一种基于病毒鉴定的质谱数据库建立方法技术

本发明专利技术涉及一种基于病毒鉴定的质谱数据库建立方法及其应用。本数据库的建立主要有两部分：首先是针对样品的处理方法，其目的是为了得到较好的待测样品的一级质谱图；其次数据库建立，该数据库主要针对待测样品的一级质谱图,以及低分子量端和高分子量端的特征图谱建立。本发明专利技术对于病毒鉴定有显著效果，具有高通量分析检测及鉴定的优势，并且可用于生物安全、公共卫生领域。

A method of building mass spectrometry database based on virus identification

【技术实现步骤摘要】
一种基于病毒鉴定的质谱数据库建立方法
本专利技术涉及一种基于病毒鉴定的质谱数据库建立方法及其应用。技术背景众所周知，病毒是一种个体微小、无完整细胞结构、只含一种遗传物质(DNA或RNA)、且必须在活细胞内寄生并以复制方式增殖的非细胞型生物。每种病毒都有自身独特的遗传物质和蛋白质组成，且形态多种多样，主要有球形，杆形和蝌蚪形。其内部有一个或多个核酸分子(DNA或RNA)组成的基因组，外部有一层蛋白或脂蛋白的保护性外壳。而病毒的流行及爆发对人类生产生活会产生巨大影响，严重威胁公众健康。因此对病毒的快速、准确地鉴定及检测，以及对于病毒病的预防及控制是非常重要和紧迫的。病毒的常用检测方法主要有病毒分离鉴定和免疫学检测方法。病毒分离是病毒检测的传统方法之一，包括鸡胚接种和细胞培养。而分离病毒主要用马达犬肾细胞、人前皮肤纤维细胞、Vero细胞等为宿主系统。免疫学检测方法中较为常用的是基于直接荧光抗体检测和免疫胶体金层析方法的抗原检测，以及基于核酸杂交、逆转录——聚合酶链反应、多重逆转录——聚合酶链反应、酶联免疫PCR和实时定量的病毒核酸检测(J本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于病毒鉴定的质谱数据库建立方法，其特征在于：/n(1)病毒样品的预处理：通过超滤、离心、萃取、透析方法中的一种或两种及以上方法将病毒样品进行浓缩纯化；/n蛋白提取：在浓缩纯化的病毒样品中加入酸并充分混合，然后再加入溶剂并充分混合，得到预处理样品；/n(2)病毒数据库的谱图采集及数据库建立：将预处理得到的病毒样品与CHCA(α-氰基-4-羟基肉桂酸)、SA(芥子酸)、DHB(2,5-二羟基苯甲酸)基质中的一种或两种以上均点于靶板上，点靶的方式为分层点样、混合点样、“三明治”点样方法中的一种或两种以上，进行病毒MALDI谱图的采集，采集得到的谱图进行数据库建立。/n

【技术特征摘要】
1.一种基于病毒鉴定的质谱数据库建立方法，其特征在于：
(1)病毒样品的预处理：通过超滤、离心、萃取、透析方法中的一种或两种及以上方法将病毒样品进行浓缩纯化；
蛋白提取：在浓缩纯化的病毒样品中加入酸并充分混合，然后再加入溶剂并充分混合，得到预处理样品；
(2)病毒数据库的谱图采集及数据库建立：将预处理得到的病毒样品与CHCA(α-氰基-4-羟基肉桂酸)、SA(芥子酸)、DHB(2,5-二羟基苯甲酸)基质中的一种或两种以上均点于靶板上，点靶的方式为分层点样、混合点样、“三明治”点样方法中的一种或两种以上，进行病毒MALDI谱图的采集，采集得到的谱图进行数据库建立。


2.根据权利要求1所述的病毒数据库的谱图采集及数据库建立方法，特征在于：
点靶基质溶于溶剂中进行点靶，该溶剂含有酸；
优选基质为SA，SA基质溶于溶剂，该溶剂含有酸；通过分层点样、混合点样、“三明治”点样方法中的一种或两种及以上点于靶板上，用该SA基质与病毒样品进行病毒谱图的采集。


3.根据权利要求1或2所述的病毒数据库的谱图采集及数据库建立方法，其特征在于：选用“三明治”点样方法，首先取基质溶液滴在MALDI靶板上，待干燥后再取预处理的病毒样品滴在上面，然后自然晾干；待上述病毒样品干燥后，再在上面滴加基质溶液，最终干燥后，调整并设置MALDI参数后进行质谱谱图采集。


4.根据权利要求1、2或3所述的病毒数据库的谱图采集及数据库建立方法，其特征在于：
数据采集过程为：对MALDI的激光能量，频率，轰击次数，靶板相对移动步长，离子源电压，检测范围以及检测器增益参数进行设置，之后MALDI检测，采集病毒样品质谱数据；
数据库建立：对Biotyper的质谱分子量范围，分辨率，平滑，...

【专利技术属性】
技术研发人员：张丽华，韩国斌，刘路宽，杨开广，梁振，张玉奎，
申请(专利权)人：中国科学院大连化学物理研究所，
类型：发明
国别省市：辽宁;21