一种对生物细胞粘度响应的Turn-on型荧光分子探针及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及荧光分子探针检测技术领域，特别涉及一种对生物细胞粘度响应的Turn‑on型荧光分子探针及其制备方法和应用。2‑2‑2‑氯‑3‑(1,3‑二氢‑3,3‑二甲基‑1‑丙基‑2‑氢‑吲哚‑2‑亚基)亚乙基‑1‑环己烯‑1‑基乙烯基‑3,3‑二甲基‑1‑丙基吲哚鎓氯化物和四氮唑为反应原料，得到2‑[2‑(2‑氯环己酮)]‑3,3‑二甲基‑1‑盐酸氯胍‑3‑氢‑吲哚为荧光基团。本发明专利技术基于分子的旋转，扭转分子内电荷转移机制，对生物细胞内粘度敏感，通过提高荧光强度或者延长荧光寿命来响应增加的粘度，具有良好的荧光寿命和对粘度变化的高灵敏性，发射波长在红光部分，有较小的荧光背景干扰。

A turn on fluorescent molecular probe responsive to cell viscosity and its preparation and Application

【技术实现步骤摘要】
一种对生物细胞粘度响应的Turn-on型荧光分子探针及其制备方法和应用
本专利技术涉及荧光分子探针检测
，特别涉及一种对生物细胞粘度响应的Turn-on型荧光分子探针及其制备方法和应用。
技术介绍
细胞内粘度的测定一直是化学生物学研究的难题之一，尽管粘度长期以来被公认为是各种生物系统中重要的微环境参数，粘度通过影响物质的流动性而有助于生物功能。然而，传统的用于宏观液体的粘度计不能用于活细胞，这就需要开发新的工具。据我们所知，荧光探针作为细胞生物学的有力工具，可以满足对活细胞内粘度的检测。
技术实现思路
针对现有技术存在的不足，本专利技术所要解决的技术问题是，提供一种对生物细胞粘度响应的Turn-on型荧光分子探针及其制备方法和应用，基于分子的旋转，扭转分子内电荷转移机制，对生物细胞内粘度敏感，通过提高荧光强度或者延长荧光寿命来响应增加的粘度，具有良好的荧光寿命和对粘度变化的高灵敏性，发射波长在红光部分，有较小的荧光背景干扰，可用于荧光成像及进行渗透性较强的生物学研究。本专利技术为实现上述目的采用的技术方本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种对生物细胞粘度响应的Turn-on型荧光分子探针，其特征在于：2-2-2-氯-3-(1,3-二氢-3,3-二甲基-1-丙基-2-氢-吲哚-2-亚基)亚乙基-1-环己烯-1-基乙烯基-3,3-二甲基-1-丙基吲哚鎓氯化物和四氮唑为反应原料，得到2-[2-(2-氯环己酮)]-3,3-二甲基-1-盐酸氯胍-3-氢-吲哚为荧光基团，该分子探针优选为2-[2-(2,3,4,5,6,7,8,9,13,14-十氢)]-12氢-1,10-呋喃-(1,4,7,10-四氮唑)-15-乙烯基-3,3-二甲基-正丙基-3氢-吲哚，其化学结构式为：/n

【技术特征摘要】
1.一种对生物细胞粘度响应的Turn-on型荧光分子探针，其特征在于：2-2-2-氯-3-(1,3-二氢-3,3-二甲基-1-丙基-2-氢-吲哚-2-亚基)亚乙基-1-环己烯-1-基乙烯基-3,3-二甲基-1-丙基吲哚鎓氯化物和四氮唑为反应原料，得到2-[2-(2-氯环己酮)]-3,3-二甲基-1-盐酸氯胍-3-氢-吲哚为荧光基团，该分子探针优选为2-[2-(2,3,4,5,6,7,8,9,13,14-十氢)]-12氢-1,10-呋喃-(1,4,7,10-四氮唑)-15-乙烯基-3,3-二甲基-正丙基-3氢-吲哚，其化学结构式为：





2.一种对生物细胞粘度响应的Turn-on型荧光分子探针的制备方法，荧光分子探针具有权利要求1所述的结构，其特征在于，包括以下步骤：
将2-2-2-氯-3-(1,3-二氢-3,3-二甲基-1-丙基-2-氢-吲哚-2-亚基)亚乙基-1-环己烯-1-基乙烯基-3,3-二甲基-1-丙基吲哚鎓氯化物加入到烧瓶中，再加四氮唑，最后加入氯仿做为溶剂，70-90℃进行反应，反应结束，待溶液冷却到室温，柱层析法分离，得到产物2-[2-(2-氯环己酮)]-3,3-二甲基-1-盐酸氯胍-3-氢-吲哚为荧光基团，2-[2-(2,3,4,5,6,7,8,9,13,14-十氢)]-12氢-1,10-呋喃-(1,4,7,10-四氮唑)-15-乙烯基-3,3-二甲基-正丙基-3氢-吲哚,命名为F474。


3.根据权利要求2所述的对生物细胞粘度响应的Turn-on型荧光分子探针的制备方法，其特征是：
所述2-2-2-氯-3-(1,3-二氢-3,3-二甲基-1-丙基-2-氢-吲哚-2-亚基)亚乙基-1-环己烯-1-基乙烯基-3,3-二甲基-1-丙基吲哚鎓氯化物与四氮唑的摩尔比优选为1:5；
所述反应的时间优选为12h；
所述反应温度优选为80℃。


4.一种对生物细胞粘度响应的Turn-on型荧光分子探针的应用，所述分子探针具有如权利要求1所述的结构，或通过权利要求2-3任一项所述的制备方法制备，其特征在于：应用于检测生物细胞内粘度以及应用于检测活细胞粘度变化及荧光成像。


5.根据权利要求4所述的对生物细胞粘度响应的Turn-on型荧光分子探针的应用，其特征是：建立分子探针F474对粘度的滴定线性曲线步骤包括，
(1)配制pH＝7.40，浓度为20mM的PBS缓冲盐溶液；浓度为1mM的分子探针F474的DMSO溶液；
(2)分别取甲醇与丙三醇比例为：10:0，8:2，7:3，6:4，5:5，4:6，3:7，2:8，1:9和0:10的溶液共10份，在试管内混和均匀，然后再分别加入10μL浓度为1mM的分子探针F474的DMSO溶液，混合均匀，在荧光比色皿中完成测样；
(3)通过荧光分光光度计测试荧光强度，得到荧光强度比值，检测细胞粘度的荧光强度的激发波长为400nm；
(4)分别以丙三醇的含量为横坐标，以荧光强度比值为纵坐标，得到关于粘度...

【专利技术属性】
技术研发人员：李赞，陆姣，尤进茂，孙志伟，谭江坤，
申请(专利权)人：曲阜师范大学，
类型：发明
国别省市：山东;37