本发明专利技术公开了一种猪用合生元微生态制剂及其制备方法和应用。一种猪用合生元微生态制剂，由活菌数大于10.0log cfu/mL的植物乳杆菌L47菌液，所述菌液质量2～3％的菊粉和/或2～3％的低聚果糖，及所述菌液质量5‑10％的菌体保护剂混合均匀后冻干而成。本发明专利技术提供合生元制剂在体外生长24h，乳酸菌活菌数能够达到9.4log cfu/mL以上，乳酸浓度能够达到176.56mM以上。该合生元微生态制剂可在单胃动物生产上应用，改善动物肠道菌群环境，促进动物生长。
【技术实现步骤摘要】
一种猪用合生元微生态制剂及其制备方法和应用
本专利技术属于猪饲料添加剂领域，涉及一种猪用合生元微生态制剂及其制备方法和应用。
技术介绍
近些年来，越来越多的益生菌和益生元产品投入到畜牧生产中，以改善畜禽的肠道健康和生长性能。乳酸菌作为一类常用的益生菌，能够抑制病原菌的生长，促进机体对营养物质的吸收，提高机体免疫力和抗腹泻等；而益生菌要达到以上目的，必须能够通过胃肠道的过度，在结肠中定植，从而发挥作用。其面临的主要障碍是胃中的酸性条件及肠道中高浓度(1-10mM)的胆汁酸环境。益生元是指不能被单胃动物机体本身所分泌的酶消化的物质，通过选择性地刺激结肠中一种或几种细菌的生长或活性，从而改善肠道微生态环境，促进宿主健康；许多难以消化的碳水化合物(低聚果糖、菊粉、乳果糖、低聚半乳糖等)作为益生元在生产中使用。菊粉、低聚果糖是自然界中普遍存在的碳水化合物，绝大多数植物中都可以发现菊粉的存在，已有研究报道其能够作为益生元使用，它们对肠道的功能包括：调节微生物发酵，增加短链脂肪酸产量，降低pH和氨产量等。合生元制剂是指益生菌与益生元的复合制剂，其中益生元能够促进益生菌的生长，在发挥其益生作用的同时，促进益生菌在胃肠道中的生长和在结肠的定植。因此，合生元制剂在畜牧生产中具有广泛的应用前景。目前市场上有大量的合生元组合产品，但由于不同益生菌与益生元和组合效应具有特异性，现有的合生元微生态制剂中菌株的稳定性得不到保证，益生元对益生菌的促进效应不明确。须了解特定益生菌与特定益生元的相容性和共生效应，才能获得更加适合在生产中使用的产品，改善畜禽肠道环境，促进机体健康。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对现有技术的上述不足，提供一种猪用合生元微生态制剂。本专利技术的另一目的是提供该猪用合生元微生态制剂的制备方法。本专利技术的又一目的是提供猪用合生元微生态制剂的应用。本专利技术的目的可通过以下技术方案实现：一种猪用合生元微生态制剂，由活菌数大于10.0logcfu/mL的植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)L47菌液，所述菌液质量2～3％的菊粉和/或2～3％的低聚果糖，及所述菌液质量5-10％的菌体保护剂混合均匀后冻干而成；所述的植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)L47保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2019年11月22日，保藏编号为CCTCCNO:M2019967。作为本专利技术的一种优选，所述的低聚果糖聚合度DP＝2-9，菊粉聚合度DP＝2-60，均为多种不同聚合度果聚糖的混合物。作为本专利技术的一种优选，所述的菌体保护剂选自脱脂奶粉、甘油或明胶。本专利技术所述的猪用合生元微生态制剂的制备方法，包含以下步骤：①植物乳杆菌L47通过在MRS培养基中，37℃培养24h进行菌体富集，离心、重悬后得到纯菌液；②活菌数大于10.0logcfu/mL的植物乳杆菌菌液中加入所述菌液质量3％的菊粉和/或3％的低聚果糖，加入所述菌液质量5-10％的菌体保护剂，混合后冻干即得。其中，所述的MRS培养基配方组成为：蛋白胨10.0g，牛肉膏10.0g，酵母膏5.0g，柠檬酸氢二铵2.0g，葡萄糖20.0g，吐温-801.0mL，乙酸钠5.0g，磷酸氢二钾2.0g，硫酸镁0.58g，硫酸锰0.25g，蒸馏水1000mL。本专利技术所述的猪用合生元微生态制剂在猪饲料中的应用。有益效果：本专利技术提供合生元制剂在体外生长24h，乳酸菌活菌数能够达到9.4logcfu/mL以上，乳酸浓度能够达到176.56mM以上。本专利技术通过配伍相互作用较强的益生菌及益生元，使两者能够协同作用，发挥“1+1>2”的效应，使用本专利技术提供的合生元饲料添加剂能够同时发挥乳酸菌和菊粉、低聚果糖的双重益生效果。该合生元微生态制剂可在单胃动物生产上应用，改善动物肠道菌群环境，促进动物生长。本专利技术提供菌株筛选自猪胃肠道，能够很好的耐受猪胃肠道的环境，有利于菌株在肠道中存活、增殖和定植；该菌株特异性强，生长速度快、产酸高、抑菌、无毒害；本专利技术提供的合生元饲料添加剂可在猪生产中使用，在高度集约化养殖模式下，能够达到改善猪生长性能及预防疾病的效果，促进养猪业的健康稳定发展。