一种测定人血清中阿立哌唑、氯氮平、氯丙嗪、利培酮和9-OH利培酮药物浓度的方法技术

本发明专利技术公开了精神病类药物的临床血药浓度测定方法技术领域，具体领域为一种检测人血清中阿立哌唑、氯丙嗪、氯氮平、利培酮、9‑OH利培酮含量的方法，其检测方法包括如下步骤：标准溶液制备、检测血液的离心、待测样本处理及样品的测定，将五种待测组分合并为一个检测方法，将三种前处理方法整合为一种前处理方法；一次分析即测出五个物质，极大程度的缩短了分析时间，减少了有机溶剂的用量进而降低对环境的污染；降低了最低定量下限，通过对高效液相色谱‑串联质谱法条件进行选择及限定使得分析时间缩短为7min。

A method for the determination of aripiprazole, clozapine, chlorpromazine, risperidone and 9-OH risperidone in human serum

【技术实现步骤摘要】
一种测定人血清中阿立哌唑、氯氮平、氯丙嗪、利培酮和9-OH利培酮药物浓度的方法
本专利技术涉及精神病类药物的临床血药浓度测定方法
，具体领域为一种检测人血清中阿立哌唑、氯丙嗪、氯氮平、利培酮、9-OH利培酮含量的方法。
技术介绍
氯丙嗪是经典的抗精神分裂症药物，临床上主要用于治疗精神分裂症、躁狂症及顽固性呃逆；氯氮平是一种对阳性症状、阴性症状和认知障碍均有较好效果的非典型抗精神病药，为目前我国治疗精神分裂症的常用药物之一；阿立哌唑被誉为“第三代抗精神病药物”，用于治疗精神分裂症和双向情感障碍症；利培酮及其活性代谢产物9-OH利培酮用于治疗急性和慢性精神分裂症，特别是对伴发的情感症状有较好的治疗效果。在临床应用时，药物治疗剂量范围大，在体内代谢的个体差异悬殊，体内血药浓度与临床疗效和不良反应密切相关，检测其血药浓度从而调整剂量，减少不良反应，在临床用药中具有重大意义。目前常用的阿立哌唑、氯丙嗪、氯氮平、利培酮、9-OH利培酮血药浓度的测定方法主要是液相色谱串联质谱法，但都是对五种药物的单独测定，分别用不同的前处理方法对血清进行处理，并且用不同的仪器方法进行测定，这就消耗了大量的时间，提高的检测的成本，增加了患者的等待时间。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种检测人血清中阿立哌唑、氯丙嗪、氯氮平、利培酮、9-OH利培酮含量的方法，采用高效液相色谱-串联质谱法，把内标法与高效液相色谱串联质谱法相结合，建立一种快速、灵敏的测定人血浆中阿立哌唑、氯丙嗪、氯氮平、利培酮、9-OH利培酮含量的方法，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种检测人血清中阿立哌唑、氯丙嗪、氯氮平、利培酮、9-OH利培酮含量的方法，采用高效液相色谱-串联质谱法进行检测，其检测方法包括如下步骤：步骤1：标准溶液制备通过标准品的混合标准工作液，制成标准曲线系列溶液，所述标准品分别为阿立哌唑、氯丙嗪、氯氮平、利培酮、9-OH利培酮，五个标准品共用一个内标溶液，所述内标溶液为氯氮平-D4溶液；步骤2：检测血液的离心取待检测血液，进行离心分离操作，取上清液得血清，将上述血清冷冻保存至分析前备用；步骤3：待测样本处理(1)用移液枪移取内标工作液于离心管中，加入步骤2中制备的血清，以涡旋震荡的方式进行混合；(2)用移液枪移取甲酸的乙腈溶液加入(1)中的离心管中，以涡旋震荡的方式进行混合，然后进行离心分离操作，得到上清液；(3)用移液枪移取(2)中的上清液于离心管中，加入复溶液，以涡旋震荡的方式进行混合，得到的溶液即为待测样品；步骤4：样品的测定(4)标准曲线的制备首先将步骤1中不同浓度的标准工作液分别和正常人空白血清混合制成标准工作血药，按照步骤3中的步骤进行处理，得到的标曲样品进仪器进行检测，得出上述标准溶液的阿立哌唑、氯丙嗪、氯氮平、利培酮、9-OH利培酮和内标色谱图，在色谱图中分别得到标准目标物峰面积和内标物峰面积，以标准目标物峰面积与内标物峰面积的比值作为标准曲线图的纵坐标y，以标准工作液配制后血清中待测目标物血药浓度与内标工作液浓度的比值即相对浓度作为标准曲线图的横坐标x，将以上检测数据通过加权最小二乘法进行线性回归，得到标准曲线方程为y＝a×x+b，并且得出权重系数a和b。(5)待测样品的测定使用高效液相色谱串联质谱分析仪器对上述(3)中待测的样品进行检测，得出上述待测样品的阿立哌唑、氯丙嗪、氯氮平、利培酮、9-OH利培酮和内标色谱图，在上述阿立哌唑、氯丙嗪、氯氮平、利培酮、9-OH利培酮和内标色谱图中得到待测目标物峰面积和内标峰面积，带入到(4)中的标准曲线方程中计算阿立哌唑、氯丙嗪、氯氮平、利培酮、9-OH利培酮的浓度。所述高效液相色谱-串联质谱法条件为：色谱采用AgilentEclipsePlusC183.5μm,4.6×100mm色谱柱；柱温为35℃，流动相A相为含1mmol甲酸铵的甲醇，B相为含5mmol甲酸铵的水进行梯度洗脱，流速0.5mL/min,进样量5μL，分析时间7min；质谱采用电喷雾离子源，在正离子电离模式下，选择多反应检测模式的质谱扫描方式进行测定，阿立哌唑、氯丙嗪、氯氮平、利培酮、9-OH利培酮和内标阿立哌唑、氯丙嗪、氯氮平、利培酮、9-OH利培酮的母离子分别为为448.2、319.1、326.9、411.1、427.0，子离子分别为285.1、86、270.1、191、207，保留时间分别为6.1、4.52、4.5、3.21、2.90min。