一种L-氨基酸脱氨酶突变体的制备及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种L‑氨基酸脱氨酶突变体的制备及其应用，属于基因工程技术领域。本发明专利技术的改造方法通过pmirLAAD的蛋白质改造，通过分析pmirLAAD产物结合位点周围柔性Loop环结构，并设计最佳突变体，克服了之前野生型的酶由于产物抑制而导致催化效率的降低，并通过实验验证。最终得到最佳突变体pmirLAAD

Preparation and application of a mutant of L-amino acid deaminase

【技术实现步骤摘要】
一种L-氨基酸脱氨酶突变体的制备及其应用
本专利技术涉及一种L-氨基酸脱氨酶突变体的制备及其应用，属于基因工程

技术介绍
L-氨基酸脱氨酶(LAAD)是一种能够催化L-氨基酸生成α-酮酸的黄素氧化酶。研究人员对L-氨基酸脱氨酶的空间结构、底物特异性、以及其对非天然底物的催化能力方面进行过大量的研究，近年来，该酶在生物转化生产α-酮酸方面的应用逐渐引起研究人员的关注。α-酮酸是重要的中间体，它主要应用于食品、医药、化妆品等领域，这使得酶法转化α-酮酸在工业生产上有着广泛的应用。L-氨基酸脱氨酶是黄素蛋白酶，L-氨基酸的氧化脱氨反应可以分为两个步骤：首先将氨基酸Cα上的氢转移给FAD，氨基酸变成亚氨基酸，亚氨基酸不稳定分解成α-酮酸和水。然后FADH2被氧分子氧化后，变成了还原型FAD。L-氨基酸脱氨酶底物谱广泛，催化效率高，这为异源表达氨基酸脱氨酶转化L-缬氨酸生产α-酮异戊酸提供了可能。然而，目前利用L-氨基酸改造的方法一定程度上提高了α-酮异戊酸的产量和转化率，但是产量依然较低，因此，为提高α-酮异戊酸的产量和转化率本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种L-氨基酸脱氨酶的突变体，其特征在于，所述突变体是在野生型L-氨基酸脱氨酶的第98位、第105、第106位、第341位的氨基酸中的一个或多个进行突变；所述野生型L-氨基酸脱氨酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种L-氨基酸脱氨酶的突变体，其特征在于，所述突变体是在野生型L-氨基酸脱氨酶的第98位、第105、第106位、第341位的氨基酸中的一个或多个进行突变；所述野生型L-氨基酸脱氨酶的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。


2.根据权利要求1所述的突变体，其特征在于，所述突变体为以下(a)～(g)任一：
(a)将氨基酸序列如SEQIDNO.1所示的L-氨基酸脱氨酶的第98位突变为丙氨酸；
(b)将氨基酸序列如SEQIDNO.1所示的L-氨基酸脱氨酶的第105位突变为丙氨酸；
(c)将氨基酸序列如SEQIDNO.1所示的L-氨基酸脱氨酶的第106位突变为丙氨酸；
(d)将氨基酸序列如SEQIDNO.1所示的L-氨基酸脱氨酶的第341位突变为丙氨酸；
(e)将氨基酸序列如SEQIDNO.1所示的L-氨基酸脱氨酶的第98位和105位均突变为丙氨酸；
(f)将氨基酸序列如SEQIDNO.1所示的L-氨基酸脱氨酶的第98位、第105位和第106位进行突变，获得的突变体氨基酸序列如SEQIDNO.13；
(g)将氨基酸序列如SEQIDNO.1所示的L-氨基酸脱氨酶的第98位、第105位、第106位和第341位进行突变，获得的突变体氨...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴静，裴杉杉，刘佳，宋伟，陈修来，罗秋玲，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32