热稳定性提高的DNA聚合酶突变体及其构建方法和应用技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体涉及一种热稳定性提高的DNA聚合酶突变体及其构建方法和应用。本发明专利技术提供的DNA聚合酶突变体包括单点突变体和组合突变体，与野生型DNA聚合酶(AAA32368.1)相比，其单点突变体和组合突变体在65℃下半衰期均更长；尤其是组合突变体，表现出单点突变体热稳定性的叠加效果，其半衰期大约是野生型DNA聚合酶(AAA32368.1)的3倍。基于此，本发明专利技术所提供的DNA聚合酶突变体的热稳定性更好，适于在较高的温度下单分子核序中应用。

DNA polymerase mutant with improved thermal stability and its construction and Application

【技术实现步骤摘要】
热稳定性提高的DNA聚合酶突变体及其构建方法和应用
本专利技术属于生物
，具体涉及一种热稳定性提高的DNA聚合酶突变体及其构建方法和应用。
技术介绍
高通量测序技术(High-throughputsequencing)又称“下一代”测序技术("Next-generation"sequencingtechnology)，以能够一次并行对几十万到几百万条DNA分子进行序列测定和一般读长较短等为标志。单分子测序技术(Single-moleculesequencing)是高通量测序技术的主流发展方向，能够对单个DNA分子进行高通量、长度长的序列读取，并在短时间内获取大量序列信息，因而得到了广泛关注和研究。单分子测序技术的原理分为：边合成边测序方法和直接读取方法，其中，边合成边测序方法的技术成熟度最好、市场接受度最高，该方法利用DNA聚合酶合成与模板互补的DNA链，在核苷酸聚合过程中释放出特异性的荧光信号，从而在三维空间中记录模板位置和核苷酸序列信息，再通过数据处理反向构建DNA模板的序列。DNA聚合酶(DNApolymerase)是边合成本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种热稳定性提高的DNA聚合酶突变体，其特征在于，所述DNA聚合酶突变体为如下(a1)或(a2)：/n(a1)将SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸且与SEQID NO.2所示的蛋白具有相同功能的衍生蛋白；/n(a2)通过一个或多个氨基酸残基取代SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列的一个或多个位置且与SEQ ID NO.2所示的蛋白表现出至少95％同源性的衍生蛋白。/n

【技术特征摘要】
1.一种热稳定性提高的DNA聚合酶突变体，其特征在于，所述DNA聚合酶突变体为如下(a1)或(a2)：
(a1)将SEQIDNO.2所示的氨基酸序列经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸且与SEQIDNO.2所示的蛋白具有相同功能的衍生蛋白；
(a2)通过一个或多个氨基酸残基取代SEQIDNO.2所示的氨基酸序列的一个或多个位置且与SEQIDNO.2所示的蛋白表现出至少95％同源性的衍生蛋白。


2.根据权利要求1所述的热稳定性提高的DNA聚合酶突变体，其特征在于，SEQIDNO.2所示的氨基酸序列的取代位点为第481位、第170位、第318位、第284位、第99位、第499位、第371位、第436位、第243位、第365位、第194位以及第214位。


3.根据权利要求1或2所述的热稳定性提高的DNA聚合酶突变体，其特征在于，所述DNA聚合酶突变体包括在SEQIDNO.2所示的氨基酸序列上A481K、I170L、V318A、R284F、M99E、Q499E、E371A、F436I、M243Y、T365Y、G194I、P214N中任一单点突变位点的单点突变体。


4.根据权利要求3所述的热稳定性提高的DNA聚合酶突变体，其特征在于，所述DNA聚合酶突变体包括在SEQIDNO.2所示的氨基酸序列上V318A/M99E/Q499E/P2...

【专利技术属性】
技术研发人员：马富强，周连群，郭振，张艺凡，杨广宇，唐玉国，
申请(专利权)人：中国科学院苏州生物医学工程技术研究所，
类型：发明
国别省市：江苏;32