高频跨境媒介昆虫携带的细菌核酸快速提取扩增试剂盒制造技术

高频跨境媒介昆虫携带的细菌核酸快速提取扩增试剂盒，属于生物技术领域，所述的高频跨境媒介昆虫携带的细菌核酸快速提取扩增试剂盒的整体结构由盛液瓶(1)、冷冻瓶(2)、常温箱(3)、冷冻箱(4)、试剂盒盖(5)、试剂盒体(6)、试剂盒合页(7)、试剂盒锁扣(8)、盛液瓶固板(9)组成；所用试剂包括PCR反应液、高成功率PCR酶、裂解缓冲液、标签引物，其特征在于：目的片段的扩增采用的标签引物，其核苷酸序列如Seq ID No：1和Seq ID No：2所示。

Rapid extraction and amplification kit of bacterial nucleic acid carried by high frequency cross-border vector insects

【技术实现步骤摘要】
高频跨境媒介昆虫携带的细菌核酸快速提取扩增试剂盒
本专利技术涉及高频跨境媒介昆虫携带的细菌核酸快速提取扩增试剂盒，属于生物

技术介绍
高频跨境媒介生物携带大量的细菌和病原体，目前对于病媒生物携带细菌性病原体的检测主要采用微生物自动鉴定系统和16SrRNA，但是这些方法均存在不足。二代测序技术广泛用于环境微生物的高通量检测，但目前还未有专门为病媒生物携带细菌的二代测序检测的样品制备方法及标准，现有通用方法并不能从病媒生物携带细菌提取足够基因组DNA完成后续实验，且没有筛选出一个合适的标准基因用于对病媒生物携带细菌的检测。如何从病媒生物携带细菌提取足够基因组DNA完成后续实验，且能够筛选出一个合适的标准基因用于对病媒生物携带细菌的检测成为急需解决的一大难题？所以，专利技术高频跨境媒介昆虫携带的细菌核酸快速提取扩增试剂盒是必要的。
技术实现思路
为了克服如何从病媒生物携带细菌提取足够基因组DNA完成后续实验，且能够筛选出一个合适的标准基因用于对病媒生物携带细菌的检测的难题，本专利技术提供了一个高频跨境媒介昆虫携带的细菌核酸快速提取扩增试剂盒。高频跨境媒介昆虫携带的细菌核酸快速提取扩增试剂盒的目的是提供一种快速、得率高、重复性高、效果好的提取高频跨境媒介昆虫携带的细菌核酸的提取扩增方法及试剂盒，结合二代测序技术，可实现对高频跨境媒介昆虫携带细菌的快速准确鉴定，尤其是实现对未知细菌的鉴定。本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是：本专利技术的高频跨境媒介昆虫携带的细菌核酸快速提取扩增试剂盒，整体结构由盛液瓶1、冷冻瓶2、常温箱3、冷冻箱4、试剂盒盖5、试剂盒体6、试剂盒合页7、试剂盒锁扣8、盛液瓶固板9组成，盛液瓶1是盛放缓冲液和ddH2O等能够在常温下储藏的液体试剂的瓶子，为玻璃质或塑料质，由瓶体和瓶盖构成，盛放液体的总体积为100-150毫升，瓶体下部为瓶身，瓶身呈圆柱形，瓶身内表面平滑，圆柱形瓶身的直径为5-10厘米，高度为5-10厘米；瓶体上部为瓶颈，瓶颈下部呈圆台形，圆台的下缘与瓶身上缘连接在一起，圆台的上缘与瓶颈上部的下缘连接在一起，瓶颈上部呈圆柱形，圆柱形瓶颈的直径为3-5厘米，高度为2-3厘米，瓶颈上部的外表面具有突出的螺纹；所有的盛液瓶1均放置在常温箱3内。