【技术实现步骤摘要】
CD47抗体在肝癌放疗敏感性检测试剂盒中的应用
本专利技术涉及一种CD47抗体在肝癌放疗敏感性检测试剂盒中的应用，属于生物检测领域。
技术介绍
原发性肝癌(以下简称肝癌)是全球发病率六、死亡率第三的癌症。此外，肝癌合并门静脉癌栓的发生率较高。一旦合并门静脉癌栓，患者预后往往很差。因此，门静脉癌栓是影响肝癌预后的一个重要因素。近年来，随着科学技术的发展和医疗水平的提高，特别是手术方法的改进和多学科诊疗观念的普及，肝癌合并门静脉癌栓的治疗有了长足的进步。2004年，本团队针对门静脉癌栓侵犯门静脉的不同严重程度，在国内首次提出了门静脉癌栓的分型。具体如下：根据癌栓的发展程度(即侵犯不同门静脉部位)，将癌栓分为I-IV型：微血管癌栓为I0期，癌栓累及二级以上门静脉分支者为I型；累及一级门静脉分支者为II型；累及门静脉主干者为III型；累及肠系膜上静脉或下腔静脉者为IV型。目前对可切除肝癌伴I型、II型门静脉癌栓的治疗方案，手术为首要选择的方案为大家所接受。然而对于III、IV型门静脉癌栓的治疗，目前仍存在争议。因此，对存在有...
【技术保护点】
1.CD47抗体在肝癌放疗敏感性检测试剂盒中的应用。/n
【技术特征摘要】
1.CD47抗体在肝癌放疗敏感性检测试剂盒中的应用。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，包括如下步骤：
步骤一，制作组织切片，
步骤二，组织切片中CD47表达水平的检测,
步骤三，评分和判断。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于：
步骤一中，采用石蜡包埋法制作组织切片，包括步骤:
(i)取样30min内放入固定液中，固定液的用量为组织块的20倍左右，固定时间为24h，固定液包括10％福尔马林、4％多聚甲醛或10％磷酸缓冲福尔马林；
(ii)固定后的样本经流水冲洗(4～6h)后，用不同浓度的乙醇进行脱水处理，乙醇浓度为：30％→50％→70％→80％→90％→95％→100％(I)→100％(II)，每种浓度的乙醇体积为组织块50倍左右，时间总长约2～3h；
(iii)将组织块放于二甲苯与无水乙醇比例为1:1的透明剂中1h，再置于二甲苯中透明20min；
(iv)将透明后的组织块放入溶解状态的普通石蜡中1h，让材料里含有石蜡，浸蜡后的组织块放在装有蜡液的容器中，待蜡液表层凝固即迅速放入冷水中冷却，制成含有组织块的蜡块；
(v)包埋好的蜡块用刀片修成规整的四棱台，以少许热蜡液将其底部迅速贴附于小木块上，用轮转式切片机进行切片，切片厚度为4～7μm，切出一片接一片的蜡带，用毛笔轻托轻放在纸上，再用粘附剂将展平的蜡片牢附于载玻片上。
4.如权利要求2所述的应用，其特征在于：
步骤一中，采用冷冻法制作组织切片，包括步骤：
(i)组织块放于支承器上，滴上包埋剂，放于冷冻台上冷冻；
(ii)冷冻好的组织块，夹紧于冰冻切片机的持承器上，修整并切片，切片厚度为5～10μm，将切好的切片平整的粘附于载玻片上。
5.如权利要求1所述的应用，其特征在于：
步骤二中，组织切片中CD47表达水平的检测步骤如下：
(1)脱蜡水化:脱蜡前将组织拿出放在65℃烘箱中1h，然后浸入二甲苯2次，每次10min，再依次放入100％无水乙醇，90％无水乙醇，80％无水乙醇，70％无水乙醇各5min，最后放在蒸馏水中5min；
(2)抗原修复：水浴锅加热的柠檬酸钠缓冲液至95℃左右，放入石蜡切片修复15-30min；
(3)室温冷却后，PBS冲洗3遍，再用3％H2O2，室温孵育30min，PBS洗3遍,每次5min
(4)5％的山羊血清封闭，室温孵育30min，
(5)在切片上滴加一抗工作液，...
【专利技术属性】
技术研发人员：程树群，卫旭彪，蒋亚波，
申请(专利权)人：上海东方肝胆外科医院，
类型：发明
国别省市：上海;31
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