一种复合微生物制剂及其培养方法与应用技术

本发明专利技术涉及微生物培养技术领域，具体涉及一种复合微生物制剂及其培养方法与应用。本发明专利技术采用混合培养技术，将酸乳杆菌、植物乳杆菌、两歧双歧杆菌、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、沼泽红假单胞菌、啤酒酵母、产朊假丝酵母菌种分别经活化、液体菌种培养、复合菌种培养和成品培养，得到复合微生物制剂，该制剂可用于生猪养殖，具有促生长、助消化、抗疾病、增加动物体重、降低饲料消耗等效果。该制备方法提高了微生物的生物量和生理代谢功能；弥补单独培养代谢上的不足，利用共生、偏利共生等促进复合微生物的生长，与传统的纯培养技术相比具有许多明显优点。

A compound microbial preparation and its culture method and Application

【技术实现步骤摘要】
一种复合微生物制剂及其培养方法与应用
本专利技术涉及微生物培养
，具体涉及一种复合微生物制剂及其培养方法与应用。
技术介绍
混合培养是指2种或2种以上的微生物培养，是纯培养技术的新发展，也是一种不需要进行复杂的DNA体外重组，却可取得类似效果的新型培养技术。人类对微生物的利用经历了天然混合培养到纯培养两个阶段，纯培养使研究者摆脱了多种微生物共存的复杂局面，能够不受干扰地对单一目的菌株进行研究，从而丰富了我们对微生物形态结构，生理和遗传特性的认识。但是，在长期的实验和生产实践中，人们又发现很多重要生化过程单株微生物不能完成或只能微弱地进行，必须依靠两种或多种微生物共同培养完成。多种微生物混合培养已成为目前微生物制剂研究中的一项重要内容，将几种具有不同功能和具有互生或共生关系的微生物以适当的比例进行混合培养所配制的复合微生物制剂应用于种植、养殖、环保等方面，可以调节生态平衡，保护生态环境。随着现代工农业生产的飞速发展及其产业结构的不断升级，微生物混合培养在推动国民经济增长、改善环境、研制新药物等方面有着巨大的经济和科研价值。
技术实现思路
为了克服现有技术的不足和缺点，本专利技术的首要目的在于提供一种复合微生物制剂的培养方法，该培养方法以多种微生物按合适比例共同培养，充分发挥群体的联合作用优势，取得最佳应用效果。本专利技术的另一目的在于提供上述培养方法培养得到的复合微生物制剂。本专利技术的再一目的在于提供上述复合微生物制剂的应用。本专利技术的目的通过下述技术方案实现：r>一种复合微生物制剂的培养方法，包含如下步骤：(1)菌种活化培养：将冷冻保藏的嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、两歧双歧杆菌、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、沼泽红假单胞菌、啤酒酵母、产朊假丝酵母分别进行多次活化，得到嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、两歧双歧杆菌、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、沼泽红假单胞菌、啤酒酵母、产朊假丝酵母活化菌种；(2)液体菌种培养①将步骤(1)制得的嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌活化菌种等质量比接种至液体培养基中，37℃厌氧培养2～3天，得到混合乳酸菌种子液；②将步骤(1)制得的两歧双歧杆菌活化菌种接种，至液体培养基中37℃厌氧培养2～3天，得到两歧双歧杆菌种子液；③将步骤(1)制得的枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌活化菌种等质量比接种至液体培养基中，摇床转速150～200r/min、温度30～35℃培养1～2天，得到混合芽孢杆菌种子液；④将步骤(1)制得的沼泽红假单胞菌活化菌种接种至液体培养基中，60℃钨丝灯光照、30～35℃厌氧培养5～7天，得到沼泽红假单胞菌种子液；⑤将步骤(1)制得的啤酒酵母、产朊假丝酵母活化菌种等质量比接种至液体培养基中，摇床转速150～200r/min、温度28～30℃培养2天，得到混合酵母菌种子液；(3)复合菌种培养：将步骤(2)制得的混合芽孢杆菌种子液和混合酵母菌种子液同时接种至发酵培养基1中，摇床转速150～200r/min、温度30℃培养1～2天，然后再将步骤(2)制得的混合乳酸菌种子液、两歧双歧杆菌种子液和沼泽红假单胞菌种子液同时接种至上述发酵体系中，30～35℃下厌氧培养3～5天，得到复合微生物制剂菌种，其中，混合乳酸菌种子液、两歧双歧杆菌种子液、混合芽孢杆菌种子液、沼泽红假单胞菌种子液和混合酵母菌种子液的接种量比(质量比)为5:4:3:3:5；总接种量为重量百分比10％；(4)成品培养：将步骤(3)制得的复合微生物制剂菌种按重量百分比5～8％的接种量接种至发酵培养基2中，28～30℃密闭发酵7～15天，获得复合微生物制剂的成品；其中，该步骤发酵培养基不用灭菌；步骤(1)中所述的嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、两歧双歧杆菌、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、沼泽红假单胞菌、啤酒酵母、产朊假丝酵母的菌株分别为：嗜酸乳杆菌(Lactobacillusacidophilus)CICC6083、植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)CICC21790、两歧双歧杆菌(Bifidobacteriumbifidum)CICC6166、枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)CICC24434、地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