铁剂在制备抗肝癌转移药物中的应用制造技术

本发明专利技术涉及医药技术领域，具体是铁剂在制备抗肝癌转移药物中的应用。本发明专利技术优点在于：本发明专利技术研究发现肝癌缺铁可显著促进肝癌转移，通过活体成像拍照观察可见给小鼠补充铁显著抑制其原位肝癌向肺部转移，显著抑制肺部肝癌细胞的数量及分布范围，表明补充铁具有抗肝癌肺转移的作用，具有良好的临床应用前景。

Application of iron in the preparation of anti metastasis drugs for liver cancer

【技术实现步骤摘要】
铁剂在制备抗肝癌转移药物中的应用
本专利技术涉及医药
，具体地说，是铁剂在制备抗肝癌转移药物中的应用。
技术介绍
肝癌是世界范围内的一大严重健康问题，其每年新发病例超过85万，是全球第二大致死癌症，且死亡率逐年上升。肝癌转移是肝癌患者死亡的主要原因，肝癌转移机制目前尚不清楚，且目前无有效方法预防转移的发生。铁元素是细胞内含铁酶/含血红素酶的活性因子，影响细胞多种生理、病理过程。研究显示，肝癌患者的肝癌组织铁含量明显下降，目前国内外尚无肝癌缺铁与肝癌转移的相关报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供铁剂在制备抗肝癌转移药物中的应用。本专利技术研究发现，发生转移肝癌患者的癌组织铁含量显著低于未发生转移肝癌患者，缺铁通过免疫抑制及非免疫依赖途径促进肝癌细胞体内转移。基于前期研究基础，我们认为补充铁能否有效抑制肝癌体内转移这个问题非常值得关注，是否能通过补充铁达到肝癌患者“带癌生存”的目的？因此本专利技术观察了补充铁对肝癌转移的抑制作用，为防治肝癌转移提供新方法。本专利技术的第一方面，提供铁剂在制备抗肝癌转移药物中的应用。进一步的，所述的铁剂包括口服铁剂和注射剂铁剂。所述的口服铁剂为硫酸亚铁、乳酸亚铁、葡萄糖酸亚铁、富马酸亚铁、右旋糖酐铁、琥珀酸亚铁、多糖铁等；所述的注射剂铁剂为右旋糖酐铁、山梨醇铁和蔗糖铁等。进一步的，所述的肝癌转移为肝癌肺转移。进一步的，所述的肝癌转移为原位肝癌向肺部转移。进一步的，所述的铁剂抑制肺部肝癌细胞的数量及分布范围。本专利技术的第二方面，提供一种抗肝癌转移药物，其活性成分为铁。进一步的，所述的抗肝癌转移药物还包括药学上可接受的载体或辅料。本专利技术优点在于：本专利技术提供了一种通过补充铁防治肝癌转移的新方法。本专利技术研究发现肝癌缺铁可显著促进肝癌转移，在本专利技术中我们给小鼠饲料添加铁剂，并喂食肝脏原位荷瘤小鼠。通过活体成像拍照观察可见给小鼠补充铁显著抑制其原位肝癌向肺部转移，显著抑制肺部肝癌细胞的数量及分布范围，表明补充铁具有抗肝癌肺转移的作用，具有良好的临床应用前景。附图说明图1.肝脏原位荷瘤小鼠第50天活体成像拍照(n＝5)。图2.肝脏原位荷瘤小鼠肺部转移情况分析。A：肺部转移肝癌细胞发光强度分析；B：肺部转移肝癌细胞分布面积分析。补充铁组与对照组相比：*，p<0.05；**，p<0.01；***，p<0.001。各组n＝5。图3.肝癌患者癌组织铁含量与癌旁组织铁含量比较。***，p<0.001。n＝29。图4.发生转移肝癌患者癌组织铁含量与未发生转移肝癌患者癌组织铁含量比较。*，p<0.05。n＝15。图5.多种缺铁模型中肝癌细胞的肺转移情况。A：肝癌细胞在喂食缺铁饲料的C57小鼠缺铁模型中的肺转移情况。B：敲除TFRC基因导致肝癌细胞内缺铁后在C57小鼠体内的肺转移情况。C：肝癌细胞在敲除TFRC基因的C57小鼠缺铁模型中的肺转移情况。D：肝癌细胞在喂食缺铁饲料的裸鼠缺铁模型中的肺转移情况。*，p<0.05；**，p<0.01；***，p<0.001。各组n＝3。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术提供的具体实施方式作详细说明。实施例1：一、实验方法1.肝癌细胞荧光素酶标记H22细胞荧光素酶标记使用荧光素酶标记试剂盒，含慢病毒介导的萤光素酶标记液及polybrene，通过CAG启动子过表达萤光素酶从而作为报告基因。