应用于大分子蛋白药物制备的真核表达系统。尤其是抗体类药物，大部分均为CHO表达系统表达。CHO细胞属于哺乳动物细胞，其进化程度高，有完善的蛋白翻译及修饰系统（含有丰富的内质网和高尔基体），因而其表达的蛋白从结构到功能均与人体内蛋白相近，作为药用蛋白，副作用的风险较小。年龄相关性黄斑退行性病变（AMD）是45岁以上中老年高发性致盲眼病，为黄斑区结构的衰老性改变，其中与血管新生相关的湿性AMD是致盲的主要疾病类型，如不治疗可在3个月内视力急剧下降，2年内85.1%的患者视力降至法定盲。
【技术保护点】
1.一种蛋白质的纯化方法，其特征在于，包含以下步骤：1）亲和层析；2）酸性溶液环境孵育；3）羟基磷灰石层析；4）阳离子交换层析；5）过滤。/n
【技术特征摘要】
1.一种蛋白质的纯化方法，其特征在于，包含以下步骤：1）亲和层析；2）酸性溶液环境孵育；3）羟基磷灰石层析；4）阳离子交换层析；5）过滤。
2.根据权利要求1所述的蛋白质的纯化方法，其特征在于，所述的亲和层析填料为ProteinL琼脂糖凝胶。
3.根据权利要求1所述的蛋白质的纯化方法，其特征在于，所述的酸性溶液环境孵育，孵育条件为pH：3.5~3.8，温度：18~25℃，孵育2~12小时。
4.根据权利要求1所述的蛋白质的纯化方法，其特征在于，所述的离子交换层析，包括以下步骤：1）样品处理；2）平衡缓冲液平衡层析柱；3）样品流经层析柱，上样；4）上样后，平衡缓冲液再次平衡层析柱；5）清洗；6）洗脱。
5.根据权利要求4所述的蛋白质的纯化方法，其特征在于，所述的离子交换层析，包括以下步骤：1）样品处理，经过羟基磷灰石层析后的含有目标蛋白质的洗脱液作为离子交换层析的样品，以1:1体积比稀释样品；2）平衡缓冲液平衡层析柱，以pH4.0~5.0的20mmol/L醋酸作为平衡缓冲液，以不少于2~5倍的柱体积平衡层析柱；3）上样，将经过处理的样品经过离子交换层析柱，使其与离子交换填料相互作用；4）上样后，平衡缓冲液再次平衡层析柱，以pH4.0~5.0的20mmol/L醋酸作为平衡缓冲液，以不少于2~5倍的柱体积再次平衡层析柱；5）清洗，以pH5.0~6.0、含有50mmol/L氯化钠的20mmol/L醋酸，为清洗液，以9~13倍柱体积进行清洗；6）洗脱，以pH6.0~7.5，50mmol/L的磷酸盐缓冲液作为洗脱液，检测紫外吸收，收集目标蛋白质洗脱液。
6.根据权利要求1所述的蛋白质的纯化方法，其特征在于，所述的过滤包括除病毒过滤、超滤浓缩...
【专利技术属性】
技术研发人员：郭清城，徐进，温云平，
申请(专利权)人：上海百迈博制药有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31
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