冷冻瓶2是盛放dNTP、高成功率PCR酶、正向引物、反向引物、模板DNA等常温下储藏的液体试剂的瓶子，为玻璃质或塑料质，由瓶体和瓶盖构成，盛放液体的总体积为0.5-10毫升，瓶体下部为瓶身，瓶身呈圆柱形，瓶身内表面平滑，圆柱形瓶身的直径为1-3厘米，高度为3-5厘米；瓶体上部为瓶颈，瓶颈下部呈圆台形，圆台的下缘与瓶身上缘连接在一起，圆台的上缘与瓶颈上部的下缘连接在一起，瓶颈上部呈圆柱形，圆柱形瓶颈的直径为0.5-1厘米，高度为0.5-1厘米，瓶颈上部的外表面具有突出的螺纹；所有的冷冻瓶2均放置在冷冻箱4内。冷冻箱4是内置有冰袋的泡沫箱；冷冻箱4上部是冷冻箱盖11，下部为冷冻箱体10，冷冻瓶2和维持低温的冰袋即放置在冷冻箱体10内；冷冻箱盖11四周壁的厚度为1-2厘米，冷冻箱盖11顶壁的厚度为1.5-3厘米；冷冻箱体10四周壁的厚度为1.5-3厘米，底壁的厚度为2-3厘米，冷冻箱体10四周壁上缘内侧向上有个厚度为0.5厘米的凸起，凸起的高度为1-2厘米。常温箱3是试剂盒体6内放置冷冻箱4后剩余的空间；常温箱3内有盛液瓶固板9，盛液瓶固板9设置在常温箱3中部，为纸质、塑料质、铝合金质或不锈钢质，上面有相间排列的圆孔，圆孔的直径为5-10厘米。高频跨境媒介昆虫携带的细菌核酸快速提取扩增试剂盒为塑料质、铝合金质或不锈钢质，呈长方体形，长方体的长度为15-30厘米，宽度为10-20厘米，高频跨境媒介昆虫携带的细菌核酸快速提取扩增试剂盒的上部为试剂盒盖5，下部为试剂盒体6，试剂盒盖5和试剂盒体6借助试剂盒合页7可动连接在一起。试剂盒盖5四周壁厚度为1-10毫米，顶壁厚3-15毫米。试剂盒体6四周壁的厚度为3-15毫米，底壁的厚度为5-15毫米，试剂盒体6四周壁上缘内侧向上有个厚度为0.5-1毫米的凸起，凸起的高度为0.5-1厘米。试剂盒合页7为公知的合页，包括2个合页片，2个合页片之间由轴相连，每个合页片均为不锈钢质，呈长方体形，长方体的长度为2-3厘米，宽度为1-2厘米，厚度为0.5-1毫米。试剂盒锁扣8结构同公知的锁扣结构，可动的锁鼻固定在试剂盒盖5侧壁外表面，锁鼻上有个长方形的孔，不动的锁扣固定在试剂盒体6侧壁外表面，锁扣上有可内缩进的弹条。高频跨境媒介昆虫携带的细菌核酸快速提取扩增试剂盒所用试剂包括PCR反应液、高成功率PCR酶、裂解缓冲液、标签引物，其特征在于，包括以下步骤：(1)高频跨境媒介生物体表携带细菌的收集取1只病媒昆虫或鼠的组织毛、足、耳等非内脏组织置于适中的离心管中，加入可浸没该高频跨境媒介生物的0.9％NaCl溶液，800r/min漩涡振荡30s，短暂离心。