一种含有噬菌体的喷雾型环境消毒剂及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种含有噬菌体的喷雾型环境消毒剂及其制备方法和应用，属于生物消毒技术领域，消毒剂的有效成分包括大肠杆菌噬菌体CCTCC NO.M2016539、金黄色葡萄球菌噬菌体CCTCC NO.M2016535和溶血性链球菌噬菌体CCTCC NO.M2019227，其配比为1:1:1，消毒剂中还包括十二烷基磺酸钠、SM缓冲液及0.1M蔗糖；将效价≥1×10

Spray type environmental disinfectant containing bacteriophage and preparation method and application thereof

【技术实现步骤摘要】
一种含有噬菌体的喷雾型环境消毒剂及其制备方法和应用
本专利技术属于生物消毒
，具体涉及一种含有噬菌体的喷雾型环境消毒剂及其制备方法和应用。
技术介绍
大肠杆菌(Escherichiacoli)，是属于肠杆菌科埃希氏菌属的革兰氏阴性兼性厌氧杆状细菌。它们主要寄居在人和动物的肠道内，并与其他兼性厌氧菌占据了肠道菌群的0.9％，绝大多数的大肠杆菌对人体无害，甚至有助于消化食物和维持人体免疫力。但研究发现，大肠杆菌少数的血清型对机体具有强致病能力，它可侵入人体胃肠道使人致病，原因是存在潜在的毒力因子，如志贺样毒素、特异粘附素和肠溶血毒素。其中志贺样毒素(Shigatoxin,Stx)是最主要的毒力基因，它可以导致患者腹痛、腹泻，严重者会出现出血性肠炎(HC)并引发溶血性尿毒症(HUS)，甚至死亡。污染的肉类食物与水果蔬菜等是大肠杆菌主要感染途径。所以我们应继续加大对大肠杆菌污染的防控，提前预防，未雨绸缪，从源头切断危害。金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)是人类的一种重要病原菌，隶属于葡萄球菌属(Staphylococcus)，有"嗜肉菌"的别称，是革兰氏阳性菌的代表，可引起许多严重感染。美国疾病控制中心报告，由金黄色葡萄球菌引起的感染占第二位，仅次于大肠杆菌。金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生问题，在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒占整个细菌性食物中毒的33％，加拿大则更多，占45％，中国每年发生的此类中毒事件也非常多。其广泛分布于自然界，可以引起人和动物的感染。在人体主要寄殖于鼻前庭黏膜、腹股沟、会阴部和新生儿脐带残端等部位，偶尔也寄生于口咽部、皮肤、肠道及阴道口等，是医院感染常见的病原体之一。在医院里，耐甲氧西林和其他抗生素的金黄色葡萄球菌广泛流行，对万古霉素不敏感的菌株也有所增加，给临床治疗带来了很大的困难。金黄色葡萄球菌除了引起感染外，其产生的肠毒素可污染食物而致食物中毒，为人类带来非常严重的公共卫生负担。溶血性链球菌在自然界中分布较广，存在于水、空气、尘埃、粪便及健康人和动物的口腔、鼻腔、咽喉中，可通过直接接触、空气飞沫传播或通过皮肤、粘膜伤口感染，被污染的食品如奶、肉、蛋及其制品也会对人类进行感染。可引起皮肤、皮下组织的化脓性炎症、呼吸道感染、流行性咽炎的爆发性流行以及新生儿败血症、细菌性心内膜炎、猩红热和风湿热、肾小球肾炎等变态反应。噬菌体是一种感染细菌的病毒，广泛分布在淡水、海洋环境、土壤表层、食物、粪便、人和动物以及其他环境。噬菌体对真核生物细胞(例如动物或植物)无害，并且很少引起人类的副作用。噬菌体是裂解性或溶源性的，但只有被证明安全和具有广泛宿主范围的裂解性噬菌体可以用于食品的生物防控。噬菌体及其内溶素可以以几种方式掺入食品系统中，例如喷雾、浸渍、固定、单独或制成“噬菌体鸡尾酒”使用。使用噬菌体的一个优点是可以选择性地控制细菌群体，而不干扰天然微生物群，并且对食物的物理化学和感官性质没有显著的影响。大肠杆菌作为一种致病性较高的细菌，用噬菌体作为其抗菌剂具有天然、安全、高效、无残留等优点，具有广阔的发展前景，因此受到越来越广泛的关注。中国专利技术专利申请CN103289963A(一株具有环境消毒能力的噬菌体及其用途)中，针对鸡养殖厂的环境污染问题，分离出了一株大肠埃希氏菌噬菌体，可作为一种安全的生物消毒剂用于环境消毒，直接喷洒于养殖场地面、空气、粉尘、鸡粪等环境中，具有明显的消毒效果。然而该专利方法制备的消毒剂仅能针对环境中的某一种单一致病菌起作用，因此杀菌的广谱性低。中国专利技术专利申请CN102349548A(一种以噬菌体为主要组分的环境生物消毒剂及其应用)中，提供了一种以大肠杆菌噬菌体、肠炎沙门氏菌噬菌体、鸡白痢沙门氏菌噬菌体、福氏志贺氏菌噬菌体、肉桂提取液、白头翁提取液、辅剂为原料制成的生物消毒剂，其中辅剂可选择水或甘油，这种生物消毒剂用于养殖场中常见致病菌的杀灭，具有针对性强、消毒效果好的优点；然而这种消毒剂中各种噬菌体的浓度仅达到了104pfu/ml，因此噬菌体的效价也较低，杀菌效果较低。同时，目前现有技术中的噬菌体消毒剂适合用于家禽、家畜类养殖场的环境消毒，不适宜用作普通空间环境中的消毒。
技术实现思路
本专利技术欲解决的问题是现有技术中噬菌体消毒剂中噬菌体的效价低、适用范围窄、以及稳定性差导致的保存时间短等技术问题。为解决上述技术问题，本专利技术公开了一种含有噬菌体的喷雾型环境消毒剂，所述消毒剂的有效成分为噬菌体菌液，所述噬菌体菌液中包括大肠杆菌噬菌体CCTCCNO.M2016539、金黄色葡萄球菌噬菌体CCTCCNO.M2016535和溶血性链球菌噬菌体CCTCCNO.M2019227。上述大肠杆菌噬菌体CCTCCNO.M2016539、金黄色葡萄球菌噬菌体CCTCCNO.M2016535和溶血性链球菌噬菌体CCTCCNO.M2019227均是从中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心购得，其中大肠杆菌噬菌体于2016年9月29日保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC，地址为：湖北省武汉市武昌区八一路299号，武汉大学，邮编430072)，其分类命名为Escherichiacolibacteriophage，保藏编号为CCTCCNO.M2016539。金黄色葡萄球菌噬菌体于2016年9月28日保藏于中国典型培养物保藏中心，其分类命名为Staphylococcusaureussubsp.aureusbacteriophage，保藏编号为CCTCCNO.M2016535。溶血性链球菌噬菌体于2019年4月3日保藏于中国典型培养物保藏中心，其分类名为Hemolyticstreptococcusbacteriophage，保藏编号为CCTCCNO.M2019227。进一步地，所述噬菌体的有效含量≥1010pfu/ml。进一步地，按体积百分数计，包括如下组分：噬菌体菌液60％-70％、0.003M十二烷基磺酸钠10％-20％、SM缓冲液5％-10％、0.1M蔗糖5％-10％。其中十二烷基磺酸钠是一种助溶剂，是市面上常用的阴离子表面活性剂；SM缓冲液是噬菌体稳定剂，可以在消毒剂的保存过程中维持噬菌体的效价；蔗糖为一种常见的二糖，和SM缓冲液联用，能够更好地稳定噬菌体的效价。进一步地，所述噬菌体菌液中大肠杆菌噬菌体CCTCCNO.M2016539、金黄色葡萄球菌噬菌体CCTCCNO.M2016535和溶血性链球菌噬菌体CCTCCNO.M2019227的配比为1:1:1。进一步地，所述SM缓冲液与0.1M蔗糖的体积比为1:1。进一步地，所述SM缓冲液的配制方法包括如下步骤：在每50ml浓度为1M、pH为7.5的Tris-HCl中加入0.1g明胶、2gMgSO4·7H2O和5.8gNaCl。本专利技术同时要求保护一种含有噬菌体的喷雾型环境消毒剂的制备方法，包括如下步骤：(1)将大肠杆菌噬菌体CCTCCNO.M2016539、金黄色葡萄球菌噬菌体CCTCCNO.M2016535和溶血性链球菌噬菌体CCTCCNO本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种含有噬菌体的喷雾型环境消毒剂，其特征在于：所述消毒剂的有效成分为噬菌体菌液，所述噬菌体菌液中包括大肠杆菌噬菌体CCTCC NO.M2016539、金黄色葡萄球菌噬菌体CCTCC NO.M2016535和溶血性链球菌噬菌体CCTCC NO.M2019227。/n

