【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于将核酸偶联至官能化的载体的方法和组合物序列表本申请含有序列表，其已经以ASCII格式电子地提交，且特此通过引用整体并入。创建于2018年8月22日的所述ASCII副本被命名为LT01290PCT_SL.txt且具有1,529的大小。本专利技术涉及用于将核酸偶联至官能化的表面或固体载体的方法和组合物。具体地，本专利技术涉及用于将胺化的核酸偶联至被羧酸基团官能化的载体的方法和组合物，以及这样的经修饰的载体用于多种应用的用途。
技术介绍
可以为了多种应用将核酸固定化在固体载体上，所述应用包括在载体上的化学或酶促核酸合成、测序反应、用于纯化物质的亲和色谱法、或用在体外诊断中以鉴别和定量非常少量的靶标的杂交测定。固定化的核酸经常被用于从复杂混合物或生物样品特异性地分离靶配体，其中将核酸设计成与期望的靶分子选择性地杂交。适合用于固定化核酸的不同类型的材料是本领域已知的，包括尼龙、硝化纤维素、活化的琼脂糖、重氮化的纤维素、胶乳颗粒、塑料、聚苯乙烯、玻璃和聚合物包被的表面。这些材料以许多形式使用，诸如膜、平板、载玻片、芯片、树脂、珠、...
【技术保护点】
1.一种用于将核酸偶联至载体的方法，所述方法包括：/n(a)提供载体，所述载体在其上包含羧酸基团，/n(b)提供核酸，其中所述核酸包含至少一个伯胺官能团，/n(c)通过使在载体上的羧酸基团与碳二亚胺或其衍生物接触以形成反应性酸酐来活化所述载体，/n(d)使所述反应性酸酐与所述核酸的至少一个伯胺官能团反应以形成共价酰胺键，由此将所述核酸偶联至所述载体，/n其中在有机溶剂存在下进行步骤(c)和(d)。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170911 GB 1714563.21.一种用于将核酸偶联至载体的方法，所述方法包括：
(a)提供载体，所述载体在其上包含羧酸基团，
(b)提供核酸，其中所述核酸包含至少一个伯胺官能团，
(c)通过使在载体上的羧酸基团与碳二亚胺或其衍生物接触以形成反应性酸酐来活化所述载体，
(d)使所述反应性酸酐与所述核酸的至少一个伯胺官能团反应以形成共价酰胺键，由此将所述核酸偶联至所述载体，
其中在有机溶剂存在下进行步骤(c)和(d)。
2.根据权利要求1所述的方法，其中在盐存在下进行步骤(c)和(d)。
3.根据权利要求2所述的方法，其中所述盐是无机盐。
4.根据权利要求2或3中任一项所述的方法，其中所述盐是LiCl或NaCl。
5.根据权利要求2至4中任一项所述的方法，其中所述盐以至少约0.1M且小于约1.0M或至少约0.2M且小于约0.8M的浓度存在于步骤(c)和/或(d)中。
6.根据权利要求2至5中任一项所述的方法，其中在用在步骤(c)中之前，将所述盐溶解在有机溶剂中。
7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述有机溶剂选自二甲基亚砜、二甲基甲酰胺和二乙基亚砜或其混合物。
8.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述有机溶剂以每总体积至少约50％且小于95％的浓度存在于步骤(c)和/或步骤(d)中。
9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中在有水或水性缓冲液存在下进行步骤(c)和/或步骤(d)，其中所述水或水性缓冲液的浓度是每总体积小于20％，优选地小于10％。
10.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述碳二亚胺是EDC。
11.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中在用在步骤(c)中之前，将所述碳二亚胺或其衍生物溶解在水性缓冲液中。
12.根据权利要求11所述的方法，其中所述水性缓冲液是MES或咪唑缓冲液。
13.根据权利要求11或权利要求12所述的方法，其中所述水性缓冲液包含在约5.0和约7.0之间的pH。
14.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中在约4.5和约7.0之间的pH执行步骤(c)和/或(d)。
15.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中在用在步骤(c)中之前，在有机溶剂中提供所述载体。
16.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中在用在步骤(d)中之前，在有机溶剂中提供所述核酸。
17.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中在步骤(c)中活化所述载体之前，将所述核酸与所述载体组合。
18.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中在步骤(c)中活化所述载体之后，将所述核酸与所述载体组合。
19.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中以约10和约10,000pmol/mg载体之间或约50和约5,000pmol/mg载体之间的浓度提供所述核酸。
20.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中在室温执行步骤(c)和(d)。
21.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中将步骤(d)执行至少3小时，优选地至少10小时。
22.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中在步骤(d)中，将所述载体上至少0.1％的羧酸基团键合至核酸分子。
23.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述方法还包括(e)将步骤(d)的偶联溶液和所述载体分离并且洗涤所述载体，任选地其中用水性溶液或水执行所述洗涤。
24.根据权利要求23所述的方法，其中所述方法还包括(f)使所述载体与NaOH溶液接触和/或加热所述载体。
25.一种组合物，其包含：
在其上包含羧酸基团的载体，
包含至少一个伯胺官能团的核酸，
碳二亚胺或其衍生物，和
有机溶剂。
26.一种组合物，其包含：
在其上包含羧酸基团的载体，
其中所述羧酸基团的至少第一部分被反应性酸酐修饰且所述羧酸基团的至少第二部分经由羰基-酰胺键键合至核酸，
有机溶剂，和
任选的异脲副产物。
27.根据权利要求26所述的组合物，进一步包含：
在溶液中具有至少一个伯胺官能团的核酸，
和/或碳二亚胺或其衍生物。
28.根据权利要求26或27所述的组合物，其中经由羰基-酰胺键键合至核酸的载体上的羧酸基团的百分比是至少0.1％，优选地至少0.2％。
29.一种用于将核酸偶联至固体载体的试剂盒，包含：
在其上包含羧酸基团的载体，
有机溶剂，
碳二亚胺或其衍生物，
和任选的核酸。
30.根据权利要求25至29...
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。