一种测定植物性食品中丁香菌酯残留量的液相色谱串联质谱法制造技术

本发明专利技术属于食品安全技术领域，涉及植物性食品中丁香菌酯残留量的检测方法。称取均匀样品，以甲醇溶液均质提取，无水硫酸镁和N‑丙基乙二胺固相吸附剂净化，高速冷冻离心后，上清液旋蒸至近干，甲醇溶解残渣，过HLB净化柱净化，洗脱液氮吹至干，流动相溶解定容，经0.22μm有机滤膜过滤，待测。待测物经液质联用仪检测，外标法定量。本发明专利技术所述检测方法前处理步骤简单新颖，除杂效果好，方法的灵敏度、回收率高，测定结果的精密度好，可以有效的检测植物性食品中丁香菌酯残留量。

A liquid chromatography tandem mass spectrometry method for the determination of Syringate residues in plant foods

【技术实现步骤摘要】
一种测定植物性食品中丁香菌酯残留量的液相色谱串联质谱法
本专利技术属于食品安全
，具体涉及一种液相色谱串联质谱测定植物性食品中丁香菌酯残留量的方法。
技术介绍
丁香菌酯，化学名称为：(E)-2-(2-(3-正丁基-4甲基-香豆素-7-基氧基)甲基苯基)-3-甲氧基丙烯酸甲酯，纯度较高的原药为乳白色或淡黄色粉末，熔点109～111℃，易溶于DMF、丙酮、甲醇，微溶于石油醚，几乎不溶于水。常温条件下不易分解。是由沈阳化工研究院研制，吉林省八达农药有限公司开发的一款高端的杀菌剂，属甲氧基丙烯酸酯类，是一种保护性杀菌剂，同时兼有一定的治疗作用。其具有广谱、低毒、高效、安全的特点，有免疫、预防、治疗、增产增收作用。对苹果树腐烂病特效，是全国防治腐烂病最具权威的药剂。杀菌谱广，对瓜果、蔬菜、果树霜霉病、晚疫病、黑星病、炭疽病、叶霉病有效；同时对轮纹病、炭疽病，棉花枯萎病，水稻瘟疫病、纹枯病，小麦根腐病，玉米小斑病亦有效。丁香菌酯对由鞭毛菌、接合菌、子囊菌、担子菌及半知菌引起的植物病害具有良好的防效。丁香菌酯在2016年在我国首次获得正式登记，制剂登记用于防止苹果树腐烂病，使用方式为涂抹。丁香菌酯杀菌效果好，低毒、低残留，作为我国自主研发产品，拥有广阔的市场前景。在《GB2763-2014食品安全国家标准食品中农药最大残留限量》中新增了丁香菌酯的最大残留限量标准，规定丁香菌酯在糙米中临时限量为0.2mg/kg，稻谷中临时限量为0.5mg/kg，苹果中临时限量为0.2mg/kg。但是目前，还没有针对丁香菌酯在食品中残留量的检测方法。在食品安全越来越受到广泛关注的前提下，很有必要开发一种植物性食品中丁香菌酯的检测方法，即有利于植物性食品的食用安全，也有利于推广丁香菌酯农药的推广使用。本法根据丁香菌酯的化学特性，优选了提取溶剂和净化方式。本法比较了甲醇、乙腈等提取剂，最终确认甲醇提取效率高，且丁香菌酯在该提取剂中能稳定存在。针对植物性食品中各种色素、脂肪酸等内源性干扰物，开发了提取过程中用无水硫酸镁和PSA吸附色素及脂肪酸，然后再用HLB固相萃取柱进一步净化的手段。本专利技术所述检测方法前处理步骤简单新颖，除杂效果好，方法的灵敏度、回收率高，测定结果的精密度好，检出限低，可以有效的检测各类植物性食品中丁香菌酯残留量。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是适用于植物性食品中丁香菌酯残留量的检测方法，能够有效的提取植物性食品中残留的丁香菌酯，并很好的去除干扰物。检出限能满足国家标准对糙米、稻谷和苹果中丁香菌酯最大残留限量的要求。