【技术实现步骤摘要】
一种烟草为砧木嫁接接种番茄褪绿病毒的纯化方法、应用
本专利技术属于病毒纯化
，尤其涉及一种烟草为砧木嫁接接种番茄褪绿病毒的纯化方法、应用。
技术介绍
番茄褪绿病毒是由粉虱类害虫传播的一种新发病毒，侵染寄主植株引起严重的“黄化失调”，导致果实成熟延迟，影响产量，给种植户带来巨大的经济损失。该病害于1989年在美国弗罗里达州番茄种植区被发现，1998年首次被确定为番茄褪绿病毒，随后迅速在全球范围内暴发、流行。根据文献统计发现，除南极洲和大洋洲之外，其余5大洲20多个国家和地区均有ToCV的报道。我国首次于2004年在中国台湾检测到ToCV的发生，2012年在中国北京大兴区设施番茄和辣椒植株上检测到该病毒。目前，ToCV已在北京、山东、河南、天津、山西、江苏、辽宁、广东等番茄种植区暴发、流行，造成了严重的经济损失。ToCV属于长线形病毒科Closteroviridae毛形病毒属Crinivirus，其基因组包含两条正义单链RNA(+ssRNA)，分别包装在线形的病毒粒子中。RNA1长8594nt，包含4个ORFs，编...
【技术保护点】
1.一种以烟草为砧木嫁接接种番茄褪绿病毒的纯化方法，其特征在于，所述烟草为砧木嫁接接种番茄褪绿病毒的纯化方法以发病本氏烟为砧木，以健康番茄植株为接穗，采用劈接法将接穗番茄嫁接到砧木上；/n待接穗番茄长到一叶期，从番茄根部切断，保留地上部分作为接穗，接穗番茄下部左右各斜切出韧皮部，插入本氏烟植株切口，用嫁接夹固定。/n
【技术特征摘要】
1.一种以烟草为砧木嫁接接种番茄褪绿病毒的纯化方法，其特征在于，所述烟草为砧木嫁接接种番茄褪绿病毒的纯化方法以发病本氏烟为砧木，以健康番茄植株为接穗，采用劈接法将接穗番茄嫁接到砧木上；
待接穗番茄长到一叶期，从番茄根部切断，保留地上部分作为接穗，接穗番茄下部左右各斜切出韧皮部，插入本氏烟植株切口，用嫁接夹固定。
2.如权利要求1所述的烟草为砧木嫁接接种番茄褪绿病毒的纯化方法，其特征在于，接种的本氏烟植株置于温度26±1℃，相对湿度70±5％，光周期L:D＝16:8h的人工气候箱内进行隔虫育苗，待植株长到四叶期进行农杆菌接种，接种的步骤如下：
第一步，将30uL活化的阳性克隆农杆菌菌液加入到30mL含有抗生素的LB液体培养基中，振荡培养，离心收集菌体，MMA缓冲液重悬4h，用分光光度计调整到菌体OD600值为1.0；
第二步，选取健康生长一致的本氏烟植株用灭菌的1mL无针头注射器将0.5mL菌体浸润植株叶片背部，黑暗处理12h后，放置26±1℃，相对湿度70±5％，光周期L:D＝16:8h的人工气候箱内培养，以pCY空载质粒的农杆菌作为阴性对照；接种21d后用RT-PCR检测本氏烟植株的感病率，选择表现ToCV典型症状的本氏烟植株作为嫁接砧木。
3.如权利要求2所述的烟草为砧木嫁接接种番茄褪绿病毒的纯化方法，其特征在于，所述第一步28℃、200r/min振荡培养12h；
所述第二步放置温度26±1℃，相对湿度70±5％，光周期L:D＝16:8h的人工气候箱内培养。
...
【专利技术属性】
技术研发人员：代惠洁，赵静，薛其勤，迟文娟，刘杰，李金堂，张德珍，张然然，乔宁，
申请(专利权)人：潍坊科技学院，潍坊学院，
类型：发明
国别省市：山东;37
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