一种多肽和多肽的应用及包含多肽的组合物制造技术

本申请提供了一种多肽，其特征在于，该多肽的氨基酸序列包括如SEQ ID No.1、SEQ ID No.2或SEQ ID No.3所示的序列。本申请还涉及所述的多肽在制备抗凝血的药物中的应用。本申请还涉及包含所述的多肽组合物。本申请还涉及一种氨基酸序列为SEQ ID NO.4的多肽在制备抗凝血的药物中的应用以及包括氨基酸序列为SEQ ID NO.4的多肽的组合物。本发明专利技术提供的多肽具有良好的抗凝血活性，具有良好的应用前景。

Application of polypeptide and polypeptide and composition containing polypeptide

【技术实现步骤摘要】
一种多肽和多肽的应用及包含多肽的组合物
本专利技术涉及一种多肽，该多肽在制备抗凝血药物中的应用，以及包含该多肽的组合物。
技术介绍
抗凝是指应用物理或化学方法除掉或抑制血液中的某些凝血因子，阻止血液凝固。目前心血管疾病(CardiovascularDisease，CVD)导致的死亡居全球死亡率首位，预计到2030年将会有超过2360万人死于心血管疾病，其中血栓类疾病是典型的心血管疾病，具有高发病率、高死亡率、高致残率及并发症多的特点。抗凝治疗是预防和治疗血栓的主要手段。抗凝药物是一类通过影响凝血过程中的不同环节以阻滞血液凝固，从而用来防治血栓形成的药物。常用的传统抗凝药物包括肝素类抗凝药物、维生素K拮抗剂华法林；新型抗凝药物如凝血酶抑制剂水蛭素、阿加曲班，Xa因子抑制剂利伐沙班等等。目前，抑制相关生理系统关键酶或者关键因子的活性是开发抗血栓产品的主要手段。凝血酶是研究抗血栓活性药物的最关键的作用靶点。凝血过程可视为级联式的限制性蛋白水解反应，其中凝血酶是整个凝血系统的关键酶，也是目前研究开发新型抗凝药物的关键靶点。当循环凝血因子在暴露的血管外组织与组织因子相接触时，凝血酶会在组织上聚集，通过激活血小板，催化纤维蛋白原转化为纤维蛋白，促进血块稳定。凝血酶抑制剂可通过直接或间接抑制凝血酶的活性，阻止凝血酶进一步水解纤维蛋白原，从而抑制纤维蛋白聚集，有效阻碍凝血过程的发生。水蛭素是较早被研究的可以抑制凝血酶活性的多肽，水蛭素与凝血酶分子表面上碱性氨基酸组成的纤维蛋白原识别位点结合，使凝血酶构型发生轻微改变，进而水蛭素与凝血酶的酶活性中心结合，从而抑制凝血酶的催化活性，阻止凝血酶和纤维蛋白原相互作用。基于水蛭素的抗凝血剂包括重组水蛭素(Lepirudin和Desirudin)和水蛭素类似物比伐卢定(Bivalirudin)。Lepirudin被FDA批准用于治疗肝素相关性血小板减少症(HIT)和相关的血栓栓塞性疾病，但由于商业原因于2012年被撤销。Disirudin被FDA批准用于预防髋关节后的深静脉血栓栓塞(DVT)或进行膝关节成形术。Bivalirudin被FDA批准用于治疗经皮冠状动脉(PCI)介入治疗后不稳定性心绞痛，HIT或HIT风险升高。这些凝血酶抑制剂的使用具有几个缺点，例如出血、对肾功能的强烈依赖、缺乏解毒剂和反弹高凝状态等。采采蝇凝血酶抑制剂TTI是从采采蝇的唾液腺提取物中分离得到的，比较N-端氨基酸顺序发现其与己经鉴定的丝氨酸蛋白酶抑制剂及其他天然抗凝剂无同源性。壁虱抗凝肽TAP是由60个氨基酸组成的单链酸性肽，可以与凝血酶的催化位点结合，分子结构与水蛭素类似，其通过与Xa因子结合，从而阻止凝血激酶复合物的形成，以抑制凝血酶原的激活。美拉加群是一种纤维蛋白二肽类似物，其抗凝机制是与凝血酶活性位点结合，可以竞争性直接抑制凝血酶。研发具有抑制凝血酶活性的多肽是近年来研发的热点。CN110139871A公开了用于治疗中风和相关凝血障碍的凝血酶抑制剂，用于抑制或改变凝血酶对纤维蛋白原切割的肽和多肽。CN102026652A公开了源自食血节肢动物唾液腺的凝血酶抑制剂，所述分子是具有氨基酸序列SDQGDVAEPKMHKTAPPFDFEAIPEEYLDDES的variegin蛋白或该蛋白的功能等价物。CN1137134C公开了具有抗凝作用的高选择性凝血酶抑制剂，多氟烷基色氨酸三肽以及含有它们的组合物。该化合物可用于治疗凝血酶相关的疾病以及防止血液和血液产品储存时凝固。目前已报道的各类具有抗凝血功能的活性肽，尽管抗凝效果良好，但同时也可能具有强烈的副作用，如血小板减少和引起出血等，存在安全隐患。有些抗凝血肽源自天然生物，含量极少且分离和纯化成本高，难以规模化生产。这些弊端促使研究者们极力开发更安全健康的抗血栓药物。而从天然物种发现新的天然抗凝血多肽，便于分析结构与作用的关系，对于进行重组和生物合成，研发新的天然的或重组的抗凝血药物，具有重要意义。