)CGMCC1.10257、沼泽红假单胞菌(Rhodopseudanonaspalustris)CGMCC1.8929、啤酒酵母(Saccharomycescerevisiae)CGMCC2.3973、产朊假丝酵母(Candidautilis)CGMCC2.3047；步骤(1)中所述的多次活化的具体操作优选为：将冷冻保藏的嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、两歧双歧杆菌、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、沼泽红假单胞菌、啤酒酵母、产朊假丝酵母菌株进行三次斜面活化，然后再进行平板纯化培养，最后进行斜面培养，得到嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、两歧双歧杆菌、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、沼泽红假单胞菌、啤酒酵母、产朊假丝酵母菌种；所述的斜面活化、平板纯化培养或斜面培养的条件优选为：嗜酸乳杆菌或植物乳杆菌37℃兼性厌氧培养2～3天，两歧双歧杆菌37℃厌氧培养3～5天，枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌30℃好氧培养1～2天；沼泽红假单胞菌60瓦乌丝灯光照30～35℃厌氧培养5～7天；啤酒酵母或产朊假丝酵母28～30℃好氧培养2天；步骤(2)①所述的液体培养基(乳酸菌)每一升包含如下组分：蛋白胨10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸钠5克、柠檬酸二胺2克、吐温801mL、磷酸氢二钾2克、硫酸镁0.2克、硫酸锰0.05克、碳酸钙20克、番茄汁20mL，土豆汁30mL，胡萝卜汁60mL，维生素C2克、弱碱性小分子还原水补至1000mL，pH6.8；步骤(2)②所述的液体培养基(两歧双歧杆菌)每一升包含如下组分：蛋白胨15.0克、酵母粉2.0克、葡萄糖20.0克、可溶性淀粉0.5克、氯化钠5.0克、5％半胱氨酸10.0mL、西红柿浸出液400.0mL、吐温801.0mL、肝提取液80.0mL、弱碱性小分子还原水补至1000ml，pH7.0；步骤(2)③所述的液体培养基(芽孢杆菌)每一升包含如下组分：葡萄糖30克、酵母膏15克、磷酸氢二钠2克、磷酸二氢钠1克、弱碱性小分子还原水补至1000mL、pH7.2；步骤(2)④所述的液体培养基(沼泽红假单胞菌)每一升包含如下组分：酵母粉10克、磷酸氢二钾1克、硫酸镁0.5克、弱碱性小分子还原水补至1000mL，pH7.0～7.2；步骤(2)⑤所述的液体培养基(酵母菌)每一升包含如下组分：红糖50克、酵母膏20克、硫酸铵1克、氯化钾2克、pH自然，弱碱性小分子还原水补至1000mL；步骤(3)中所述的发酵培养基1包含如下按质量百分比计的组分：工业用废糖蜜5％、酵母粉0.5％、蛋白胨1％、香蕉多糖1％、氯化铵0.1％、氯化钠0.1％、磷酸二氢钾0.05％、硫酸镁0.05％、硫酸锌0.025％、硫本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种复合微生物制剂的培养方法，其特征在于包含如下步骤：/n(1)菌种活化培养：将冷冻保藏的嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、两歧双歧杆菌、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、沼泽红假单胞菌、啤酒酵母、产朊假丝酵母分别进行多次活化，得到嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、两歧双歧杆菌、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、沼泽红假单胞菌、啤酒酵母、产朊假丝酵母活化菌种；/n(2)液体菌种培养/n①将步骤(1)制得的嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌活化菌种等质量比接种至液体培养基中，37℃厌氧培养2～3天，得到混合乳酸菌种子液；/n②将步骤(1)制得的两歧双歧杆菌活化菌种接种至液体培养基中，37℃厌氧培养2～3天，得到两歧双歧杆菌种子液；/n③将步骤(1)制得的枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌活化菌种等质量比接种至液体培养基中，摇床转速150～200r/min、温度30～35℃培养1-2天，得到混合芽孢杆菌种子液；/n④将步骤(1)制得的沼泽红假单胞菌活化菌种接种至液体培养基中，60℃钨丝灯光照、30～35℃厌氧培养5～7天，得到沼泽红假单胞菌种子液；/n⑤将步骤(1)制得的啤酒酵母、产朊假丝酵母活化菌种等质量比接种至液体培养基中，摇床转速150～200r/min、温度28～30℃培养2天，得到混合酵母菌种子液；/n(3)复合菌种培养：将步骤(2)制得的混合芽孢杆菌种子液和混合酵母菌种子液同时接种至发酵培养基1中，摇床转速150～200r/min、温度30℃、装液量30mL/250mL培养1～2天，然后再将步骤(2)制得的混合乳酸菌种子液、两歧双歧杆菌种子液和沼泽红假单胞菌种子液同时接种至上述发酵体系中，30～35℃下厌氧培养3～5天，得复合微生物制剂菌种，其中，混合乳酸菌种子液、两歧双歧杆菌种子液、混合芽孢杆菌种子液、沼泽红假单胞菌种子液和混合酵母菌种子液的接种量比为5:4:3:3:5；总接种量为重量百分比10％；/n(4)成品培养：将步骤(3)制得的复合微生物制剂菌种按重量百分比5～8％的接种量接种至发酵培养基2中，28～30℃密闭发酵7～15天，获得复合微生物制剂的成品；其中，该步骤发酵培养基不用灭菌。/n...