收集上清转移至新的离心管中13，800×g离心2min。弃上清，留沉淀。重复以上步骤3次。将收集的细菌沉淀物，加入500μL0.9％NaCl溶液悬浮后合并，4℃保存备用。收集废弃液和废弃物高压灭菌后丢弃。(2)高频跨境媒介生物体内携带细菌的收集若是提取鼠体内细菌，取其内脏组织进行实验，无需进行(1)的处理直接进行该步骤。将(1)处理后高频跨境媒介生物移入新的灭菌离心管中，加入可浸没高频跨境媒介生物的75％乙醇浸泡5min，重复3次；将高频跨境媒介生物转移至另一个新的灭菌离心管中，然后加入可浸没高频跨境媒介生物的0.9％NaCl溶液，800r/min漩涡振荡30s，弃上清，以上步骤重复3次。将样本放置在生物安全柜中晾干15min。用灭菌镊子将样本移入新离心管中，将标本研碎成糊状。加入3mL生理盐水，800r/min漩涡振荡30s，短暂离心，将上清液转移至新的10mL离心管中，13，800×g离心2min，弃上清，留沉淀。重复以上收集步骤3次，将收集的细菌沉淀物，加入500μL0.9％NaCl溶液悬浮后合并，4℃保存备用。收集废弃液和废弃物高压灭菌后丢弃。(3)整只高频跨境媒介生物携带细菌的收集取1只高频跨境媒介生物或组织置于适中的离心管中，将标本研碎成糊状。根据样本大小加入适量0.9％NaCl溶液，800r/min漩涡振荡30s，短暂离心，将上清液转移至新的离心管中，13,800×g离心2min，弃上清，留沉淀。重复以上收集步骤3次，将收集的细菌沉淀物，加入500μL0.9％NaCl溶液悬浮后合并，4℃保存备用。收集废弃液和废弃物高压灭菌后丢弃。(4)细菌基因组DNA的提取将装有菌液的离心管13800×g离心2min，转移上清液并高压灭菌处理。收集的细菌使用细菌基因组DNA提取试剂盒(含溶菌酶消化)或使用核酸自动提取仪提取细菌基因组DNA，提取的基因组DNA保存在4℃冰箱作为模板DNA备用。(5)目的片段的扩增以步骤(4)获取的基因组DNA为模板，采用标签本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.高频跨境媒介昆虫携带的细菌核酸快速提取扩增试剂盒，所述的高频跨境媒介昆虫携带的细菌核酸快速提取扩增试剂盒的整体结构由盛液瓶(1)、冷冻瓶(2)、常温箱(3)、冷冻箱(4)、试剂盒盖(5)、试剂盒体(6)、试剂盒合页(7)、试剂盒锁扣(8)、盛液瓶固板(9)组成；所用试剂包括PCR反应液、高成功率PCR酶、裂解缓冲液、标签引物，其特征在于，目的片段的扩增采用的标签引物，其核苷酸序列如Seq ID No：1和Seq ID No：2所示。/n

