尿胱抑素C、尿微量白蛋白和尿肌酐定量免疫胶体金检测卡及试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种尿胱抑素C、尿微量白蛋白和尿肌酐定量免疫胶体金检测卡，包括卡扣盒、底板和依次粘贴在底板上的样品垫、结合垫、层析膜和吸样垫，所述结合垫上涂覆有胶体金标记的胱抑素C抗体Ⅰ、尿微量白蛋白抗体Ⅰ、尿肌酐抗体Ⅰ和鸡IgY，所述层析膜上设有包被胱抑素C抗体Ⅱ的第一检测线、包被尿微量白蛋白抗体Ⅱ的第二检测线，包被有BSA修饰的尿肌酐抗原的第三检测线以及包被羊抗鸡IgY的质控线。本发明专利技术所得的U‑mAlb/U‑Cr比值比单一检测U‑mALb和U‑Cr值更能灵敏的反应肾功能损伤程度，提高检测结果的准确度。

Urine cystatin C, microalbumin and creatinine quantitative immunogold detection card and kit

【技术实现步骤摘要】
尿胱抑素C、尿微量白蛋白和尿肌酐定量免疫胶体金检测卡及试剂盒
本专利技术涉及胶体金免疫层析
，更具体地，涉及一种尿胱抑素C、尿微量白蛋白和尿肌酐定量免疫胶体金检测卡及试剂盒。
技术介绍
慢性肾病为我国常见的高发性疾病，成人发病率达到10.8％，慢性肾病若不能有效控制，则会进展为终末期肾病，此时病人需靠透析或肾脏移植来维持生命。故对慢性肾病的早期筛查和诊断，及时对慢性肾病进行干预治疗，实现受损的肾功能逆转对慢性肾病的防治具有重要意义。胱抑素C(CystatinC，CysC)是半胱氨酸蛋白酶的细胞外抑制剂，属于II型胱抑素基因家族，是一种13.359KD的非糖蛋白质。CysC在体内产生速率恒定，其在血浆中的浓度受其他因素影响小，是评价肾小球滤过率的良好标志物。当肾功能受损时，CysC在肾小管的重吸收受阻，导致尿液中CysC浓度显著增加，故尿CysC(U-CysC)浓度的检测是评估肾功能的一项重要指标。尿微量白蛋白(U-mALb)是尿液中出现的微量白蛋白，正常生理条件下白蛋白基本上不被肾小球滤过，尿液中仅出现极少量白蛋白，当肾脏微血管发生病变时，改变了肾脏对白蛋白的滤过功能，导致尿液中微量白蛋白含量大大增加，因此尿微量白蛋白是肾病的早期筛查和诊断的重要指标。目前U-mALb的检测需采集病人24小时尿样本，取样过程麻烦且费时，而且U-mALb的含量随尿液的量变化，导致检测结果的准确性不高。同时检测尿液中U-mALb和尿肌酐(U-Cr)的值，再用U-Cr值对U-mALb进行校正，可减小尿样收集过程和尿量对U-mALb检测结果的影响，所得U-mAlb/U-Cr比值比单一检测U-mALb和U-Cr值更能灵敏的反应肾功能损伤程度，提高检测结果的准确度，对肾病早期筛查和诊断具有重要的临床意义。但目前市场上已有的产品多为针对单一指标的检测试剂盒，仅有少量的产品可同时检测U-mALb、U-Cr以及U-mALb/Cr比值，且相关检测方法操作复杂，检测成本高。公开号为CN108088839B的中国专利技术专利公开了一种尿微量白蛋白/尿肌酐检测试剂盒，对尿微量白蛋白和尿肌酐均采用化学发光的方法检测；但是在使用过程中需要对尿肌酐检测试剂和样本进行震荡孵育，操作复杂，检测时间长。故需开发可集成的、操作简便的多项目联合检测试条来解决现实的临床诊断需求，减少患者取样过程中的不便对检测结果的影响，提高早期肾病诊断的准确度。
技术实现思路
本专利技术的目的在于针对现有技术中的不足，提供一种尿胱抑素C、尿微量白蛋白和尿肌酐定量免疫胶体金检测卡及试剂盒，可同时检测U-CysC、U-mALb和U-Cr三项指标，简化了检验操作，提高了肾病筛查的灵敏度。本专利技术的目的通过以下技术方案实现：一种尿胱抑素C、尿微量白蛋白和尿肌酐定量免疫胶体金检测卡，所述免疫胶体金检测卡包括卡扣盒、底板和依次粘贴在底板上的样品垫、结合垫、层析膜和吸样垫；所述结合垫上涂覆有胶体金标记的胱抑素C抗体Ⅰ、尿微量白蛋白抗体Ⅰ、尿肌酐抗体Ⅰ和鸡IgY，所述层析膜上设有包被胱抑素C抗体Ⅱ的第一检测线、包被尿微量白蛋白抗体Ⅱ的第二检测线，包被有BSA修饰的尿肌酐抗原的第三检测线以及包被羊抗鸡IgY的质控线。