【技术特征摘要】
1.一种复合微生物制剂的培养方法，其特征在于包含如下步骤：
(1)菌种活化培养：将冷冻保藏的嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、两歧双歧杆菌、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、沼泽红假单胞菌、啤酒酵母、产朊假丝酵母分别进行多次活化，得到嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、两歧双歧杆菌、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、沼泽红假单胞菌、啤酒酵母、产朊假丝酵母活化菌种；
(2)液体菌种培养
①将步骤(1)制得的嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌活化菌种等质量比接种至液体培养基中，37℃厌氧培养2～3天，得到混合乳酸菌种子液；
②将步骤(1)制得的两歧双歧杆菌活化菌种接种至液体培养基中，37℃厌氧培养2～3天，得到两歧双歧杆菌种子液；
③将步骤(1)制得的枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌活化菌种等质量比接种至液体培养基中，摇床转速150～200r/min、温度30～35℃培养1-2天，得到混合芽孢杆菌种子液；
④将步骤(1)制得的沼泽红假单胞菌活化菌种接种至液体培养基中，60℃钨丝灯光照、30～35℃厌氧培养5～7天，得到沼泽红假单胞菌种子液；
⑤将步骤(1)制得的啤酒酵母、产朊假丝酵母活化菌种等质量比接种至液体培养基中，摇床转速150～200r/min、温度28～30℃培养2天，得到混合酵母菌种子液；
(3)复合菌种培养：将步骤(2)制得的混合芽孢杆菌种子液和混合酵母菌种子液同时接种至发酵培养基1中，摇床转速150～200r/min、温度30℃、装液量30mL/250mL培养1～2天，然后再将步骤(2)制得的混合乳酸菌种子液、两歧双歧杆菌种子液和沼泽红假单胞菌种子液同时接种至上述发酵体系中，30～35℃下厌氧培养3～5天，得复合微生物制剂菌种，其中，混合乳酸菌种子液、两歧双歧杆菌种子液、混合芽孢杆菌种子液、沼泽红假单胞菌种子液和混合酵母菌种子液的接种量比为5:4:3:3:5；总接种量为重量百分比10％；
(4)成品培养：将步骤(3)制得的复合微生物制剂菌种按重量百分比5～8％的接种量接种至发酵培养基2中，28～30℃密闭发酵7～15天，获得复合微生物制剂的成品；其中，该步骤发酵培养基不用灭菌。


2.根据权利要求1所述的复合微生物制剂的培养方法，其特征在于：
步骤(1)中所述的嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、两歧双歧杆菌、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、沼泽红假单胞菌、啤酒酵母、产朊假丝酵母的菌株分别为：嗜酸乳杆菌(Lactobacillusacidophilus)CICC6083、植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)CICC21790、两歧双歧杆菌(Bifidobacteriumbifidum)CICC6166、枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)CICC24434、地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)CGMCC1.10257、沼泽红假单胞菌(Rhodopseudanonaspalustris)CGMCC1.8929、啤酒酵母(Saccharomycescerevisiae)CGMCC2.3973、产朊假丝酵母(Candidautilis)CGMCC2.3047。


3.根据权利要求1所述的复合微生物制剂的培养方法，其特征在于：
步骤(1)中所述的多次活化的具体操作为：将冷冻保藏的嗜酸乳杆...

【专利技术属性】
技术研发人员：莫艳华，姚康，马国华，黄海红，
申请(专利权)人：广东中科无抗养殖科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44