【技术特征摘要】
1.高频跨境媒介昆虫携带的细菌核酸快速提取扩增试剂盒，所述的高频跨境媒介昆虫携带的细菌核酸快速提取扩增试剂盒的整体结构由盛液瓶(1)、冷冻瓶(2)、常温箱(3)、冷冻箱(4)、试剂盒盖(5)、试剂盒体(6)、试剂盒合页(7)、试剂盒锁扣(8)、盛液瓶固板(9)组成；所用试剂包括PCR反应液、高成功率PCR酶、裂解缓冲液、标签引物，其特征在于，目的片段的扩增采用的标签引物，其核苷酸序列如SeqIDNo：1和SeqIDNo：2所示。


2.根据权利要求1所述的高频跨境媒介昆虫携带的细菌核酸快速提取扩增试剂盒，其特征在于：所述的高频跨境媒介昆虫携带的细菌核酸快速提取扩增试剂盒的整体结构由盛液瓶(1)、冷冻瓶(2)、常温箱(3)、冷冻箱(4)、试剂盒盖(5)、试剂盒体(6)、试剂盒合页(7)、试剂盒锁扣(8)、盛液瓶固板(9)组成，盛液瓶(1)是盛放缓冲液和ddH2O等能够在常温下储藏的液体试剂的瓶子，为玻璃质或塑料质，由瓶体和瓶盖构成，盛放液体的总体积为100-150毫升，瓶体下部为瓶身，瓶身呈圆柱形，瓶身内表面平滑，圆柱形瓶身的直径为5-10厘米，高度为5-10厘米；瓶体上部为瓶颈，瓶颈下部呈圆台形，圆台的下缘与瓶身上缘连接在一起，圆台的上缘与瓶颈上部的下缘连接在一起，瓶颈上部呈圆柱形，圆柱形瓶颈的直径为3-5厘米，高度为2-3厘米，瓶颈上部的外表面具有突出的螺纹；所有的盛液瓶(1)均放置在常温箱(3)内；冷冻瓶(2)是盛放dNTP、高成功率PCR酶、正向引物、反向引物、模板DNA等常温下储藏的液体试剂的瓶子，为玻璃质或塑料质，由瓶体和瓶盖构成，盛放液体的总体积为0.5-10毫升，瓶体下部为瓶身，瓶身呈圆柱形，瓶身内表面平滑，圆柱形瓶身的直径为1-3厘米，高度为3-5厘米；瓶体上部为瓶颈，瓶颈下部呈圆台形，圆台的下缘与瓶身上缘连接在一起，圆台的上缘与瓶颈上部的下缘连接在一起，瓶颈上部呈圆柱形，圆柱形瓶颈的直径为0.5-1厘米，高度为0.5-1厘米，瓶颈上部的外表面具有突出的螺纹；所有的冷冻瓶(2)均放置在冷冻箱(4)内；冷冻箱(4)是内置有冰袋的泡沫箱；冷冻箱(4)上部是冷冻箱盖(11)，下部为冷冻箱体(10)，冷冻瓶(2)和维持低温的冰袋即放置在冷冻箱体(10)内；冷冻箱盖(11)四周壁的厚度为1-2厘米，冷冻箱盖(11)顶壁的厚度为1.5-3厘米；冷冻箱体(10)四周壁的厚度为1.5-3厘米，底壁的厚度为2-3厘米，冷冻箱体(10)四周壁上缘内侧向上有个厚度为0.5厘米的凸起，凸起的高度为1-2厘米；常温箱(3)是试剂盒体(6)内放置冷冻箱(4)后剩余的空间；常温箱(3)内有盛液瓶固板(9)，盛液瓶固板(9)设置在常温箱(3)中部，为纸质、塑料质、铝合金质或不锈钢质，上面有相间排列的圆孔，圆孔的直径为5-10厘米；高频跨境媒介昆虫携带的细菌核酸快速提取扩增试剂盒为塑料质、铝合金质或不锈钢质，呈长方体形，长方体的长度为15-30厘米，宽度为10-20厘米，高频跨境媒介昆虫携带的细菌核酸快速提取扩增试剂盒的上部为试剂盒盖(5)，下部为试剂盒体(6)，试剂盒盖(5)和试剂盒体(6)借助试剂盒合页(7)可动连接在一起；试剂盒盖(5)四周壁厚度为1-10毫米，顶壁厚3-15毫米；试剂盒体(6)四周壁的厚度为3-15毫米，底壁的厚度为5-15毫米，试剂盒体(6)四周壁上缘内侧向上有个厚度为0.5-1毫米的凸起，凸起的高度为0.5-1厘米；试剂盒合页(7)为公知的合页，包括2个合页片，2个合页片之间由轴相连，每个合页片均为不锈钢质，呈长方体形，长方体的长度为2-3厘米，宽度为1-2厘米，厚度为0.5-1毫米；试剂盒锁扣(8)结构同公知的锁扣结构，可动的锁鼻固定在试剂盒盖(5)侧壁外表面，锁鼻上有个长方形的孔，不动的锁扣固定在试剂盒体(6)侧壁外表面，锁扣上有可内缩进的弹条。

【专利技术属性】
技术研发人员：邱德义，岳巧云，陈健，
申请(专利权)人：中山海关技术中心，
类型：发明
国别省市：广东;44