一种L-谷氨酸脱氢酶突变体及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种L‑谷氨酸脱氢酶突变体，所述L‑谷氨酸脱氢酶突变体的氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.5或SEQ ID NO.9所示。本发明专利技术还公开了该L‑氨基酸脱氢酶突变体在制备L‑草铵膦或其盐中的应用。利用本发明专利技术的L‑谷氨酸脱氢酶突变体制备L‑草铵膦或其盐时与野生型谷氨酸脱氢酶突变体相比，比酶活更高，从而酶的作用效率提高，降低了反应的成本，利于工业化生产。

A mutant of L-glutamate dehydrogenase and its application

【技术实现步骤摘要】
一种L-谷氨酸脱氢酶突变体及其应用
本专利技术属于生物
，具体涉及一种L-谷氨酸脱氢酶突变体及其应用。
技术介绍
草铵膦(2-氨基-4-[羟基(甲基)膦酰基]丁酸)是由赫斯特公司80年代开发的广谱触杀型除草剂。目前世界上的三大除草剂是草甘膦、草铵膦、百草枯，相对于草甘膦和百草枯，草铵膦具有优异的除草性能及较小的副作用。草铵膦有两种光学异构体，分别为D-草铵膦和L-草铵膦，但是只有L-草铵膦具有除草活性，因此发展L-草铵膦的方法对于提高原子经济性、降低使用成本、减轻环境压力具有重要意义。目前，制备L-草铵膦的方法主要有手性拆分法，化学合成法和生物催化法。手性拆分法如CN1053669C公开了利用奎宁生物碱作为拆分剂的方法，重结晶出L-草铵膦奎宁盐，然后用酸中和盐可以得到L-草铵膦。同时利用5-硝基水杨醛或3,5-二硝基水杨醛作为消旋化试剂消旋化未反应的D-草铵膦，得到DL-草铵膦，继续用于拆分反应。但是这种方法需要昂贵的手性拆分试剂，以及多步重结晶，操作繁琐，还不是一种理想的方法。化学合成法如US693644本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种L-谷氨酸脱氢酶突变体，其特征在于，所述L-谷氨酸脱氢酶突变体的氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.5或SEQ ID NO.9所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种L-谷氨酸脱氢酶突变体，其特征在于，所述L-谷氨酸脱氢酶突变体的氨基酸序列如序列表中SEQIDNO.3、SEQIDNO.5或SEQIDNO.9所示。


2.如权利要求1所述的L-谷氨酸脱氢酶突变体，其特征在于，所述L-谷氨酸脱氢酶突变体的核苷酸序列如序列表中SEQIDNO.4、SEQIDNO.6或SEQIDNO.10所示。


3.一种分离的核酸，其特征在于，所述核酸编码如权利要求1～2任一项所述的L-谷氨酸脱氢酶突变体。


4.一种包含如权利要求3所述的核酸的重组表达载体。


5.一种包含如权利要求3所述的核酸或如权利要求4所述的重组表达载体的转化体。


6.一种L-草铵膦盐的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：在反应溶剂、L-谷氨酸脱氢酶突变体、无机氨基供体和还原型辅酶NADPH的存在下，将2-氧代-4-(羟基甲基氧膦基)丁酸盐进行氨化反应，即得L-草铵膦盐；其中，所述L-谷氨酸脱氢酶突变体为如权利要求1～2任一项所述的L-谷氨酸脱氢酶突变体。


7.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述的制备方法还包括以下步骤：在D-氨基酸氧化酶的存在下，将D-草铵膦盐进行氧化反应，得到所述的2-氧代-4-(羟基甲基氧膦基)丁酸盐即可；
较佳地，所述的D-草铵膦盐单独存在、或、与L-草铵膦盐共同存在；所述的与L-草铵膦盐共同存在的形式为D型富集的草铵膦盐、L型富集的草铵膦盐或消旋体草铵膦盐；
和/或，所述的D-氨基酸氧化酶的浓度为0.6-6U/mL，较佳地为1.8U/mL；
和/或，所述的氧化反应在通气的条件下进行，所述通气较佳地为通入空气或氧气；所述通气的速率较佳地为0.5-1VVM；
和/或，所述的氧化反应在过氧化氢酶的存在下进行；
和/或，所述的D-草铵膦盐的浓度为100-600mM，较佳地为200mM；
和/或，所述的氧化反应的反应体系的pH为7-9，较佳地为8；
和/或，所述的氧化反应的反应体系的温度为20-50℃，较佳地为20℃。


8.如权利要求6或7所述的制备方法，其特征在于，所述的L-谷氨酸脱氢酶突变体的浓度为0.05-3U/ml，较佳地为0.1-1U/ml，例如为0.15U/ml；
和/或，所述的无机氨基...

【专利技术属性】
技术研发人员：田振华，程占冰，丁少南，焦琦，徐文选，黄瑶，江枫，汪媚妮，
申请(专利权)人：上海弈柯莱生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31