进一步地，所述底板为PVC板，所述层析膜为硝酸纤维膜，所述吸样垫为吸水滤纸，所述样品垫和结合垫为玻璃纤维材质。进一步地，所述卡扣盒上在样品垫上方的位置设有加样孔，在层析膜上方的位置设有长方形视窗。一种上述尿胱抑素C、尿微量白蛋白和尿肌酐定量免疫胶体金检测卡的制备方法，包括以下步骤：S1.制备胶体金标记抗体应用溶液：采用胶体金溶液分别将胱抑素C抗体Ⅰ、尿微量白蛋白抗体Ⅰ、尿肌酐抗体Ⅰ和鸡IgY标记于胶体金表面，再将胶体金物质稀释至稳定缓冲液中，得到胶体金标记抗体应用溶液；S2.制备胶体金结合垫：将步骤S1中制备的胶体金标记胱抑素C抗体Ⅰ溶液，胶体金标记尿微量白蛋白抗体Ⅰ溶液，胶体金标记尿肌酐抗体Ⅰ溶液，胶体金标记鸡IgY溶液混合，将混合溶液用喷金机喷涂在结合垫上，得胶体金结合垫；S3.包被:将胱抑素C抗体Ⅱ、尿微量白蛋白抗体Ⅱ、有BSA修饰的尿肌酐抗原和羊抗鸡IgY分别喷在层析膜第一检测线、第二检测线、第三检测线和质控线位置上，烘干后得包被处理的层析膜；S4.制备免疫胶体金检测卡：将样品垫、胶体金结合垫、包被处理的层析膜和吸样垫依次粘贴在底板上，切裁制得试纸条，将试纸条固定在卡扣盒中得免疫胶体金检测卡。进一步地，步骤S1中所述胶体金溶液采用氯金酸-柠檬酸三钠法制备而成，所述制备过程如下：加热氯金酸溶液，煮沸后向溶液中加入，冷却定容后得胶体金溶液，氯金酸终浓度为0.04～0.06％，柠檬酸三钠终浓度为0.01～0.03％。进一步地，所述胶体金的颗粒大小为40～50mm。进一步地，步骤S1中所述标记过程具体操作为：调节胶体金溶液的pH至7.5，然后分别加入相应的抗体，搅拌反应30min，然后加入浓度为0.5％的BSA，继续搅拌5min，再加入0.4％的PEG20000，搅拌5min，然后静置10min，在15000r/min的转速，4℃条件下离心20min，去掉上清液，加入5ml悬浊液。进一步地，所述悬浊液成分如下：酪蛋白：1.5％、蔗糖：5％、PEG20000：1％、余量为pH7.5的0.02M磷酸缓冲溶液。进一步地，步骤S1中所述胶体金溶液用量为5ml，所述胱抑素C抗体Ⅰ用量为20～40μg，所述尿微量白蛋白抗体Ⅰ用量为30～50μg，所述胶体金标记尿肌酐抗体用量为30～50μg。进一步地，步骤S2中所述混合溶液中胶体金标记胱抑素C抗体Ⅰ溶液，胶体金标记尿微量白蛋白抗体Ⅰ溶液，胶体金标记尿肌酐抗体Ⅰ溶液，胶体金标记鸡IgY溶液的体积比为2:2:5:1。进一步地，步骤S3中所述胱抑素C抗体Ⅱ浓度为0.7～1.5mg/ml，包被条件为1.0～1.5μL/cm。进一步地，步骤S3中所述尿微量白蛋白抗体Ⅱ浓度为0.8～2.0mg/ml，包被条件为1.2～1.6μL/cm。进一步地，步骤S3中所述BSA修饰的尿肌酐抗原浓度为1.0～2.5mg/ml，包被条件为1.6～2.4μL/cm。进一步地，步骤S3中所述羊抗鸡IgY浓度为0.7～1.5mg/ml，包被条件为1.0～1.5μL/cm。进一步地，步骤S3中所述第一检测线、第二检测线、第三检测线和质控线两两间隔4～6mm。进一步地，步骤S4中所述试纸条宽度为3～5mm。一种设置有上述尿胱抑素C、尿微量白蛋白和尿肌酐定量免疫胶体金检测卡的试剂盒，所述试剂盒中还包括胶体金定量读数仪。与现有技术相比，本专利技术的有益效果如下：本专利技术简化了检验操作，可以对U-CysC、U-mALb和U-Cr三项指标进行联合检测，提高对早期肾病的检出率和检测准确度，对肾病的诊断与防治具有重要意义。本专利技术制备的试剂盒操作简单，可用胶体金定量读数仪读取各项指标；检测快速，10分钟作用即可本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种尿胱抑素C、尿微量白蛋白和尿肌酐定量免疫胶体金检测卡，其特征在于，所述免疫胶体金检测卡包括卡扣盒、底板和依次粘贴在底板上的样品垫、结合垫、层析膜和吸样垫；所述结合垫上涂覆有胶体金标记的胱抑素C抗体Ⅰ、尿微量白蛋白抗体Ⅰ、尿肌酐抗体Ⅰ和鸡IgY，所述层析膜上设有包被胱抑素C抗体Ⅱ的第一检测线、包被尿微量白蛋白抗体Ⅱ的第二检测线，包被有BSA修饰的尿肌酐抗原的第三检测线以及包被羊抗鸡IgY的质控线。/n

