【技术实现步骤摘要】
一种用于遗传代谢病中氨基酸含量检测方法
本专利技术属于氨基酸检测领域，具体涉及一种用于遗传代谢病中氨基酸含量检测方法。
技术介绍
代谢组学分析对象是生物体液(血液、尿液、唾液等)、细胞提取物、细胞培养液或组织中分子量小于1000的小分子化合物，参与机体新陈代谢、生长发育等过程，包括氨基酸、脂质、糖、维生素等。妊娠状态下代谢产物的浓度会异常变化，通过对代谢物的分析能够更深入了解机体妊娠状态，预防可能的出现的新生儿遗传病如苯丙酮尿症。氨基酸作为构成生物营养所需蛋白质的基本物质，是代谢组学分析常见的目物质。加强中孕期妇女氨基酸测定于遗传病防治具有重要意义但人体血清中成分复杂，已知的方法检测氨基酸费时费力，很难快速识别血液中氨基酸成分及含量。血清氨基酸的检测主要方法有氨基酸分析仪法，氨基酸分析仪的衍生化反应是发生在柱后，即氨基酸与其它物质分离之后，因而避免了其它物质对氨基酸检测的干扰。但此方法衍生反应要求苛刻，因此检测结果重复性较差，且氨基酸分析仪价格较高而检测时间长。为了更便捷地检测血液中氨基酸含量...
【技术保护点】
1.一种用于遗传代谢病中氨基酸含量检测方法，其特征在于，利用高效液相色谱法及近红外光谱法对血清中含有的氨基酸进行检测，具体检测方法为：高效液相色谱条件设定、供试品溶液的制备、对照品溶液的制备；近红外光谱采集、近红外光谱数据模型建立。/n
【技术特征摘要】
1.一种用于遗传代谢病中氨基酸含量检测方法，其特征在于，利用高效液相色谱法及近红外光谱法对血清中含有的氨基酸进行检测，具体检测方法为：高效液相色谱条件设定、供试品溶液的制备、对照品溶液的制备；近红外光谱采集、近红外光谱数据模型建立。
2.根据权利要求1所述的氨基酸含量检测方法，其特征在于，所述血清中含有的氨基酸进行检测具体是指以下氨基酸：天冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、甘氨酸、组氨酸、精氨酸、苏氨酸、丙氨酸、脯氨酸、酪氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、色氨酸及赖氨酸。
3.根据权利要求1所述的含量检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱条件设定为：AgilentC18柱规格为：250mm×4.6mm，5μm，进样量5～10μL，体积流量1mL/min，柱温20～30℃，检测波长254nm；流动相A相乙腈，B相水，进行梯度洗脱，具体洗脱程序为：0min,100％B,0％A；0-20min,100-70％B,0-30％A；20min,70％B,30％A；20-30min,70％-20％B,30％-80％A；30min,20％B,80％A。
4.根据权利要求3所述的含量检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱条件设定为：AgilentC18柱规格为：250mm×4.6mm，5μm，进样量10μL，体积流量1mL/min，柱温25℃，检测波长254nm；流动相A相乙腈，B相水，进行梯度洗脱，具体洗脱程序为：0min,100％B,0％A；0-20min,100-70％B,0-30％A；20min,70％B,30％A；20-30min,70％-20％B,30％-80％A；30min,20％B,80％A。
5.根据权利要求1所述的含量检测方法，其特征在于，所述供试品溶液的制备方法为：精密吸取血清100～200μL置于1.5mL离心管中，准确加入30μL0.63mg/mL的γ-氨基丁酸储备液，加入400～600μL3％磺基水杨酸溶液，漩涡混匀60s，10000r/min转速离心25-30min，上清液待用，衍生化反应精密吸取处理后血清上清液150～250μL，置1.5mL离心管中，准确加入20μL浓度0.63mg/mL茶氨酸储备液，加入V/V＝1:1的30～50μL三乙胺乙腈溶液，加入100～150μL乙腈溶液，加入100～150μL异硫氰酸苯酯乙腈溶液，混匀，于36～40℃水浴锅中衍生1h～1.5h，然后加入350～450μL正己烷，振摇后放置10min，取下层溶液，过0.22μm滤膜，即得。
6.根据权利要求5所述的含量检测方法，其特征在于，所述供试品溶液的制备方法为：精密吸取血清150μL置于1.5mL离心管中，准确加入30μL0.63mg/mL的γ-氨基丁酸储备液，加入500μL3％磺基水杨酸溶液，漩涡混匀60s，10000r/min转速离心28min，上清液待用，衍生化反应精密吸取处理后血清上清液200μL，置1.5mL离心管中，准确加入20μL浓度0.63mg/mL茶氨酸储备液，加入V/V＝1:1的40μL三乙胺乙腈溶液，加入120μL乙...
【专利技术属性】
技术研发人员：潘卫，肖子文，李琴芬，唐瑶，周遵伦，赵丹青，王正蓉，朱科静，钱雯，张競之，
申请(专利权)人：贵州医科大学，
类型：发明
国别省市：贵州;52
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