一种载脂蛋白E与盐霉素复合纳米粒及制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种载脂蛋白E与盐霉素复合纳米粒及制备方法和应用，是利用胆酸钠法制备的复合纳米粒，复合纳米粒包括有卵磷脂、胆酸钠、盐霉素和载脂蛋白E，其中卵磷脂与胆酸钠质量比为0.5‑2，盐霉素与载脂蛋白E质量比为0.067‑0.2，盐霉素与PBS总体积的质量体积比为0.083‑0.2，单位为：g/L。其制备方法为：步骤一、将卵磷脂和盐霉素溶于无水乙醇；步骤二、将胆酸钠和载脂蛋白E溶于PBS；步骤三、将步骤二制得的液体进行聚合；步骤四、将步骤三中聚合后的物质透析去除胆酸钠。载脂蛋白E与盐霉素复合纳米粒在治疗癌症和在生产用于治疗癌症药物中的应用，有益效果：载脂蛋白E和盐霉素具有良好的协同作用，从而降低盐霉素使用剂量，提高其临床应用的安全性。

【技术实现步骤摘要】
一种载脂蛋白E与盐霉素复合纳米粒及制备方法和应用
本专利技术涉及一种复合纳米粒及制备方法和应用，特别涉及一种载脂蛋白E与盐霉素复合纳米粒及制备方法和应用。
技术介绍
目前，卵巢癌是女性生殖系统常见的恶性肿瘤之一。该病起病隐匿，极易发生浸润、转移，其死亡率高居妇科恶性肿瘤之首，超过70％的病人确诊时已属晚期，患者五年生存率仅25％-30％，目前，治疗卵巢癌的方法主要为手术及铂类药物为主的基础化疗。大部分患者术后化疗早期敏感性较好，但是80％患者仍会在术后2-3年复发，并最终衍变为化疗耐药而死亡。因此，迫切需要寻找新的药物及治疗方法来提高卵巢癌患者的生存率及生活质量。肿瘤异质性直接导致病人治疗效果及预后的差异，肿瘤组织由表型和功能不同的细胞组成，在肿瘤的生长、分化、耐药等生物特征上发挥不同的作用。肿瘤中存在极小部分细胞，极少数量即可致瘤，并且拥有类似干细胞的无限增殖能力，这类细胞被称之为肿瘤干细胞。传统肿瘤治疗主要是针对普通肿瘤细胞，结果是杀伤了普通肿瘤细胞，而肿瘤干细胞由于处于G0期，且高表达耐药蛋白，可在常规治疗中存活下来，经过一段时间的增殖、分化会再次形成新的肿瘤，导致肿瘤复发，特殊情况下，尤其当肿瘤组织内己存在的肿瘤干细胞被清除时，普通肿瘤细胞可去分化形成新的肿瘤干细胞，最终形成异质且可相互转化的肿瘤病灶。因此，采用可同时杀灭肿瘤干细胞和普通肿瘤细胞的技术，或联合应用针对肿瘤干细胞和针对普通肿瘤细胞的药物，能够在肿瘤治疗中达到预期效果。盐霉素是一种聚醚类离子载体型抗生素，因其可特异性杀伤乳腺癌、肺癌、胰腺癌等多种肿瘤干细胞而受到广泛关注。但是其高剂量下显著的毒性以及水不溶性，一直是盐霉素难以进入临床应用的主要障碍。纳米药物递送系统可凭借增强的通透与滞留效应，增加药物在病变部位的蓄积，即被动靶向作用，降低化疗药物的副作用，因而在肿瘤治疗领域的应用越来越广泛。但是，目前采用的大多数纳米载体均为人工合成，作为外源性物质具有免疫原性，可能引起毒、副反应。载脂蛋白E是一个含有299个氨基酸，结合有磷脂的糖蛋白。载脂蛋白E主要在肝脏中合成，分泌入血后可结合到脂蛋白中，具有结合胆固醇的能力，并同它们一起代谢。不同类型载脂蛋白E异构体对血浆脂质水平的影响有很大差异，这主要是由于它们在介导脂蛋白通过多种途径进行代谢的能力上存在着差异。同时，载脂蛋白E还具有抑制内皮细胞迁移并抑制血管再生的功能，从而发挥抗肿瘤作用。利用载脂蛋白E作为药物载体，合成一种包载盐霉素的靶向纳米粒——载脂蛋白E与盐霉素复合纳米粒，载脂蛋白E为人体内天然蛋白，作为仿生载体，载脂蛋白E具有良好的生物相容性。载脂蛋白E的亲脂基团结合盐霉素，亲水基因暴露在表面突入周围水相，从而使载脂蛋白E与盐霉素复合纳米粒颗粒能稳定地分散在水相中，提高盐霉素的水溶性；同时，体外实验说明载脂蛋白E与盐霉素复合纳米粒可以特异性的杀伤卵巢癌细胞，而对正常人上皮细胞(IOSE80)、人成纤维细胞(BJ)无明显毒性，说明载脂蛋白E与盐霉素复合纳米粒具有主动靶向性，可特异性的杀伤卵巢癌细胞，从而降低盐霉素对正常组织的毒性作用。利用载脂蛋白E作为药物载体的另一个优势在于，载脂蛋白E本身也具有抗肿瘤作用。