一种快速检测聚乙二醇修饰蛋白中间体的修饰度的方法技术

本发明专利技术提供了一种快速检测聚乙二醇修饰蛋白中间体的修饰度的方法，包括如下步骤：1）对待测样品进行预处理，方法如下：取待测样品溶液，去除溶液中干扰两相法检测游离聚乙二醇的蛋白组分和小分子杂质组分；2）采用两相法，测算步骤1）处理后的样品溶液中的游离聚乙二醇质量；3）根据步骤2）的游离聚乙二醇质量推算出待测样品的聚乙二醇修饰度。本发明专利技术还提供上述方法在检测样品溶液中聚乙二醇含量、聚乙二醇残留量或聚乙二醇修饰度方面的应用。本发明专利技术具有如下技术效果：通过实现待测样品中其他物质与游离PEG的分离，去除待测样品中非游离PEG组分，使得这些物质不干扰两相法检测游离PEG含量，从而更加精确且快速地检测PEG修饰度。

A rapid method to detect the modification degree of PEG modified protein intermediates

【技术实现步骤摘要】
一种快速检测聚乙二醇修饰蛋白中间体的修饰度的方法
本专利技术涉及药物分析领域，具体涉及聚乙二醇修饰蛋白中间体的修饰度的检测方法。
技术介绍
聚乙二醇(PEG)是一种线性、直链或带有支链的大分子聚合物，具有极低的毒性和微弱的免疫原性，易溶于水和有机溶剂。用它来共价修饰蛋白质，可以提高蛋白稳定性，延长其体内半衰期并降低免疫原性。聚乙二醇已经被广泛地应用于蛋白多肽类药物的修饰研究，蛋白质聚乙二醇化技术已经成为蛋白药物长效化、改善其体内药代动力学性质最有效的方法之一。蛋白质上可以发生PEG修饰的位点较多，当蛋白质上修饰位点与个数发生变化时，蛋白质的等电点、活性等理化性质会发生相应的变化。因此，聚乙二醇修饰蛋白的PEG平均修饰度是此类药物质量控制的重点。目前，PEG修饰度的检测方法主要有：三硝基苯磺酸(TNBS)法、荧光胺法和质谱法。TNBS法和荧光胺法原理是通过发光或显色物质结合游离氨基，通过游离氨基数来反推蛋白的聚乙二醇结合数。这三种方法分别存在如下不足：1.质谱法结果准确，优于本方法，但成本过高，不适于作为日常检测方法。...

【技术保护点】
1.一种快速检测聚乙二醇修饰蛋白中间体的修饰度的方法，其特征在于，包括如下步骤：/n1)对待测样品进行预处理，方法如下：取待测样品溶液，去除溶液中干扰两相法检测游离聚乙二醇的蛋白组分和小分子杂质组分；/n2)采用两相法，测算步骤1)处理后的样品溶液中的游离聚乙二醇质量；/n3)根据步骤2)的游离聚乙二醇质量推算出待测样品的聚乙二醇修饰度。/n

【技术特征摘要】
1.一种快速检测聚乙二醇修饰蛋白中间体的修饰度的方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)对待测样品进行预处理，方法如下：取待测样品溶液，去除溶液中干扰两相法检测游离聚乙二醇的蛋白组分和小分子杂质组分；
2)采用两相法，测算步骤1)处理后的样品溶液中的游离聚乙二醇质量；
3)根据步骤2)的游离聚乙二醇质量推算出待测样品的聚乙二醇修饰度。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤1)中，采用硫酸铵沉淀法去除蛋白组分。


3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤1)中，所述的步骤1)中，采用离心法去除小分子杂质组分。


4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的步骤1)中，所述的步骤1)中，采用超滤离心法或分子排阻离心法去除小分子杂质组分。


5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤1)中，所述的步骤1)中，串联使用硫酸铵沉淀和分子排阻离心分别去除蛋白和小分子杂质组分。


6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤1)中，所述的步骤1)中，串联使用硫酸铵沉淀和超滤离心分别去除蛋白和小分子杂质组分。


7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤2)中，测算处理后的样品溶液中的游离聚乙二醇质量的方法如下：首先将步骤1)处理后的待测样品和聚乙二醇对照品梯度溶液分别加入到硫氰酸铁-氯仿两相体系中；测定氯仿相溶液在510nm波长处的吸光度值；以对照品吸光度...

【专利技术属性】
技术研发人员：张弨，
申请(专利权)人：修正生物医药杭州研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33