黄芪多肽的制备方法及其在制备化妆品中的应用技术

本发明专利技术涉及多肽提取技术领域，尤其涉及黄芪多肽的制备方法及其在制备化妆品中的应用。本发明专利技术提供的方法将黄芪粉碎后，经超临界二氧化碳流体处理，再以裂解液进行裂解后，过滤取滤液；所述滤液依次经盐析、清洗、烘干、研磨、酶解、脱色、超滤，获得黄芪多肽。该方法合理控制了提取步骤中的各个参数，从而使得多次提取的结果保持一致。通过对分子量进行控制，获得了具有良好生理功能以及渗透效果的黄芪多肽。实验表明，本发明专利技术提供的黄芪多肽能够抑制MMPs的表达，促进Tolloid‑like protein 1 precursor的表达，且渗透效果良好。

Preparation of Astragalus polypeptide and its application in cosmetics

【技术实现步骤摘要】
黄芪多肽的制备方法及其在制备化妆品中的应用
本专利技术涉及多肽提取
，尤其涉及黄芪多肽的制备方法及其在制备化妆品中的应用。
技术介绍
多肽是蛋白质片段，结构介于氨基酸和蛋白质之间，广泛存在于动、植物体内，参与调节着机体各项生理活动。人体很多活性物质都是以肽的形式存在的。肽涉及人体的激素、神经、细胞生长和生殖各领域，其重要性在于调节体内各个系统和细胞的生理功能，激活体内有关酶系，促进中间代谢膜的通透性，或通过控制DNA转录或影响特异的蛋白合成，最终产生特定的生理效应。肽是涉及人体内多种细胞功能的重要物质。肽可以合成细胞，并调节细胞的功能活动。肽在人体作为神经递质，传递信息。肽可在人体作为运输工具，将人体所食的各种营养物质与各种维生素、生物素、钙及对人体有益的微量元素输送到人体各细胞、器官和组织。肽是人体重要的生理调节物，它可全面调节人体生理功能，增强和发挥人体生理活性，它具有重要的生物学功能。近年来随着医学上对生物多肽的研究表明多肽具有高活性且易吸收的特点，基于小分子肽的特殊生理活性作用，近年来肽类在化妆品中应用越来越普遍，多种研究结果表明多肽能在本质上改善皮肤的一系列问题。目前市面上主流的多肽大部分为氨基酸合成来源，虽然随着合成技术的不断发展，多肽的合成的费用在不断下降，合成的效率也有所提高，但是仍然无法改变现有的多肽的来源为化学合成，合成的多肽价格仍然昂贵的现状。化学合成的手段不符合目前消费者对天然来源化妆品的追求的趋势，且价格相对昂贵，普通消费者无法享受含有高浓度多肽给皮肤问题带来的有效解决。通过水解天然来源的蛋白质可以获得相对于合成的多肽安全性更高，成本更加低廉的多肽，但是现有的蛋白质水解多肽产物由于没有合理的控制蛋白质来源，没有控制水解酶的水解过程，没有选取功效更加突出的多肽片段等问题，导致水解得到的多肽无法保证质量和功效，更无法保证是否能够被皮肤吸收。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术要解决的技术问题在于提供黄芪多肽的制备方法，该方法制得的黄芪多肽不仅具有良好的生理活性，还能够具有良好的透皮吸收效果，本专利技术还提供了该多肽在制备化妆品中的应用。本专利技术所述黄芪多肽的制备方法包括：将黄芪粉碎后，经超临界二氧化碳流体处理，再以裂解液进行裂解后，过滤取滤液；所述滤液依次经盐析、清洗、烘干、研磨、酶解、脱色、超滤，获得黄芪多肽；所述裂解的裂解液包括三羟甲基氨基甲烷、十二烷基硫酸钠、甘油、2-巯基乙醇、L-半胱氨酸；所述酶解采用胰蛋白酶和米胰蛋白酶。本专利技术中，所述超临界二氧化碳流体处理的萃取温度为60～80℃，萃取压力为150～350bar。例如，萃取温度为60℃、65℃、70℃、75℃、80℃。萃取压力为150bar、200bar、250bar、300bar、350bar。一些实施例中，所述超临界二氧化碳流体处理的萃取温度为70℃，萃取压力为350bar。所述黄芪粉碎至粒径为2～4mm，再经超临界二氧化碳流体处理。本专利技术采用超临界二氧化碳流体对黄芪粉末进行提取，去除掉黄芪粉末中的油脂；另外由于有少部分水分存在的情况下，部分糖类被清除掉，减少糖对蛋白质提取的影响；同时超临界二氧化碳流体对黄芪组织的细胞结构有破坏作用，细胞结构被破坏后有利于蛋白质的提取。所述超临界二氧化碳流体处理后，裂解液裂解之前还经过研磨，研磨至粒径为10μm±5μm。所述研磨采用研磨机，时间为10～20min。具体实施例中，研磨的时间为15min。本专利技术中，所述裂解液由如下体积分数的组分组成：所述裂解液不仅更有利于蛋白质从黄芪组织中溶解出来，还能够保护蛋白质的氨基酸序列的稳定，使其在裂解过程中不被降解。其中，三羟甲基氨基甲烷的体积分数为0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％或1.0％。