【技术特征摘要】
1.一种含有噬菌体的喷雾型环境消毒剂，其特征在于：所述消毒剂的有效成分为噬菌体菌液，所述噬菌体菌液中包括大肠杆菌噬菌体CCTCCNO.M2016539、金黄色葡萄球菌噬菌体CCTCCNO.M2016535和溶血性链球菌噬菌体CCTCCNO.M2019227。


2.如权利要求1所述的含有噬菌体的喷雾型环境消毒剂，其特征在于：所述噬菌体的有效含量≥1010pfu/ml。


3.如权利要求2所述的含有噬菌体的喷雾型环境消毒剂，其特征在于：按体积百分数计，包括如下组分：噬菌体菌液60％-70％、0.003M十二烷基磺酸钠10％-20％、SM缓冲液5％-10％、0.1M蔗糖5％-10％。


4.如权利要求3所述的含有噬菌体的喷雾型环境消毒剂，其特征在于：所述噬菌体菌液中大肠杆菌噬菌体CCTCCNO.M2016539、金黄色葡萄球菌噬菌体CCTCCNO.M2016535和溶血性链球菌噬菌体CCTCCNO.M2019227的配比为1:1:1。


5.如权利要求4所述的含有噬菌体的喷雾型环境消毒剂，其特征在于：所述SM缓冲液与0.1M蔗糖的体积比为1:1。


6.如权利要求4所述的含有噬菌体的喷雾型环境消毒剂，其特征在于：所述SM缓冲液的配制方法包括如下步骤：在每50ml浓度为1M、...

【专利技术属性】
技术研发人员：苏鑫，崔新，
申请(专利权)人：苏州十一方生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32