本专利技术的技术方案是通过以下步骤实现的：(1)提取：称取均匀样品10g于50mL离心管中，加入30mL甲醇溶液，均质提取，8000r/min冷冻离心后，倾出上清液，残渣再用20mL甲醇溶液重复提取一次，合并上清液，加入6g无水硫酸镁和150mgN-丙基乙二胺固相吸附剂，震摇，转移上清液至旋蒸瓶中，40℃旋蒸至近干，移取2mL甲醇溶解残渣，再加入3ml水，待净化。(2)净化：HLB净化柱临用前分别用5mL甲醇、5mL水活化，将上述溶液过HLB净化柱净化；上样过程维持1滴/秒，5ml水淋洗，将净化柱抽干，然后5mL甲醇洗脱，收集洗脱液于10mL离心管中，40℃氮吹至干，移取2mL流动相溶解残渣，混匀后，过0.22μm滤膜，供液相色谱串联质谱测定(3)测定：在下述液相色谱串联质谱条件下对标准溶液和试样处理液进行测定：色谱条件：色谱柱为C18，1.7μm，2.1mm×50mm；流动相为0.1％甲酸水溶液和0.1％甲酸乙腈溶液，梯度洗脱；流速为0.3mL/min；进样量为5.0μL；柱温为40℃；梯度洗脱：起始流动相比例，0.1％甲酸水溶液；0.1％甲酸乙腈溶液95∶5；1min，0.1％甲酸水溶液：0.1％甲酸乙腈溶液95∶5；2min，0.1％甲酸水溶液：0.1％甲酸乙腈溶液50∶50；3min，0.1％甲酸水溶液：0.1％甲酸乙腈溶液50∶50；4min，0.1％甲酸水溶液：0.1％甲酸乙腈溶液5∶95；5min，0.1％甲酸水溶液：0.1％甲酸乙腈溶液5∶95；6min，0.1％甲酸水溶液：0.1％甲酸乙腈溶液95∶5；7min，0.1％甲酸水溶液：0.1％甲酸乙腈溶液95∶5；质谱条件：离子源为ESI+电喷雾离子源；检测方式为MRM多反应监测；离子源温度为120℃；去溶剂温度为450℃；母离子为437.4，定量离子为205.1，定性离子为405.3；锥孔电压为40V，定量离子碰撞能量为20eV，定性离子对碰撞能量为10eV。附图说明图1为空白苹果中添加丁香菌酯(1μg/kg)的信噪比谱图图2为10μg/L丁香菌酯标准溶液色谱图具体实施方法本专利技术将通过以下实施例作进一步说明。实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可用于本专利技术中，文中所述的较佳实施方法仅作示范之用。实施例11、仪器与试剂高效液相色谱-串联质谱仪：美国Waters，UPLC-XevoTQ；标准物质：丁香菌酯，纯度98％；甲醇：色谱纯；乙腈：色谱纯；甲酸：分析纯无水硫酸镁：分析纯；HLB固相萃取小柱：6mL，200mg；本方法中所用水均为一级水。2、仪器分析条件色谱柱为Waters，BEHC18，1.7μm，2.1mm×50mm流动相为0.1％甲酸水溶液和0.1％甲酸乙腈溶液，梯度洗脱；流速为0.3mL/min；进样量为5.0μL；柱温为40℃；梯度洗脱：起始流动相比例，0.1％甲酸水溶液；0.1％甲酸乙腈溶液95∶5；1min，0.1％甲酸水溶液：0.1％甲酸乙腈溶液95∶5；2min，0.1％甲酸水溶液：0.1％甲酸乙腈溶液50∶50；3min，0.1％甲酸水溶液：0.1％甲酸乙腈溶液50∶50；4min，0.1％甲酸水溶液：0.1％甲酸乙腈溶液5∶95；5min，0.1％甲酸水溶液：0.1％甲酸乙腈溶液5∶95；6min，0.1％甲酸水溶液：0.1％甲酸乙腈溶液95∶5；7min，0.1％甲酸水溶液：0.1％甲酸乙腈溶液95∶5；质谱条件：离子源为ESI+电喷雾离子源；检测方式为MRM多反应监测；离子源温度为120℃；去溶剂温度为450℃；母离子为437.4，定量离子为205.1，定性离子为405.3；锥孔电压为40V，定量离子碰撞能量为20eV，定性离子对碰撞能量为10eV。