一种禾花鲤精子冷冻保存方法技术

本发明专利技术公开了一种禾花鲤精子冷冻保存方法，其包括精液采集、精液稀释、精子冷冻保存和精子解冻四个步骤，采用人工腹部挤压法采集禾花鲤的精液，然后将精液与稀释液混合后，再与抗冻液混合得到精子保存液，所述稀释液为D‑15稀释液，Hank’s液和鱼用任氏液中的任意一种；所述抗冻剂为甲醇、二甲基亚砜和甘油中的任意一种；接着将精子保存液注入冻存管中，再浸入液氮长期保存；取用时将装有精子保存液的冻存管从液氮中取出，然后立即置于温度为27℃或37℃或47℃的水浴锅中解冻，再将得到的禾花鲤精子用于人工授精。本发明专利技术方法能够长期保存禾花鲤的精子，且解冻复苏后精子成活率高。

A cryopreservation method of spermatozoa of Cyprinus carpio

【技术实现步骤摘要】
一种禾花鲤精子冷冻保存方法
本专利技术属于生物学低温冷冻保存
，具体涉及一种禾花鲤精子冷冻保存方法。
技术介绍
禾花鲤属鲤科温水性小型鱼类，又称禾花乌鲤﹑禾花鲤﹑禾花鱼﹑乌鲤，体型粗壮，全身略带紫色（乌褐），背部黑色，色彩亮丽，原产于广西桂林，属中国土著鱼类，是具有地方特色的养殖品种。禾花鲤肉质细腻．刺少肉多，骨软无腥味，味道鲜美，蛋白质含量高，且禾花鲤在稻田里混养，食性杂，生长快，繁殖能力强，养殖周期短，具有很高的营养价值和经济价值。随着禾花鲤养殖规模的逐年增加，对禾花鲤种苗的需求也逐渐增大，对禾花鲤种苗的品质要求也逐年提高。人工繁殖可以使禾花鲤集中产卵，提高鱼卵受精率、孵化率和鱼苗成活率，并做到有计划地生产。因为禾花鲤的繁育具有季节性，在非繁育季节时，禾花鲤雄性个体的精子浓度低、精子活性下降，所以需要在繁育季节采集并长期保存禾花鲤的精子，以便于禾花鲤全年的繁育生产需要，提高禾花鲤在非繁育季节时的人工授精效率和育苗成活率，但是目前少有能够长期保存禾花鲤精子以及复苏的方法。
技术实现思路
针对上述不足，本专利技本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种禾花鲤精子冷冻保存方法，其特征在于：包括如下步骤：/n（1）精液采集：在禾花鲤繁育季节，选择性腺成熟的健壮雄性亲鱼，麻醉后用干毛巾擦干鱼体生殖孔周围水分和黏液，再沿着中线轻轻挤压腹部至生殖孔流出乳白色精液，用注射器吸取精液，防止尿液、血液和水混入，将采集的精液注入冻存管中；/n（2）精液稀释：先将步骤（1）中采集到的精液与稀释液按照体积比为1:3的比例混合稀释得到溶液A，然后将溶液A与抗冻液按照体积比为1:1的比例混合后得到禾花鲤的精子保存液；所述抗冻液是由以下体积分数的组分组成：10%或20%或30%抗冻剂，余量为稀释液；所述稀释液为D-15稀释液，Hank’s液和鱼用任氏液中的任意...

【技术特征摘要】
1.一种禾花鲤精子冷冻保存方法，其特征在于：包括如下步骤：
（1）精液采集：在禾花鲤繁育季节，选择性腺成熟的健壮雄性亲鱼，麻醉后用干毛巾擦干鱼体生殖孔周围水分和黏液，再沿着中线轻轻挤压腹部至生殖孔流出乳白色精液，用注射器吸取精液，防止尿液、血液和水混入，将采集的精液注入冻存管中；
（2）精液稀释：先将步骤（1）中采集到的精液与稀释液按照体积比为1:3的比例混合稀释得到溶液A，然后将溶液A与抗冻液按照体积比为1:1的比例混合后得到禾花鲤的精子保存液；所述抗冻液是由以下体积分数的组分组成：10%或20%或30%抗冻剂，余量为稀释液；所述稀释液为D-15稀释液，Hank’s液和鱼用任氏液中的任意一种；所述抗冻剂为甲醇、二甲基亚砜和甘油中的任意一种；
（3）精子冷冻保存：将步骤（2）得到的精子保存液注入冻存管中，再将冻存管置于在4℃下平衡30min，接着将冻存管置于液氮表面上方4cm处停留5min，然后将冻存管浸入液氮长期保存；或者将冻存管置于在4℃下平衡30min，接着将冻存管置于液氮表面上方8cm处停留5min，然后将冻存管浸入液氮长期保存；或者将冻存管置于在4℃下平衡30min，接着将冻存管置于液氮表面上方8cm处停留5min，再将冻存管置于液氮表面上方4cm处停留5min，然后将冻存管浸入液氮长期保存；
（4）精子解冻：将装有精子保存液的冻存管从液氮中取...

【专利技术属性】
技术研发人员：张曼，谭虹雨，陈秀荔，杨春玲，王振光，杨艳艳，
申请(专利权)人：广西大学，
类型：发明
国别省市：广西;45