【技术特征摘要】
1.一种尿胱抑素C、尿微量白蛋白和尿肌酐定量免疫胶体金检测卡，其特征在于，所述免疫胶体金检测卡包括卡扣盒、底板和依次粘贴在底板上的样品垫、结合垫、层析膜和吸样垫；所述结合垫上涂覆有胶体金标记的胱抑素C抗体Ⅰ、尿微量白蛋白抗体Ⅰ、尿肌酐抗体Ⅰ和鸡IgY，所述层析膜上设有包被胱抑素C抗体Ⅱ的第一检测线、包被尿微量白蛋白抗体Ⅱ的第二检测线，包被有BSA修饰的尿肌酐抗原的第三检测线以及包被羊抗鸡IgY的质控线。


2.根据权利要求1所述的检测卡，其特征在于，所述底板为PVC板，所述层析膜为硝酸纤维膜，所述吸样垫为吸水滤纸，所述样品垫和结合垫为玻璃纤维材质。


3.根据权利要求1所述的检测卡，其特征在于，所述卡扣盒上在样品垫上方的位置设有加样孔，在层析膜上方的位置设有长方形视窗。


4.一种权利要求1~3任一项所述的尿胱抑素C、尿微量白蛋白和尿肌酐定量免疫胶体金检测卡的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1.制备胶体金标记抗体应用溶液：采用胶体金溶液分别将胱抑素C抗体Ⅰ、尿微量白蛋白抗体Ⅰ、尿肌酐抗体Ⅰ和鸡IgY标记于胶体金表面，再将胶体金物质稀释至稳定缓冲液中，得到胶体金标记抗体应用溶液；
S2.制备胶体金结合垫：将步骤S1中制备的胶体金标记胱抑素C抗体Ⅰ溶液，胶体金标记尿微量白蛋白抗体Ⅰ溶液，胶体金标记尿肌酐抗体Ⅰ溶液，胶体金标记鸡IgY溶液混合，将混合溶液用喷金机喷涂在结合垫上，得胶体金结合垫；
S3.包被:将胱抑素C抗体Ⅱ、尿微量白蛋白抗体Ⅱ、有BSA修饰的尿肌酐抗原和羊抗鸡IgY分别喷在层...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄钊，贾学恩，汤建新，
申请(专利权)人：湖南工业大学，
类型：发明
国别省市：湖南;43