所述十二烷基磺酸钠的体积分数为0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％或1.0％。甘油的体积分数为5％、10％、15％或20％。2-巯基乙醇的体积分数为0.01％、0.03％、0.05％、0.07％或0.1％。所述L-半胱氨酸的体积分数为0.01％、0.05％、0.1％、0.2％、0.3％、0.4％或0.5％。一些实施例中，所述裂解液由如下体积分数的组分组成：本专利技术中，所述裂解步骤中：黄芪与裂解液的质量比为1:1～5；一些实施例中，所述黄芪与裂解液的质量比为1:1、1:2、1:3、1:4或1:5。搅拌速度为500～700rpm，pH值为8.0～9.0，一些实施例中，所述搅拌速度为600rpm，pH值为8.4，常温裂解1～5小时。一些是实施例中，所述裂解的时间为1h、2h、3h、4h或5h。一些具体实施例中，所述裂解步骤中：黄芪与裂解液的质量比为1：4；搅拌速度为600rpm，pH值为8.4，常温裂解2小时。所述常温为18～30℃。所述裂解后，经过过滤，所述过滤的孔径依次为0.8μm、0.45μm。所述过滤后弃除残渣，留取滤液。本专利技术中，所述盐析采用硫酸铵；所述硫酸铵与滤液的质量比为1:(0.1～1.0)；所述盐析的条件为搅拌溶解后，室温静置6h。一些实施例中，所述硫酸铵与滤液的质量比为1:0.1、1:0.2、1:0.3、1:0.4、1:0.5、1:0.6、1:0.7、1:0.8、1:0.9或1:1.0。一些实施例中，所述硫酸铵与滤液的质量比为1:0.528。所述室温为18～30℃。所述盐析后进行过滤。所述过滤采用真空过滤装置。其中滤片的孔径为0.45μm。过滤后弃除滤液留取蛋白质沉淀。本专利技术中，所述清洗采用去离子水。所述去离子水的温度为0～-4℃，具体实施例中，所述去离子水的温度为-4℃。所述清洗的去离子水的体积与进行盐析的溶液的体积比为2:1。本专利技术中，所述烘干的温度为35～45℃，具体实施例中，烘干的温度为40℃。所述烘干后，研磨采用研磨机，研磨时间30分钟，研磨至粒径为0.2μm±0.05μm。本专利技术中，所述酶解步骤中，研磨后的提取物粉末以碳酸氢铵溶液溶解，以胰蛋白酶和糜蛋白酶进行酶解，条件为37℃，600rpm搅拌酶解12～24h；其中胰蛋白酶与提取物粉末的质量比为(0.01～1.0):1，所述糜胰蛋白酶与提取物粉末的质量比为(0.01～1.0):1。一些实施例中，所述胰蛋白酶与提取物粉末的质量比为0.01:1、0.02:1、0.03:1、0.04:1、0.05:1、0.06:1、0.07:1、0.08:1、0.09:1或1.0:1。所述糜胰蛋白酶与提取物粉末的质量比为0.01:1、0.02:1、0.03:1、0.04:1、0.05:1、0.06:1、0.07:1、0.08:1、0.09:1或1.0:1。一些实施例中，所述胰蛋白酶与糜胰蛋白酶的质量比为(1～10)：(1:10)。例如，胰蛋白酶与糜胰蛋白酶的质量比可为1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10、10:1、本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.黄芪多肽的制备方法，其特征在于，包括：/n将黄芪粉碎后，经超临界二氧化碳流体处理，再以裂解液进行裂解后，过滤取滤液；/n所述滤液依次经盐析、清洗、烘干、研磨、酶解、脱色、超滤，获得黄芪多肽；/n所述裂解的裂解液包括三羟甲基氨基甲烷、十二烷基硫酸钠、甘油、2-巯基乙醇、L-半胱氨酸；/n所述酶解采用胰蛋白酶和米胰蛋白酶。/n

【技术特征摘要】
1.黄芪多肽的制备方法，其特征在于，包括：
将黄芪粉碎后，经超临界二氧化碳流体处理，再以裂解液进行裂解后，过滤取滤液；
所述滤液依次经盐析、清洗、烘干、研磨、酶解、脱色、超滤，获得黄芪多肽；
所述裂解的裂解液包括三羟甲基氨基甲烷、十二烷基硫酸钠、甘油、2-巯基乙醇、L-半胱氨酸；
所述酶解采用胰蛋白酶和米胰蛋白酶。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述超临界二氧化碳流体处理的萃取温度为60～80℃，萃取压力为150～350bar。


3.根据权利要求1～2任一项所述的方法，其特征在于，所述裂解液由如下体积分数的组分组成：





4.根据权利要求1～3任一项所述的方法，其特征在于，所述裂解步骤中：黄芪与裂解液的质量比为1:1～5；搅拌速度为600rpm，pH值为8.4，常温裂解1～5小时。


5.根据权利要求1～4任一项所述的方法，其特征在于，...

【专利技术属性】
技术研发人员：戴跃锋，何广文，颜少慰，钱景茹，
申请(专利权)人：湖南御家化妆品制造有限公司，
类型：发明
国别省市：湖南;43