在载脂蛋白E与盐霉素复合纳米粒的药效学实验中，我们发现载脂蛋白E与盐霉素复合纳米粒中载脂蛋白E和盐霉素具有良好的协同作用，当载脂蛋白E与盐霉素复合纳米粒剂量(以载脂蛋白E与盐霉素复合纳米粒中盐霉素含量计算)为游离盐霉素的1/4时，即可起到与游离盐霉素相似的抗卵巢癌作用，从而降低盐霉素使用剂量，提高安全性。因此，本申请合成一种载脂蛋白E与盐霉素复合纳米粒，达到降低盐霉素毒性及增强其杀伤卵巢癌细胞能力的目的。载脂蛋白E与盐霉素复合纳米粒的抗肿瘤活性成分为盐霉素和载脂蛋白E，盐霉素可特异性杀伤乳腺癌、肺癌、胰腺癌等多种肿瘤干细胞，因此，载脂蛋白E与盐霉素复合纳米粒也具有治疗乳腺癌、肺癌、胰腺癌等多种癌症的功能。
技术实现思路
本专利技术的主要目的是为了改善盐霉素的水溶性及在水溶液中的稳定性；本专利技术的另一个目的是使载脂蛋白E与盐霉素复合纳米粒靶向作用于卵巢癌局部组织，降低盐霉素对正常组织的毒性；本专利技术的再一个目的是载脂蛋白E和盐霉素释放于卵巢癌组织局部，同时杀伤普通卵巢癌细胞和卵巢癌干细胞，载脂蛋白E和盐霉素具有良好的协同作用，从而降低盐霉素使用剂量，提高其临床应用的安全性。本专利技术的又一个目的是提供一种新的药物载体——载脂蛋白E，该载体可包载脂溶性药物，并具有靶向卵巢癌细胞的功能。本专利技术为了达到上述目的并解决上述问题而提供的一种载脂蛋白E与盐霉素复合纳米粒及制备方法和应用。本专利技术提供的载脂蛋白E与盐霉素复合纳米粒是利用胆酸钠法制备的复合纳米粒，复合纳米粒包括有卵磷脂、胆酸钠、盐霉素和载脂蛋白E，其中卵磷脂与胆酸钠质量比为0.5-2，盐霉素与载脂蛋白E质量比为0.067-0.2，盐霉素与PBS总体积的质量体积比为0.083-0.2，单位为：g/L。载脂蛋白E是使用甲基营养酵母生产的，是以甲醇为碳源和能源的培养基中培养甲基营养酵母,甲基营养酵母是用包括下列可操作连接的元件的DNA构建体转化的：(1)、甲基可诱导的转录启动子；(2)、编码载脂蛋白E的DNA片段；(3)、转录终止子；(4)、可选择标志，从而重组表达人载脂蛋白E；甲基营养酵母是巴斯德毕赤酵母，甲基可诱导的启动子和转录终止子均来自巴斯德毕赤酵母AOX1基因。载脂蛋白E与盐霉素复合纳米粒中的药物载体为载脂蛋白E，该载体可包载脂溶性药物，并具有靶向卵巢癌细胞的功能。本专利技术提供的载脂蛋白E与盐霉素复合纳米粒的制备方法，其方法如下所述：步骤一、将卵磷脂和盐霉素溶于无水乙醇，至卵磷脂终浓度为2g/L-10g/L，盐霉素终浓度为0.5g/L-2g/L，之后快速注入5-10倍体积PBS中，充入氮气条件下搅拌15min；步骤二、将胆酸钠和载脂蛋白E溶于PBS，至胆酸钠终浓度为2g/L-10g/L，载脂蛋白E终浓度为5g/L-20g/L，在搅拌下加入上述液体中；步骤三、将步骤二制得的液体室温放置30min；移至4℃孵育12h，使各组分进行聚合；步骤四、将步骤三中聚合后的物质透析去除胆酸钠，使载脂蛋白E与盐霉素形成复合纳米颗粒，载脂蛋白E的亲脂基团结合盐霉素，亲水基因暴露在表面突入周围水相，从而使载脂蛋白E与盐霉素复合纳米粒颗粒能稳定地分散在水相中，从而提高盐霉素的水溶性。本专利技术提供的载脂蛋白E与盐霉素复合纳米粒在治疗癌症和在生产用于治疗癌症药物中的应用，癌症包括卵巢癌或乳腺癌或肺癌或胰腺癌。载脂蛋白E与盐霉素复合纳米粒具有靶向杀伤卵巢癌细胞的功能，载脂蛋白E与盐霉素复合纳米粒中载脂蛋白E和盐霉素具有良好的协同作用，当载脂蛋白E与盐霉素复合纳米粒浓度为游离盐霉素的1/4时，即可起到与其相似的抗卵巢癌作用，从而降低盐霉素使用剂量，提高安全性。载脂蛋白E可包载脂溶性药物，并具有靶向卵巢癌细本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种载脂蛋白E与盐霉素复合纳米粒，其特征在于：是利用胆酸钠法制备的复合纳米粒，复合纳米粒包括有卵磷脂、胆酸钠、盐霉素和载脂蛋白E，其中卵磷脂与胆酸钠质量比为0.5-2，盐霉素与载脂蛋白E质量比为0.067-0.2，盐霉素与PBS总体积质量体积比为0.083-0.2，单位为：g/L。/n

