基于Q-6XL和4FF的腺病毒载体规模化纯化方法技术

基于Q‑6XL和4FF的腺病毒载体规模化纯化方法涉及腺病毒载体纯化领域，特别设计了基于Q‑6XL和4FF串联的规模化腺病毒纯化方案,旨在提高腺病毒载体制备的效率和纯度，最终提高腺病毒制剂的产量和质量。病毒发酵液经过离心、冻融、PEG浓缩、置换缓冲液等工艺处理后，首先采用Q‑6XL阴离子交换层析除去病毒发酵液中的宿主蛋白、宿主DNA，获得腺病毒粗纯液。然后采用4FF凝胶过滤层析(分子筛)对病毒粗纯液进行精纯，最终得到高纯度的腺病毒载体。特别的是，本方法适用于腺病毒载体规模化纯化。满足了临床阶段对于高纯度腺病毒载体用量日益增加的需求。

Large scale purification of adenovirus vector based on q-6xl and 4FF

【技术实现步骤摘要】
基于Q-6XL和4FF的腺病毒载体规模化纯化方法
:本专利技术涉及腺病毒载体纯化领域，特别设计了基于Q-6XL和4FF串联的规模化腺病毒纯化方案。旨在提高腺病毒载体制备的效率和纯度，最终提高腺病毒制剂的产量和质量。
技术介绍
:腺病毒在基因治疗方面有着巨大的潜力，其纯度、有效性、安全性有着严格的标准。病毒与传统疫苗制剂不同，腺病毒与蛋白相比理化性质不同，并且需要在纯化过程中尽可能的保持病毒活性。因此制备出满足用量的高纯度腺病毒，优化下游处理工艺是待解决的关键性问题。腺病毒载体的下游处理包括一系列旨在提高腺病毒载体制备的效率和纯度的步骤。其中腺病毒的纯化工艺是提高最终病毒制剂产量和质量的关键。在过去10年中，病毒载体的下游处理领域取得了相当大的进展。但是大部分研究工作都集中在广泛使用的疱疹病毒、慢病毒等的纯化工艺。而腺病毒的纯化工艺研究较少，特别是满足用量需求的规模化纯化工艺。腺病毒传统的纯化方法是CsCl(氯化铯)密度梯度离心法。该技术是采用高速离心加强溶液的密度梯度，根据病毒与其他分子大小、形状和密度的差异将其从污染物中进行分离。在离本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.基于Q-6XL和4FF的腺病毒载体规模化纯化方法，其特征在于，采用腺病毒感染在100rpm转速条件下培养的宿主细胞，获得病毒培养液；病毒培养液通过离心、冻融、PEG沉淀浓缩、置换缓冲液处理后，采用Q-6XL阴离子交换层析与4FF凝胶过滤层析进一步对腺病毒进行纯化。/n

【技术特征摘要】
1.基于Q-6XL和4FF的腺病毒载体规模化纯化方法，其特征在于，采用腺病毒感染在100rpm转速条件下培养的宿主细胞，获得病毒培养液；病毒培养液通过离心、冻融、PEG沉淀浓缩、置换缓冲液处理后，采用Q-6XL阴离子交换层析与4FF凝胶过滤层析进一步对腺病毒进行纯化。


2.如权利要求1中所述的方法，其特征在于，采用腺病毒感染的宿主细胞为HEK293-A，培养48小时后形成病毒空斑，收获腺病毒培养液。


3.如权利要求1中所述的方法，其特征在于，在层析...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡利明，王弘扬，黄映辉，马羚，张霖，
申请(专利权)人：北京工业大学，
类型：发明
国别省市：北京;11