一种猕猴桃溃疡病拮抗菌株筛选方法技术

本发明专利技术公布了一种猕猴桃溃疡病拮抗菌株筛选方法，包括以下步骤：菌株的制备；菌株发酵液的制备：活性粗提物的制备等。本发明专利技术的目的是提供一种快速易行，筛选效果好，原料来源广，经济廉价的猕猴桃溃疡病拮抗菌株筛选方法，由本发明专利技术筛选出的内生放线菌可有效防治猕猴桃溃疡病，提高猕猴桃树的存活率和产果量。

A screening method for antagonistic strains of Actinidia canker

【技术实现步骤摘要】
一种猕猴桃溃疡病拮抗菌株筛选方法
本专利技术属于微生物领域，尤其涉及菌株筛选方法，具体是指一种猕猴桃溃疡病拮抗菌株筛选方法。
技术介绍
猕猴桃又名奇异果，果肉中富含有糖、多种维生素和氨基酸、有机酸、K+、Mg2+以及色素等成分，可鲜食亦可大量加工成果脯、罐头及各种饮料等，另外，猕猴桃籽、叶子、枝条、花都有进一步加工和开发的价值。因此，猕猴桃有广阔的市场发展前景和很好的研究价值。然而由丁香假单胞杆菌猕猴桃致病变种(Pseudomonassyringaepv.Actinidiae，Psa)引起的细菌性溃疡病是猕猴桃生产中面临的最大病害，猕猴桃溃疡病主要感染树干、枝条、叶片及花，引起枝干溃病或者枝叶萎蔫。猕猴桃溃疡自1980年首次在日本报道以来，已在全球猕猴桃栽培区广泛分布，危害严重，会使果实产量和质量同时下降，造成巨额经济损失。目前，化学农药仍旧是猕猴桃溃疡病的主要防治手段，但长期过量使用化学农药会导致病菌产生耐药性，使防效下降；而且化学农药的高残留，对环境具有巨大破坏作用，危害人类健康。因此，迫切需要创制高效、安全、低残留的新型农本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种猕猴桃溃疡病拮抗菌株筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：/n(1)菌株的制备：取猕猴桃叶片或枝条制成组织块，并对组织块表面进行消毒处理，将表面消毒的组织块在无菌条件下贴在淀粉酪素培养基和/或高氏一号合成培养基制成的平板中，置于26-29℃培养箱中，培养5～7d，待有菌落长出后，对菌株进行纯化，纯化后的菌株接种于斜面培养基保存备用；/n(2)菌株发酵液的制备：在培养瓶中装入小米培养基，并对其进行灭菌，冷却处理；接种纯化菌株到培养瓶中，置入26-29℃摇床，以170-190r/min转速培养4-6d，过滤并收集滤液，低温保藏备用；/n(3)活性粗提物的制备：将滤液经吸附树脂富集，用甲醇水洗...

【技术特征摘要】
1.一种猕猴桃溃疡病拮抗菌株筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)菌株的制备：取猕猴桃叶片或枝条制成组织块，并对组织块表面进行消毒处理，将表面消毒的组织块在无菌条件下贴在淀粉酪素培养基和/或高氏一号合成培养基制成的平板中，置于26-29℃培养箱中，培养5～7d，待有菌落长出后，对菌株进行纯化，纯化后的菌株接种于斜面培养基保存备用；
(2)菌株发酵液的制备：在培养瓶中装入小米培养基，并对其进行灭菌，冷却处理；接种纯化菌株到培养瓶中，置入26-29℃摇床，以170-190r/min转速培养4-6d，过滤并收集滤液，低温保藏备用；
(3)活性粗提物的制备：将滤液经吸附树脂富集，用甲醇水洗脱，收集甲醇洗脱液，并通过馏分浓缩至甲醇水洗脱体积的1/5即为活性粗提物。


2.根据权利要求1所述的一种猕猴桃溃疡病拮抗菌株筛选方法，其特征在于，所述步骤(1)中每平板贴4份组织块，置于28℃培养箱中，培养6d，待有菌落长出后，根据形态和颜色的差别对菌株进行分类、纯化。


3.根据权利要求1所述的一种猕猴桃溃疡病拮抗菌株筛选方法，其特征在于，所述步骤(2)中将接种有纯化菌株的培养瓶，置入28℃摇床，以180r/min转速培养5d，过滤并收集滤液，4℃保藏备用。


4.根据权利要求1所述的一种猕猴桃溃疡病拮抗菌株筛选方法，其特征在于，所述步骤(3)中用浓度分别为40％，60％，100％的甲醇水梯度洗脱，收集甲醇洗脱水并通过馏分浓缩获得活性粗提物。


5.根据权利要求1所述的一种猕猴桃溃疡病拮抗菌株筛选方法，其特征在于，所述步骤(2)中对菌株发酵液的抑菌活性测定...

【专利技术属性】
技术研发人员：张文娟，李红芳，何宇，
申请(专利权)人：渭南职业技术学院，
类型：发明
国别省市：陕西;61