【技术特征摘要】
1.一种载脂蛋白E与盐霉素复合纳米粒，其特征在于：是利用胆酸钠法制备的复合纳米粒，复合纳米粒包括有卵磷脂、胆酸钠、盐霉素和载脂蛋白E，其中卵磷脂与胆酸钠质量比为0.5-2，盐霉素与载脂蛋白E质量比为0.067-0.2，盐霉素与PBS总体积质量体积比为0.083-0.2，单位为：g/L。


2.根据权利要求1所述的一种载脂蛋白E与盐霉素复合纳米粒，其特征在于：所述的载脂蛋白E是使用甲基营养酵母生产的，是以甲醇为碳源和能源的培养基中培养甲基营养酵母,甲基营养酵母是用包括下列可操作连接的元件的DNA构建体转化的：
(1)、甲基可诱导的转录启动子；
(2)、编码载脂蛋白E的DNA片段；
(3)、转录终止子；
(4)、可选择标志，从而重组表达人载脂蛋白E；
甲基营养酵母是巴斯德毕赤酵母，甲基可诱导的启动子和转录终止子均来自巴斯德毕赤酵母AOX1基因。


3.根据权利要求1所述的一种载脂蛋白E与盐霉素复合纳米粒，其特征在于：其药物载体为载脂蛋白E，该载体可包载脂溶性药物，并具有靶向卵巢癌细胞的功能。


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【专利技术属性】
技术研发人员：苏曼曼，
申请(专利权)人：吉林大学，
类型：发明
国别省市：吉林;22