一种获得超慢生根瘤菌同源单/双交换突变体的方法技术

本发明专利技术公开了一种获得超慢生根瘤菌同源单/双交换突变体的方法。该方法包括：将受体菌(超慢生根瘤菌)、供体菌(含有携带靶基因上下游同源臂的pJQ200SK质粒)和辅助菌(含有辅助质粒)进行三亲接合；从所得菌苔中筛选所述受体菌的同源单交换突变体；然后利用含有蔗糖的培养基筛选所述受体菌的同源双交换突变体。本发明专利技术方法不仅有助于花生慢生根瘤菌基因功能和与植物互作的研究，而且对于研究其它超慢生根瘤菌的共生机制也有非常重要的借鉴意义。

A method of obtaining homologous single / double exchange mutants of Rhizobia

【技术实现步骤摘要】
一种获得超慢生根瘤菌同源单/双交换突变体的方法
本专利技术涉及生物
，具体涉及一种获得超慢生根瘤菌同源单/双交换突变体的方法。
技术介绍
根瘤菌与豆科植物共生形成根瘤或茎瘤，可将空气中的氮转化为植物可以利用的氨，供给植物生长必须的氮素。根瘤菌种类很多，目前已经鉴定发表了一百多个种。其中慢生根瘤菌属(Bradyrhizobium)被认为是根瘤菌进化的祖先，具有更加广泛的环境适应性和抗逆能力，也是很多重要的经济豆科作物的主要共生根瘤菌，比如大豆，花生，菜豆，绿豆等。因此，对慢生根瘤菌与豆科植物的共生互作研究具有重要的理论和实际意义。花生和大豆的主要根瘤菌虽然都是慢生根瘤菌，但是却是完全不能互接的菌群。对于慢生根瘤菌与豆科植物的共生认识主要来自于对大豆-大豆慢生根瘤菌共生体系的研究，而对花生-花生慢生根瘤菌共生体系的研究非常罕见，主要的原因之一是花生慢生根瘤菌生长速度超慢，培养过程中易遭杂菌污染，遗传操作困难，常规的大豆慢生根瘤菌的遗传操作方法并不适用于花生慢生根瘤菌，无法获得其稳定的遗传突变体，从而不能开展深入的遗传学研究。因此，探索本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种获得超慢生根瘤菌同源单交换突变体的方法，包括如下步骤：/n(A)将受体菌、供体菌和辅助菌进行三亲接合；/n所述受体菌为待突变的野生型超慢生根瘤菌；/n所述供体菌为含有pJQ200SK-UD载体的大肠杆菌，所述pJQ200SK-UD载体为将含有上下游同源臂序列的DNA片段克隆到pJQ200SK质粒中所得的重组质粒；所述上下游同源臂序列为在所述野生型超慢生根瘤菌基因组中的位于靶基因上下游的序列；/n所述辅助菌为含有辅助质粒的大肠杆菌；/n(B)从三亲接合后所得的菌苔中筛选所述受体菌的同源单交换突变体。/n

【技术特征摘要】
1.一种获得超慢生根瘤菌同源单交换突变体的方法，包括如下步骤：
(A)将受体菌、供体菌和辅助菌进行三亲接合；
所述受体菌为待突变的野生型超慢生根瘤菌；
所述供体菌为含有pJQ200SK-UD载体的大肠杆菌，所述pJQ200SK-UD载体为将含有上下游同源臂序列的DNA片段克隆到pJQ200SK质粒中所得的重组质粒；所述上下游同源臂序列为在所述野生型超慢生根瘤菌基因组中的位于靶基因上下游的序列；
所述辅助菌为含有辅助质粒的大肠杆菌；
(B)从三亲接合后所得的菌苔中筛选所述受体菌的同源单交换突变体。


2.一种获得超慢生根瘤菌同源双交换突变体的方法，包括权利要求1中的步骤(A)、步骤(B)和如下步骤(C)：
(C)将所述同源单交换突变体在含有蔗糖的培养基上进行培养，筛选得到所述受体菌的同源双交换突变体。


3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：步骤(A)中，所述辅助质粒为pRK2013质粒。


4.根据权利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于：步骤(A)中，进行所述三亲接合时，所述受体菌的数量与所述供体菌和所述辅助菌的数量之和的比值为10:1；
进一步地，所述供体菌的数量多于所述辅助菌的数量；
更进一步地...

【专利技术属性】
技术研发人员：隋新华，尚佼颖，吴月，陈腊，李可可，霍斌，贾玉文，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：北京;11