3、线性方程标准储备液配制：称取10mg丁香菌酯标准物质，用甲醇溶解并定容至10mL，标准储备液浓度为本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种测定植物性食品中丁香菌酯残留量的液相色谱串联质谱法，其特征在于，包括以下步骤：/n(1)提取：/n称取均匀样品10g于50mL离心管中，加入30mL甲醇，均质提取，8000r/min冷冻离心后，倾出上清液，残渣再用20mL甲醇溶液重复提取一次；合并上清液，加入6g无水硫酸镁和150mgN-丙基乙二胺固相吸附剂，震摇，转移上清液至旋蒸瓶中，40℃旋蒸至近干，移取2mL甲醇溶解残渣，再加入3ml水，待净化；/n(2)净化：/nHLB净化柱临用前分别用5mL甲醇、5mL水活化，将上述溶液过HLB净化柱净化；上样过程维持1滴/秒，5ml水淋洗，将净化柱抽干，然后5mL甲醇洗脱，收集洗脱液于10mL离心管中，40℃氮吹至干，移取2mL流动相溶解残渣，混匀后，过0.22μm滤膜，供液相色谱串联质谱测定；/n(3)测定：在下述液相色谱串联质谱条件下对标准溶液和试样处理液进行测定：/n色谱条件：色谱柱为C18，1.7μm，2.1mm×50mm；/n流动相为0.1％甲酸水溶液和0.1％甲酸乙腈溶液，梯度洗脱；/n流速为0.3mL/min；/n进样量为5.0μL；/n柱温为40℃；/n梯度洗脱：起始流动相比例，0.1％甲酸水溶液；0.1％甲酸乙腈溶液95∶5；1min，0.1％甲酸水溶液∶0.1％甲酸乙腈溶液95∶5；2min，0.1％甲酸水溶液∶0.1％甲酸乙腈溶液50∶50；3min，0.1％甲酸水溶液∶0.1％甲酸乙腈溶液50∶50；4min，0.1％甲酸水溶液∶0.1％甲酸乙腈溶液5∶95；5min，0.1％甲酸水溶液∶0.1％甲酸乙腈溶液5∶95；6min，0.1％甲酸水溶液∶0.1％甲酸乙腈溶液95∶5；7min，0.1％甲酸水溶液∶0.1％甲酸乙腈溶液95∶5；/n质谱条件：/n离子源为ESI...

【技术特征摘要】
1.一种测定植物性食品中丁香菌酯残留量的液相色谱串联质谱法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)提取：
称取均匀样品10g于50mL离心管中，加入30mL甲醇，均质提取，8000r/min冷冻离心后，倾出上清液，残渣再用20mL甲醇溶液重复提取一次；合并上清液，加入6g无水硫酸镁和150mgN-丙基乙二胺固相吸附剂，震摇，转移上清液至旋蒸瓶中，40℃旋蒸至近干，移取2mL甲醇溶解残渣，再加入3ml水，待净化；
(2)净化：
HLB净化柱临用前分别用5mL甲醇、5mL水活化，将上述溶液过HLB净化柱净化；上样过程维持1滴/秒，5ml水淋洗，将净化柱抽干，然后5mL甲醇洗脱，收集洗脱液于10mL离心管中，40℃氮吹至干，移取2mL流动相溶解残渣，混匀后，过0.22μm滤膜，供液相色谱串联质谱测定；
(3)测定：在下述液相色谱串联质谱条件下对标准溶液和试样处理液进行测定：
色谱条件：色谱柱为C18，1.7μm，2.1mm×50mm；
流动相为0.1％甲酸水溶液和0.1％甲酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：李庆，熊敏，
申请(专利权)人：杭州谱尼检测科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33