优选的，步骤1中所述标准工作液的配置个数为7。优选的，七种不同浓度的所述标准工作液分别为含有0.2ug/mL、0.4ug/mL、1ug/mL、4ug/mL、10ug/mL、20ug/mL、40ug/mL浓度的阿立哌唑和氯氮平；0.1ug/mL、0.2ug/mL、0.5ug/mL、2ug/mL、5ug/mL、10ug/mL、20ug/mL浓度的氯丙嗪；0.02ug/mL、0.04ug/mL、0.1ug/mL、0.4ug/mL、1ug/mL、2ug/mL、4ug/mL浓度的利培酮、9-OH利培酮溶液。优选的，(3)中所述复溶液由70％含1mmol甲酸铵的甲醇和30％含5mmol甲酸铵的水组成。本专利技术的有益效果是：一种检测人血清中阿立哌唑、氯丙嗪、氯氮平、利培酮、9-OH利培酮含量的方法，将五种待测组分合并为一个检测方法，将三种前处理方法整合为一种前处理方法；一次分析即测出五个物质，极大程度的缩短了分析时间，减少了有机溶剂的用量进而降低对环境的污染；降低了最低定量下限。通过对高效液相色谱-串联质谱法条件进行选择及限定，色谱采用AgilentEclipsePlusC183.5μm,4.6×100mm色谱柱；柱温为35℃，流动相A相为含1mmol甲酸铵的甲醇，B相为含5mmol甲酸铵的水进行梯度洗脱，流速0.5mL/min,进样量5μL，使得分析时间缩短为7min；质谱采用电喷雾离子源，在正离子电离模式下，选择多反应检测模式的质谱扫描方式进行测定，阿立哌唑、氯丙嗪、氯氮平、利培酮、9-OH利培酮和内标阿立哌唑、氯丙嗪、氯氮平、利培酮、9-OH利培酮的母离子分别为为448.2、319.1、326.9、411.1、427.0，子离子分别为285.1、86、270.1、191、207，保留时间分别为6.1、4.52、4.5、3.21、2.90min。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例，对本专利技术的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例：步骤1：标准溶液制备七种不同浓度的标准工作液分别为含有0.2ug/mL、0.4ug/mL、1ug/mL、4ug/mL、10ug/mL、20ug本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测人血清中阿立哌唑、氯丙嗪、氯氮平、利培酮、9-OH利培酮含量的方法，采用高效液相色谱-串联质谱法进行检测，其特征在于：其检测方法包括如下步骤：/n步骤1：标准溶液制备/n通过标准品的混合标准工作液，制成标准曲线系列溶液，所述标准品分别为阿立哌唑、氯丙嗪、氯氮平、利培酮、9-OH利培酮，五个标准品共用一个内标溶液，所述内标溶液为氯氮平-D4溶液；/n步骤2：检测血液的离心/n取待检测血液，进行离心分离操作，取上清液得血清，将上述血清冷冻保存至分析前备用；/n步骤3：待测样本处理/n(1)用移液枪移取内标工作液于离心管中，加入步骤2中制备的血清，以涡旋震荡的方式进行混合；/n(2)用移液枪移取甲酸的乙腈溶液加入(1)中的离心管中，以涡旋震荡的方式进行混合，然后进行离心分离操作，得到上清液；/n(3)用移液枪移取(2)中的上清液于离心管中，加入复溶液，以涡旋震荡的方式进行混合，得到的溶液即为待测样品；/n步骤4：样品的测定/n(4)标准曲线的制备/n首先将步骤1中不同浓度的标准工作液分别和正常人空白血清混合制成标准工作血药，按照步骤3中的步骤进行处理，得到的标曲样品进仪器进行检测，得出上述标准溶液的阿立哌唑、氯丙嗪、氯氮平、利培酮、9-OH利培酮和内标色谱图，在色谱图中分别得到标准目标物峰面积和内标物峰面积，以标准目标物峰面积与内标物峰面积的比值作为标准曲线图的纵坐标y，以标准工作液配制后血清中待测目标物血药浓度与内标工作液浓度的比值即相对浓度作为标准曲线图的横坐标x，将以上检测数据通过加权最小二乘法进行线性回归，得到标准曲线方程为y＝a×x+b，并且得出权重系数a和b。/n(5)待测样品的测定/n使用高效液相色谱串联质谱分析仪器对上述(3)中待测的样品进行检测，得出上述待测样品的阿立哌唑、氯丙嗪、氯氮平、利培酮、9-OH利培酮和内标色谱图，在上述阿立哌唑、氯丙嗪、氯氮平、利培酮、9-OH利培酮和内标色谱图中得到待测目标物峰面积和内标峰面积，带入到(4)中的标准曲线方程中计算阿立哌唑、氯丙嗪、氯氮平、利培酮、9-OH利培酮的浓度。/n所述高效液相色谱-串联质谱法条件为：色谱采用Agilent Eclipse Plus C18 3.5μm,4.6×100mm色谱柱；柱温为35℃，流动相A相为含1mmol甲酸铵的甲醇，B相为含5mmol甲酸铵的水进行梯度洗脱，流速0.5mL/min,进样量5μL，分析时间7min；质谱采用电喷雾离子源，在正离子电离模式下，选择多反应检测模式的质谱扫描方式进行测定，阿立哌唑、氯丙嗪、氯氮平、利培酮、9-OH利培酮和内标阿立哌唑、氯丙嗪、氯氮平、利培酮、9-OH利培酮的母离子分别为为448.2、319.1、326.9、411.1、427.0，子离子分别为285.1、86、270.1、191、207，保留时间分别为6.1、4.52、4.5、3.21、2.90min。/n...

