【技术实现步骤摘要】
测定滤纸干血片中核苷酸代谢物的方法
本专利技术涉及生物检测领域，具体地，本专利技术涉及测定滤纸干血片中核苷酸代谢物的方法以及测定滤纸干血片中核苷酸代谢物的试剂盒。
技术介绍
核苷是一类十分重要的生物大分子，在细胞的结构、代谢、能量和功能的调节等方面起着关键作用。作为核酸的基本构成单元，核苷参与生物体基因信息的保留、复制和转录的分子机制。此外，核苷类物质具有抗病毒、抗肿瘤、免疫调节、抗炎、抗心肌缺血、改善心脑血管循环等多种生物功能。通过测定人体血液中核苷类代谢物的含量可用来评价人体的核苷代谢状况。腺苷脱氨酶和嘌呤核苷磷酸化酶是人体中两个关键的蛋白酶，腺苷脱氨酶是一种嘌呤代谢补救通路酶，催化腺苷和2'-脱氧腺苷脱氨分别生成肌苷和2'-脱氧肌苷，而嘌呤核苷磷酸化酶用于催化嘌呤核苷和脱氧核苷的磷酸分解，从而形成黄嘌呤、次黄嘌呤、尿酸等人体重要代谢物。当其中任何一种酶缺乏时，会导致其前体物质的积累，再通过其他途径产生毒性代谢物，最终导致组织和系统的永久损伤。因此，可通过检测前体物质，即相关的核苷类代谢物(腺苷、2'-脱氧腺苷、...
【技术保护点】
1.一种测定滤纸干血片中核苷酸代谢物的方法，所述核苷酸代谢物包括腺苷、2'-脱氧腺苷、鸟苷、2'-脱氧鸟苷、肌苷和2'-脱氧肌苷，其特征在于，包括：/n1)将待测滤纸干血片在提取工作液中进行萃取处理，以便获得含有所述核苷酸代谢物的萃取液；/n2)将所述萃取液进行液相色谱分离-质谱检测；/n3)基于液相色谱分离-质谱检测结果，确定所述滤纸干血片中核苷酸代谢物的产量。/n
【技术特征摘要】
20181217 CN 20181154129391.一种测定滤纸干血片中核苷酸代谢物的方法，所述核苷酸代谢物包括腺苷、2'-脱氧腺苷、鸟苷、2'-脱氧鸟苷、肌苷和2'-脱氧肌苷，其特征在于，包括：
1)将待测滤纸干血片在提取工作液中进行萃取处理，以便获得含有所述核苷酸代谢物的萃取液；
2)将所述萃取液进行液相色谱分离-质谱检测；
3)基于液相色谱分离-质谱检测结果，确定所述滤纸干血片中核苷酸代谢物的产量。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述核苷酸代谢物来源于血液样本。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述提取工作液包括所述核苷酸代谢物同位素内标准品和浓度不低于50％的甲醇，优选70％～100％甲醇，优选75％～100％甲醇，更优选75％的甲醇或100％的甲醇；
任选地，所述核苷酸代谢物同位素内标准品包括核糖2-13C-腺苷、15N4-肌苷和15N5-鸟苷；
任选地，所述核糖2-13C-腺苷、所述15N4-肌苷和所述15N5-鸟苷在所述提取工作液中的浓度为10ppb。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述萃取处理是在如下条件下进行的：
将所述待测滤纸干血片置于100μL的所述提取工作液中，并在25℃、750rpm、避光的条件下进行孵育30min。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，萃取处理后、液相色谱分离-质谱检测前，进一步将所述萃取液进行氮吹干、复溶处理和离心处理，以便获得待上样液；
任选地，所述复溶处理是在纯水中进行的。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述液相色谱分离是在如下条件下进行的：
进样体积为5uL，色谱柱为HSST3(50*2.1mm，1.7um)或HILIC，柱温为45℃，流动相A为含有0.1％甲酸的水溶液，流动相B为含有0.1％甲酸的乙腈溶液，每个样品检测时间2.0min，洗脱梯度为：
时间点min
流速ml/min
％A
0
0.5
99
0.75
0.5
99
1.0
0.5
5
1.5
0.5
5
2.0
0.5
99
。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述质谱检测是在如下条件下进行的：串联质谱仪电喷雾阳离子方式(ESI+)，多反应监测模式(MRM)，离子源温度135℃，毛细管电压为3kV，锥孔气速为150L/Hr，脱溶剂温为450℃，脱溶剂气速为900L/Hr，
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，基于液相色谱分离-质谱检测出的确定核苷酸代谢物的色谱峰面积，确定所述确定核苷酸代谢物的含量；
任选地，进一步包括同时将质控品进行核苷酸代谢物含量检测，所述质控品为含有已知浓度核苷酸代谢物的滤纸干血片。
9.一种测定滤纸干...
【专利技术属性】
技术研发人员：王远，高新彦，陈欣，徐子晨，刘勤，程丹，任艳，刘斯奇，
申请(专利权)人：深圳华大生命科学研究院，
类型：发明
国别省市：广东;44
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