一种人多能干细胞向外胚层分化的方法技术

本发明专利技术提供了一种人多能干细胞向外胚层分化的方法，属于干细胞分化培养技术领域，包括将人多能干细胞经完全培养基重悬后接种于载体中，24h后更换外胚层分化第一阶段培养基；诱导培养48h后，实现人多能干细胞的外胚层分化。本发明专利技术细胞接种后，只需2次换液，只含有三种成分，无需昂贵的血清和细胞因子，实验周期短，结果特异性好。

A method of differentiation of human pluripotent stem cells into ectoderm

【技术实现步骤摘要】
一种人多能干细胞向外胚层分化的方法
本专利技术属于干细胞分化培养
，尤其涉及一种人多能干细胞向外胚层分化的方法。
技术介绍
多能干细胞(pluripotentstemcell，PSC)，包括胚胎干细胞(embryonicstemcell，ESC)和诱导多能干细胞(inducedpluripotentstemcell，iPSC)，是一类具有自我更新以及多向分化潜能的细胞群体，是研究调控细胞命运转换以及动物发育分子机制的模型，也可以在体外诱导分化成功能细胞之后，用于组织或器官再生和药物筛选。PSC在多种细胞因子相互作用下，可分化形成内、中、外3个胚层。外胚层可进一步发育为躯体的表皮和神经系统。PSC向外胚层的分化是定向分化为相应器官细胞类型的第一步，也是作为验证PSC多向分化潜能的一个重要指标，对于PSC质量检测和转化应用具有重要意义。目前常用的PSC胚层分化方法有类胚体(embryoidbody，EB)自发分化法。EB自发分化法是最早使用的用于PSC多能性鉴定的方法，通常使用高密度的PSC在低贴附的培养皿中自发聚集形成类胚体，类胚体本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种人多能干细胞向外胚层分化的方法，其特征在于，包括以下步骤：/n1)将人多能干细胞经完全培养基重悬后接种于载体中，24h后更换外胚层分化第一阶段培养基；/n2)诱导培养48h后，实现人多能干细胞的外胚层分化；/n所述外胚层分化第一阶段培养基以DMEM/F12培养基或RPMI 1640培养基为基础培养基，包括1mg/ml血清白蛋白和1～5μMAM580；/n所述血清白蛋白包括牛血清白蛋白或人血清白蛋白。/n

【技术特征摘要】
1.一种人多能干细胞向外胚层分化的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)将人多能干细胞经完全培养基重悬后接种于载体中，24h后更换外胚层分化第一阶段培养基；
2)诱导培养48h后，实现人多能干细胞的外胚层分化；
所述外胚层分化第一阶段培养基以DMEM/F12培养基或RPMI1640培养基为基础培养基，包括1mg/ml血清白蛋白和1～5μMAM580；
所述血清白蛋白包括牛血清白蛋白或人血清白蛋白。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2)诱导培养48h后还包括，更换外胚层分化第二阶段培养基，再诱导培养24h后，实现人多能干细胞的外胚层分化；
所述外胚层分化第二阶段培养基以DMEM/F12培养基或RPMI1640培养基为基础培养基，包括1mg/ml血清白蛋白。


3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述人多能干细胞经TrypLEselect或A...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘中民，贾文文，鲁济真，汤红明，
申请(专利权)人：上海市东方医院同济大学附属东方医院，
类型：发明
国别省市：上海;31