感染操作如下：(1)细胞传代到100mm培养皿中，过夜，此时细胞密度不超过60％；(2)将萤光素酶标记液1ml与新鲜细胞培养液3ml混匀，加入4μlpolybrene使其终浓度8ng/ml。(3)每间隔15-30min轻轻晃动被标记的细胞培养皿，持续2h，之后培养皿中补充等体积的新鲜培养液，培养过夜后换液。(4)感染48h后用萤光素酶检测试剂盒检测标记效果。2.小鼠肝脏原位荷瘤取4-6周龄小鼠，消毒腹部皮肤，使用戊巴比妥麻醉。将处于对数生长期细胞(荧光素酶标记H22)与Matrigel混匀形成细胞悬液(2×107/ml)。体视镜下，沿小鼠左肋弓下缘切一长约0.5cm斜行无菌微切口，剥开腹肌，暴露肝脏。抽取0.1ml细胞Matrigel悬液，使针尖与裸鼠肝脏呈30度进针，刺入肝脏不宜太浅或太深，缓慢注入细胞悬液。注射完毕后，用明胶海绵压迫止血并缝合腹肌和皮肤。3.小鼠补充铁干预措施10只C57/BL6小鼠随机分为两组，每组样本量5只，10只均肝脏原位种植荧光素酶标记H22肝癌细胞。肝脏原位荷瘤后对照组喂食正常饲料；补充铁组喂食含3％右旋糖酐铁(w/w)的富铁饲料。肝脏荷瘤后每10天拍照一次，连续拍5次。4.活体成像拍照分析(1)启动活体成像仪，加入麻醉剂异氟烷，打开氧气阀和麻醉器阀。(2)小鼠腹腔注射10mg/ml的荧光素酶底物150μl，等待2分钟使底物扩散。(3)小鼠放入麻醉小室内，打开开关，使小鼠彻底麻醉。(4)麻醉的小鼠至于成像仪的暗室中曝光60秒，期间打开暗室麻药开关维持小鼠麻醉状态。(5)曝光结束后记录拍照信息。(6)利用活体成像仪配套软件处理实验数据，得到实验图和数据二、实验结果活体成像拍照可见给荷瘤小鼠补充铁可显著抑制肝脏原位瘤的肺转移(图1，拍摄于第50天)。分析肝癌细胞发光强度及分布面积显示，给荷瘤小鼠补充铁显著抑制肺部肝癌细胞的数量及分布范围，表明补充铁具有抗肝癌肺转移的作用(图2)。实施例2：一、实验方法1.肝癌患者的收集经患者知情同意及伦理委员会批准后，在第二军医大学附属长海医院、附属东方肝胆医院收集29例诊断为肝癌的患者肝癌组织、癌旁组织，利用火焰原子吸收分光光度计检测标本中总铁含量。在复旦大学附属中山医院肝癌研究中心生物标本平台获得肝癌术后5年内发生肝癌转移患者的手术切除标本15例，5年内未发生转移患者的手术切除标本15例，利用火焰原子吸收分光光度计检测标本中总铁含量。2.多种缺铁模型的建立通过喂食缺铁饲料造成C57小鼠、裸鼠缺铁模型；通过敲除C57小鼠转铁蛋白受体基因(TFRC，杂合)造成小鼠缺铁模型；通过敲降肝癌细胞H22转铁蛋白受体基因(TFRC)，造成肝癌细胞内缺铁模型。3.肝癌细胞肝脏原位荷瘤及活体成像肝癌细胞H22在C57小鼠的肝脏原位荷瘤方法及活体成像拍照分析方法同实施例1。肝癌细胞Huh7的荧光标记及在裸鼠的肝脏原位荷瘤、活体成像拍照分析同实施例1。二、实验结果肝癌患者的癌组织铁含量显著低于癌旁组织铁含量(图3)，5年内发生肝癌转移的癌组铁含量显著低于未发生肝癌转移的癌组织铁含量(图4)。在多种缺铁小鼠模型中均显示缺铁显著促进肝癌细胞肺转移(图5)。以上已对本专利技术创造的较佳实施本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.铁剂在制备抗肝癌转移药物中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.铁剂在制备抗肝癌转移药物中的应用。


2.根据权利要求1所述的铁剂在制备抗肝癌转移药物中的应用，其特征在于，所述的铁剂包括口服铁剂和注射剂铁剂；所述的口服铁剂为硫酸亚铁、乳酸亚铁、葡萄糖酸亚铁、富马酸亚铁、右旋糖酐铁、琥珀酸亚铁、多糖铁；所述的注射剂铁剂为右旋糖酐铁、山梨醇铁和蔗糖铁。


3.根据权利要求1所述的铁剂在制备抗肝癌转移药物中的应用，其特征在于，所述的肝癌转移为肝癌肺转移。

【专利技术属性】
技术研发人员：汤雨潇，王冬尧，李敏，
申请(专利权)人：中国人民解放军第二军医大学，
类型：发明
国别省市：上海;31