【技术特征摘要】
1.一种检测人血清中阿立哌唑、氯丙嗪、氯氮平、利培酮、9-OH利培酮含量的方法，采用高效液相色谱-串联质谱法进行检测，其特征在于：其检测方法包括如下步骤：
步骤1：标准溶液制备
通过标准品的混合标准工作液，制成标准曲线系列溶液，所述标准品分别为阿立哌唑、氯丙嗪、氯氮平、利培酮、9-OH利培酮，五个标准品共用一个内标溶液，所述内标溶液为氯氮平-D4溶液；
步骤2：检测血液的离心
取待检测血液，进行离心分离操作，取上清液得血清，将上述血清冷冻保存至分析前备用；
步骤3：待测样本处理
(1)用移液枪移取内标工作液于离心管中，加入步骤2中制备的血清，以涡旋震荡的方式进行混合；
(2)用移液枪移取甲酸的乙腈溶液加入(1)中的离心管中，以涡旋震荡的方式进行混合，然后进行离心分离操作，得到上清液；
(3)用移液枪移取(2)中的上清液于离心管中，加入复溶液，以涡旋震荡的方式进行混合，得到的溶液即为待测样品；
步骤4：样品的测定
(4)标准曲线的制备
首先将步骤1中不同浓度的标准工作液分别和正常人空白血清混合制成标准工作血药，按照步骤3中的步骤进行处理，得到的标曲样品进仪器进行检测，得出上述标准溶液的阿立哌唑、氯丙嗪、氯氮平、利培酮、9-OH利培酮和内标色谱图，在色谱图中分别得到标准目标物峰面积和内标物峰面积，以标准目标物峰面积与内标物峰面积的比值作为标准曲线图的纵坐标y，以标准工作液配制后血清中待测目标物血药浓度与内标工作液浓度的比值即相对浓度作为标准曲线图的横坐标x，将以上检测数据通过加权最小二乘法进行线性回归，得到标准曲线方程为y＝a×x+b，并且得出权重系数a和b。
(5)待测样品的测定
使用高效液相色谱串联质谱分析仪器对上述(3)中待测的样品进行检测，得出上述待测样品的阿立哌唑、氯丙嗪、氯氮平、利培酮、9-OH利培酮和内标色谱图，在上述阿立哌唑、氯丙嗪、氯氮平、利培酮、9-OH利培酮和内标色谱图中得到待测目标物峰面积和内标峰面积，带入...

【专利技术属性】
技术研发人员：王琳，隋文雯，徐恒宇，
申请(专利权)人：沈阳和合医学检验所有限公司，
类型：发明
国别省市：辽宁;21