技术实现思路
一方面，本专利技术提供一种多肽，其特征在于，所述多肽的氨基酸序列包括如SEQIDNo.1、SEQIDNo.2或SEQIDNo.3所示的序列。优选地，所述多肽的氨基酸序列为如SEQIDNO.1：SYELPDGEVITIGDER、SEQIDNO.2：SYELPDGQVITIGDER或SEQIDNO.3：SYELPDGEVITIGNER所示的序列。另一方面，本专利技术还提供了所述多肽在制备抗凝血的药物中的应用。另一方面，本专利技术还提供了一种组合物，其中，该组合物包含本专利技术所提供的多肽。该组合物可作为药用组合物，也可作为保健品。另一方面，本专利技术还提供了一种氨基酸序列为SEQIDNO.4的多肽在制备抗凝血的药物中的应用。另一方面，本专利技术还提供了一种抗凝血的组合物，该组合物包括氨基酸序列为SEQIDNO.4的多肽。SEQIDNO.4的氨基酸序列为SYELPDGQVITIGNER。本专利技术提供的多肽具有良好的抗凝血活性，具有良好的应用前景，可以将它们用于制备抗凝血的各种医药和保健品。本专利技术提供的上述多肽可以直接向商业肽合成公司定制获得，或者采用可商购的自动合成仪、根据制造商的操作规程合成。附图说明图1：水蛭粗提物经亲和层析后的色谱图。图2：不同浓度的SEQIDNO.1多肽对抗凝血活性PT的抑制率分析。图3：不同浓度的SEQIDNO.1多肽对抗凝血活性PT的时间影响。图4：不同浓度的SEQIDNO.1多肽对抗凝血活性TT的抑制率分析。图5：不同浓度的SEQIDNO.1多肽对抗凝血活性TT的时间影响。图6：SEQIDNO.1多肽质谱图。具体实施方式通过下面给出的具体实施实例可以进一步解释清楚地理解本专利技术。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的药材原料、试剂材料等，如无特殊说明，均为市售购买产品。实施例11.亲和层析介质制备1.1偶联凝血酶：将Sepharose4FF用砂芯漏斗抽滤，用去离子水清洗抽干，将thrombin(100U/g-400U/g)与介质混合，加入1.4-1.7倍0.1mol/LNaHCO3缓冲液(pH7.5-9.5)室温下(0-25℃)摇床震荡，反应5-24h；1.2封闭未反应的环氧基砂芯漏斗抽滤，去离子水洗涤，放置于摇床上，加入1mol/L乙醇胺(pH8.5-10.0)室温下振荡反应2-12h，砂芯漏斗抽滤，去离子水洗涤，保存于去离子水中备用。1.3介质偶联蛋白量分析采用考马斯亮兰法测定偶联反应前后的蛋白溶液浓度，按差值法计算偶联蛋白的量。表1介质偶联蛋白量分析2.多肽的提取将水蛭饮片粉碎，过60目筛。取10g水蛭粉末，加入50ml生理盐水，超声提取10-60min。离心取上清液备用。3.抗凝血活性多肽的分离采用以凝血酶为配基的亲和层析填料装填亲和柱本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种多肽，其特征在于，该多肽的氨基酸序列包括如SEQ ID No.1、SEQ ID No.2或SEQ ID No.3所示的序列。/n

【技术特征摘要】
1.一种多肽，其特征在于，该多肽的氨基酸序列包括如SEQIDNo.1、SEQIDNo.2或SEQIDNo.3所示的序列。


2.如权利要求1所述多肽，其中，所述氨基酸序列为SEQIDNO.1、SEQIDNO.2、或SEQIDNO.3所示的序列。


3.如权利要求1或2所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：马莉，黄秋阳，张贵锋，孔英俊，刘加峰，高倩，
申请(专利权)人：首都医科大学，中国科学院过程工程研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11