附图说明图1菌株在人工模拟胃肠液下的存活率图2不同益生元对益生菌生长曲线的影响生物材料保藏信息L47,分类命名为植物乳杆菌L47LactobacillusplantarumL47,保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉.武汉大学,保藏日期为2019年11月22日，保藏编号为CCTCCNO:M2019967。具体实施方式乳酸菌在肠道内发挥益生作用，需具有较快的生长速度，这有利于其在肠道内快速生长繁殖，而良好的产酸性能有助于抑制肠道内有害菌增殖。此外乳酸菌还需对胃肠道具有良好的耐受能力，以保证通过胃部的强酸性环境和肠道内的胆盐环境。同时，有些益生乳酸菌对抗生素不敏感，说明其本身可能存在耐药基因，这种耐药基因存在于稳定性较差的质粒上，可能会对畜禽和人类造成危害。依据以上原则初步筛选一株具有益生性能的猪源植物乳杆菌。并筛选与该益生菌株配伍效果较好的益生元作为组合，制备合生元饲料添加剂。实施例11.乳酸菌的分离、筛选从不同生长阶段猪(仔猪、生长育肥猪、母猪)的肠道粘膜、食糜、粪便中初步筛选出155猪乳酸菌，通过常规生化鉴定、产酸能力等筛选出4株产酸能力较强的乳酸菌。2.模拟胃肠道消化人工胃液：在pH为2.5的无菌生理盐水中，分别加入3.0g/L胃蛋白酶，充分溶解后，用无菌微孔滤膜(0.22μm)过滤除菌，得到人工胃液，备用。人工肠液：在pH为8.0的无菌生理盐水中，加入1.0g/L胰蛋白酶和1.8g/L胆盐，充分溶解后，过滤除菌备用。将活化后的菌液按10％(v/v)的接种量接入上述人工胃液中，于37℃培养4h；接入人工肠液中培养20h。采用涂布平板法对菌液进行活菌计数，并计算存活率。三株乳酸菌在胃肠道中的存活率较高。其中，L47在pH2.5的人工胃液消化4h，其存活率达到了99.11％，且在模拟肠液消化后存活率达到了60％。将L47送交CCTCC保藏，保藏编号为CCTCCM2019967。3益生菌、益生元复配组合筛选分别将菊粉、低聚果糖、低聚半乳糖和乳果糖(10g/L)作为唯一碳源替代MRS中的葡萄糖制备培养基，以含葡萄糖的MRS培养基作为阳性对照。将活化至平台期(1.0×108)的乳酸菌按1％(v/v)的比例分别接种至上述培养基(10mL)中，于不同时间点测定菌液的光密度值(OD600)并绘制生长曲线，评价不同益生元对益生菌生长的影响，筛选出最优组合。如图2所示，与葡萄糖组相比，植物乳杆菌L47在与菊粉和低聚果糖复配时其最大OD600值最高(分别为1.05vs0.96和1.04vs0.96)。因此，选择植物乳杆菌L47分别与菊粉和低聚果糖作为最佳组合进行下一步试验。<本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种猪用合生元微生态制剂，其特征在于由活菌数大于10.0log cfu/mL的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)L47菌液，所述菌液质量2～3％的菊粉和/或2～3％的低聚果糖，及所述菌液质量5-10％的菌体保护剂混合均匀后冻干而成；所述的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)L47保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2019年11月22日，保藏编号为CCTCC NO:M2019967。/n
【技术特征摘要】
1.一种猪用合生元微生态制剂，其特征在于由活菌数大于10.0logcfu/mL的植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)L47菌液，所述菌液质量2～3％的菊粉和/或2～3％的低聚果糖，及所述菌液质量5-10％的菌体保护剂混合均匀后冻干而成；所述的植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)L47保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2019年11月22日，保藏编号为CCTCCNO:M2019967。
2.根据权利要求1所述的猪用合生元微生态制剂，其特征在于所述的低聚果糖聚合度DP＝2-9，菊粉聚合度DP＝2-60，均为多种不同聚合度果聚糖的混合物。
3.根据权利要求1所述的猪用合生元微生态制剂，其特征在于所述的菌体保护剂选自脱脂奶粉、甘油或明胶。
【专利技术属性】
技术研发人员：杭苏琴，朱晓峰，张桢，李英英，崔雷鸿，
申请(专利权)人：南京农业大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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