重组真菌漆酶的制备方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种真菌漆酶基因Lac1，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所述。本发明专利技术还公开了漆酶重组菌株的构建方法：将真菌漆酶基因Lac1与表达载体pPIC9K连接，所得的重组质粒pPIC9K‑Lac1经线性化后，转化毕赤酵母GS115，构建获得毕赤酵母重组菌株GS115/pPIC9K‑Lac1；将毕赤酵母重组菌株进行诱导发酵，筛选具漆酶活性毕赤酵母重组菌株作为漆酶重组菌株。本发明专利技术还同时提供了利用漆酶重组菌株制备重组漆酶的方法；重组漆酶用于染料脱色。

【技术实现步骤摘要】
重组真菌漆酶的制备方法及其应用
本专利技术属于生物
，具体涉及一种重组真菌漆酶及其基因、制备方法和在染料脱色中的应用。
技术介绍
漆酶是一种具有多酚氧化酶活性的铜蓝氧化酶，它可将底物氧化成自由态，并通过电子传递将空气中的氧气变化成水。漆酶普遍存在于真菌、高等植物、细菌中，在昆虫、海绵和地衣中也存在类似漆酶活性的多酚氧化酶。漆酶的底物非常广泛，不仅可以直接氧化酚类物质，也可以借助介体，如2,2'-联氮双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐(ABTS)和1-羟基苯并三唑(HBT)，氧化非酚类物质。所以，漆酶在工业染料脱色、环境污染物生物修复、生物检测、化合物合成等方面具有很好的应用潜力。真菌漆酶是目前分布最广泛、来源最多的一类漆酶。尤其是在白腐真菌中，它们往往能分泌两种及以上的漆酶同工酶。基因组分析表明，栓菌属Trametes的白腐真菌具有5-7个漆酶基因，密孔菌属Pycnoporus真菌具有4-5个漆酶基因，这些漆酶基因一般不同时进行表达翻译，即使有些漆酶基因进行了翻译，但它们的理化属性也存在一定的差异。虽然人们对真菌漆酶进行了大本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种真菌漆酶基因Lac1，其特征在于：该真菌漆酶基因Lac1的核苷酸序列如SEQ IDNO：1所述。/n

【技术特征摘要】
1.一种真菌漆酶基因Lac1，其特征在于：该真菌漆酶基因Lac1的核苷酸序列如SEQIDNO：1所述。


2.如权利要求1所述的真菌漆酶基因Lac1编码的蛋白质，其特征在于：该蛋白质的氨基酸序列如SEQIDNO：2所述。


3.真菌漆酶基因的克隆方法，其特征在于：
提取毛栓孔菌MX2总RNA，反转录成cDNA；以毛栓孔菌MX2反转录得到的cDNA为模板，设计扩增引物Lac1F和Lac1R，扩增得到漆酶基因Lac1；
Lac1F：CGGAATTCGCCATTGGACCGAAGGCGAACCTCG；
Lac1R:ATTTGCGGCCGCTCACAGATCGCCCTCCGCCAGCTTG。


4.漆酶重组菌株的构建方法，其特征在于包括以下步骤：
1)、将真菌漆酶基因Lac1与表达载体pPIC9K连接，构建重组质粒pPIC9K-Lac1；
2)、重组质粒pPIC9K-Lac1经线性化后，转化毕赤酵母GS115，构建获得毕赤酵母重组菌株GS115/pPIC9K-Lac1；
3)、将毕赤酵母重组菌株进行诱导发酵，筛选具漆酶活性毕赤酵母重组菌株作为漆酶重组菌株。


5.根据权利要求4所述的漆酶重组菌株的构建方法，其特征在于：
所述步骤2)中，重组质粒转化毕赤酵母的方法为电击转化法，使用3μg线性化的pPIC9K-Lac1重组质粒，电击参数为1750V，4.2ms。


6.根据权利要求5所述的漆酶重组菌株构建方法，其特征在于：
所述步骤3)包括依次进行以下步骤：
3.1)、将毕...

【专利技术属性】
技术研发人员：潘程远，黄芊芊，朱兰兰，
申请(专利权)人：浙江农林大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33