一种基于以碱性磷酸酶为开关的路径选择器的碱性磷酸酶测定方法、试剂盒及其应用技术

本发明专利技术属于生物分析检测技术领域，尤其涉及一种基于以碱性磷酸酶为开关的路径选择器的碱性磷酸酶测定方法、试剂盒及其应用。本发明专利技术设计了有两条轨道的双链脱氧核糖核酸。轨道1以5’‑FAM和3’‑BHQ‑1为荧光探针，在5’‑FAM末端有2‑nt的突出结构。轨道2是一个带有5’‑PO4的ssDNA，该序列的大部分与探针互补，在5’‑PO4末端有0‑10nt的突出结构。没有碱性磷酸酶时，λexo选择与5’‑PO4末端结合并消化互补链，导致低荧光信号。当样品中有碱性磷酸酶时，轨道2中的5’‑PO4被转化为5’‑羟基；λexo选择与5’‑FAM末端结合并消化探针以离开FAM和BHQ‑1并发出强荧光信号。

A method, kit and application of alkaline phosphatase determination based on path selector with alkaline phosphatase as switch

【技术实现步骤摘要】
一种基于以碱性磷酸酶为开关的路径选择器的碱性磷酸酶测定方法、试剂盒及其应用
本专利技术属于生物分析检测
，尤其涉及一种基于以碱性磷酸酶为开关的路径选择器的碱性磷酸酶测定方法、试剂盒及其应用。
技术介绍
碱性磷酸酶是一种催化去磷酸化反应的酶。它广泛存在于肝、肠、肾、骨和胎盘等多种组织中。碱性磷酸酶的异常水平被证明与多种疾病高度相关，包括骨相关疾病、肝功能障碍、前列腺癌、乳腺癌和糖尿病。迄今为止，已经开发了许多方法来定量碱性磷酸酶的酶活性，如比色法、表面增强拉曼散射法、色谱法、电化学法。然而，这些具有自身特点的方法不可避免地受到一些限制，例如灵敏度差、设计复杂和耗时过长。近年来，由于荧光分析具有灵敏度高、方便、仪器易得等特点，越来越多的人致力于研究碱性磷酸酶的荧光分析方法。然而，有些荧光分析方法的检出限仍不够令人满意，从1U/L到19U/L不等。一些研究人员开发了新的荧光分析方法，具有更好的效果。一类是利用量子点表面配体被碱性磷酸酶消化后发出荧光。检出限为0.0018U/L至0.07U/L。然而，量子点需要复杂的制备过程，不容本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于以碱性磷酸酶为开关的路径选择器的碱性磷酸酶测定方法，其特征在于，包括：/n将去离子水、CutSmart缓冲液、λexo缓冲液、含有荧光基团及猝灭基团的探针序列、含有5’-PO4的探针序列的互补链混合；/n将混合液经85℃下升温和55℃下退火，冷却；/n待冷却到37℃，加入λexo和待测样品，进行酶切反应，进行荧光检测；/n所述荧光基团的5’末端有2-nt的突出结构。/n

【技术特征摘要】
1.一种基于以碱性磷酸酶为开关的路径选择器的碱性磷酸酶测定方法，其特征在于，包括：
将去离子水、CutSmart缓冲液、λexo缓冲液、含有荧光基团及猝灭基团的探针序列、含有5’-PO4的探针序列的互补链混合；
将混合液经85℃下升温和55℃下退火，冷却；
待冷却到37℃，加入λexo和待测样品，进行酶切反应，进行荧光检测；
所述荧光基团的5’末端有2-nt的突出结构。


2.根据权利要求1所述的一种基于以碱性磷酸酶为开关的路径选择器的碱性磷酸酶测定方法，其特征在于：所述荧光基团为FAM荧光基团、HEX荧光基团或VIC荧光基团中的任一种。


3.根据权利要求1所述的一种基于以碱性磷酸酶为开关的路径选择器的碱性磷酸酶测定方法，其特征在于：所述猝灭基团为BHQ-1猝灭基团、BHQ-2猝灭基团和BHQ-3猝灭基团中的任一种。


4.根据权利要求1所述的一种基于以碱性磷酸酶为开关的路径选择器的碱性磷酸酶测定方法，其特征在于：所述互补链与探针序列互补，且在5’-PO4末端有0-10-nt的突出结构。


5.根据权利要求4所述的一种基于以碱性磷酸酶为开关的路径选择器的碱性磷酸酶测定方法，其特征在于：所述互补链与探针序列互补，且在5’-PO4末端有7-nt的突出结构。

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【专利技术属性】
技术研发人员：吴曈勃，肖先金，张家瑞，
申请(专利权)人：华中科技大学，
类型：发明
国别省市：湖北;42