一种用于检测ONOO制造技术

本发明专利技术涉及荧光探针技术领域，特别涉及一种用于检测ONOO

One for detecting ONOO

The invention relates to the technical field of fluorescent probes, in particular to a method for detecting ONOO

【技术实现步骤摘要】
一种用于检测ONOO-的氧杂蒽衍生物及其合成方法和应用
本专利技术涉及荧光探针
，特别涉及一种用于检测ONOO-的氧杂蒽衍生物及其合成方法和应用。
技术介绍
过氧亚硝酸(ONOO-)是一种半衰期很短的强氧化剂和亲核试剂，它属于反应活性很强的活性氧簇(HROS)。ONOO-是由一氧化氮自由基(·NO)和超氧根自由基(·O2-)以自由扩散的形式产生的，扩散速率为(～1×1010M-1s-1)。ONOO-主要在巨噬细胞、内皮细胞、血小板、白细胞和神经元中生成并且在生物化学领域具有重要作用。ONOO-能够直接氧化/硝化细胞中的蛋白质、酯类或者核酸等，破坏细胞结构和功能，最终导致细胞死亡。另一方面，细胞也可以利用产生的ONOO-来抵御微生物的入侵。由于直接检测ONOO-的浓度具有很大的困难，因此在生物领域有关ONOO-所涉及的诸多有益功能仍然存在争议或者没有阐述清楚。因此开发能够特异性监控ONOO-水平的荧光探针成为广大科研工作者的一种挑战。在过去的几年里，科研工作者设计开发了一系列的基于荧光增强型的ONOO-探针，有一些还用在了生物学比较本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于检测ONOO

【技术特征摘要】
1.一种用于检测ONOO-的氧杂蒽衍生物，其特征在于，以9-(2-羧苯基)-6(二乙氨基)-1,2,3,4-四氢夹氧杂蒽为荧光基团，以活化的C＝C双键为反应活性基团；该氧杂蒽衍生物优选为9-(2-羧苯基)-6(二乙氨基)-4(4-苯亚甲基)-1,2,3,4-四氢夹氧杂蒽，其化学结构式为：





2.一种根据权利要求1所述的用于检测ONOO-的氧杂蒽衍生物的合成方法，其特征在于，包括以下步骤：



(1)将浓硫酸置入容器中，再加入环己酮和2-[(4-二乙胺基)-2羟基苯甲酰]苯甲酸，(70-90)℃进行反应，反应结束，待溶液冷却到室温，倒入冰水中，搅拌均匀，然后向混合液体中滴加高氯酸，析出固体，得到中间产物F376，F376为9-(2-羧苯基)-6(二乙氨基)-1,2,3,4-四氢夹氧杂蒽；
(2)将步骤(1)得到的中间产物F376溶解于无水乙醇中，加入4-甲氧基苯甲醛，在(60-90)℃下搅拌回流后，冷却至室温后，将滤液旋干，通过层析柱方法得到最终产物F494，F494为9-(2-羧苯基)-6(二乙氨基)-4(4-苯亚甲基)-1,2,3,4-四氢夹氧杂蒽。


3.根据权利要求2所述的用于检测ONOO-的氧杂蒽衍生物的合成方法，其特征是：上述合成方法的具体工艺为：
在步骤(1)中，
2-[(4-二乙胺基)-2羟基苯甲酰]苯甲酸与环己酮的摩尔比优选为1:2，
反应时间优选为2h，
加样顺序优选为：先加浓硫酸，冰水浴中先搅拌5分钟，然后加入环己酮，0℃继续搅拌5分钟，最后再加入2-[(4-二乙胺基)-2羟基苯甲酰]苯甲酸，然后升温至(70-90)℃。


4.根据权利要求2所述的用于检测ONOO-的氧杂蒽衍生物的合成方法，其特征是：上述合成方法的具体工艺为：
在步骤(2)中，
中间产物F376与4-甲氧基苯甲醛的摩尔比优选为1：2，
(60-90)℃下的搅拌回流时间优选为2h。


5.一种用于检测ONOO-的氧杂蒽衍生物的应用，其特征在于，所述氧杂蒽衍生物具有如权利要求1所述的结构或者通过权利要求2-4任一项所述的方法制备，作为分子探针应用于检测ONOO-的总含量、检测细胞外源性ONOO-浓度或细胞内源性ONOO-浓度及细胞ONOO-荧光成像。


6.根据权利要求5所述的用于检测ONOO-的氧杂蒽衍生物的应用，其特征是：所述细胞内源性ONOO-浓度检测是通过添加LPS+PMA药物诱导，使细胞自己生成的ONOO-；所述细胞外源性ONOO-浓度检测是通过外部添加ONOO-，最终被细胞吸收；所述荧光成像是对细胞内的ONOO-成像。


7.根据权利要求5所述的用于检测ONOO-的氧杂蒽衍生物的应用，其特征是：建立F494分子探针与ONOO-的线性工作曲线，步骤如下：
(1)配制pH＝7.40，浓度为10mM的PBS缓冲盐溶液；配制浓度为1mM的ONOO-的H2O的标准溶液、浓度为1mM的F494分子探针的DMSO溶液；
(2)分别取0μL、10μL、20μL、30μL、40μL、50μL、60μL、70uL,80μL、90μL和100μL，浓度为1mM的ONOO-的标准溶液共11份，分别加入10uL浓度为1mM的F494探针溶液，再加入1mL浓度为10mM的PBS...

【专利技术属性】
技术研发人员：尤进茂，陆姣，李赞，谭江坤，孙志伟，常芮，
申请(专利权)人：曲阜师范大学，
类型：发明
国别省市：山东;37