一种高效鉴定水稻增强子的原生质体验证方法技术

本发明专利技术公开了一种高效鉴定水稻增强子的原生质体验证方法，包括如下步骤：(1)构建载体：正对照载体采用p1300LV载体，同时构建相应的负对照载体；(2)增强子的分离克隆及表达载体构建：选取增强子序列，以水稻基因组DNA为模板，PCR扩增得到目的片段，再与BsaI酶线性化的负对照载体连接，得到增强子表达载体；(3)制备水稻原生质体；(4)水稻原生质体的转化：将增强子表达载体与水稻原生质体在PEG介导下共培养，进行转化；(5)显微镜观察荧光信号。本发明专利技术方法首次提出了通过水稻瞬时转化验证增强子活性的方法，高效，快捷。

An efficient protoplast verification method for the identification of rice enhancers

【技术实现步骤摘要】
一种高效鉴定水稻增强子的原生质体验证方法
本专利技术涉及增强子鉴定方法，特别涉及一种高效鉴定水稻增强子的原生质体验证方法。
技术介绍
增强子是一种重要的顺式作用元件，它在基因组的分布具有不确定性，所调控的靶基因距离也不确定，可位于靶基因启动子上游、基因下游、基因内或基因间区。增强子序列不保守，没有明显序列特征，给鉴定工作带来了困难。增强子与反式作用因子结合发挥作用，它通过招募不同反式作用因子来重塑染色质，改变染色质构象，进而增强子激活靶基因的转录，参与基因表达调控。在植物中通过建立增强子捕获株系突变体库筛选到有功能的增强子。但该方法需要筛选大量的转基因材料，因此研究周期长，结果随机性强和可靠性差。近年来，随着ChIP-seq、DNase-seq等技术的发展，借助生物信息学的方法越来越多的增强子被预测出来。但现有验证技术不够高效、快捷。
技术实现思路
专利技术目的：本专利技术目的是提供一种高效鉴定水稻增强子的原生质体验证方法。本专利技术构建验证增强子活性的表达载体，结合水稻原生质体瞬时转化方法，转化后在共聚焦显微镜下观察转化子本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种高效鉴定水稻增强子的原生质体验证方法，其特征在于：包括如下步骤：/n(1)构建载体：正对照载体采用p1300LV载体，同时构建相应的负对照载体；/n(2)增强子的分离克隆及表达载体构建：选取增强子序列，以水稻基因组DNA为模板，PCR扩增得到目的片段，再与BsaI酶线性化的负对照载体连接，得到增强子表达载体；/n(3)制备水稻原生质体；/n(4)水稻原生质体的转化：将增强子表达载体与水稻原生质体在PEG介导下共培养，进行转化；/n(5)显微镜观察荧光信号。/n

【技术特征摘要】
1.一种高效鉴定水稻增强子的原生质体验证方法，其特征在于：包括如下步骤：
(1)构建载体：正对照载体采用p1300LV载体，同时构建相应的负对照载体；
(2)增强子的分离克隆及表达载体构建：选取增强子序列，以水稻基因组DNA为模板，PCR扩增得到目的片段，再与BsaI酶线性化的负对照载体连接，得到增强子表达载体；
(3)制备水稻原生质体；
(4)水稻原生质体的转化：将增强子表达载体与水稻原生质体在PEG介导下共培养，进行转化；
(5)显微镜观察荧光信号。


2.根据权利要求1所述的高效鉴定水稻增强子的原生质体验证方法，其特征在于：所述步骤(1)中负对照载体构建是将p1300LV载体线性化后，PCR扩增启动子序列，得到序列S...

【专利技术属性】
技术研发人员：张韬，李鑫琪，刘鹏，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32