一种建立DSE和AMF与植物共生体系的方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种建立深色有隔内生真菌(Dark septate endophytes，DSE)和丛枝菌根真菌(Arbuscular mycorrhizal fungi，AMF)与植物共生体系的方法及其应用，主要侧重于双接种的可实施性和可操作性，选择透气性好的珍珠岩作为基质，添加改良霍格兰溶液作为营养，满足了DSE‑植物共生体系建立的营养生长需求。待DSE‑植物共生体形成后移栽至盛有AMF菌剂的灭菌土壤，添加改良霍格兰作为营养液，满足了DSE‑AMF‑植物共生体系建立与后期生长的营养需求。本发明专利技术具有高效、简洁、易操作、明确、有序等优点，可用于DSE‑植物、AMF‑植物、AMF‑DSE‑植物相互关系研究、DSE和AMF形态学方面的研究，疑似AMF、DSE菌株初步检测和DSE、AMF、DSE和AMF接种的应用。

A method of establishing symbiotic system of DSE and AMF with plants and its application

【技术实现步骤摘要】
一种建立DSE和AMF与植物共生体系的方法及其应用
本专利技术属于菌根学、微生物学和生态学
，涉及一种建立DSE和AMF与植物共生体系的方法及其应用，具体为有效建立深色有隔内生真菌和丛枝菌根真菌与植物共生培养体系的方法及其应用。
技术介绍
在自然界中，植物根系会与一定种类的土壤真菌形成互利互惠共生体--菌根。菌根学上菌根主要有丛枝菌根(Arbuscularmycorrhizas,AM)、外生菌根真菌(Ectomycorrhizas,ECM)、内外菌根(Ectoendomycorrhizas,EEM)、水果鹃类菌根(Arbutoidmycorrhizas,ARM)、水晶兰类菌根(Monotropoidmycorrhizas,MM)、欧石南类菌根(Ericoidmycorrhizas,ERM)和兰科菌根(Orchidmycorrhizas,OM)七大类。其中，丛枝菌根真菌(Arbuscularmycorrhizalfungi,AMF)能与大部分的陆生植物共生，形成丛枝菌根，使得AMF成为陆地上分布最广泛的一类菌根。丛枝菌根真菌侵入植物本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种建立DSE和AMF与植物共生体系的方法，其特征在于：包括如下步骤：/nS1，DSE和AMF的活化和培养/nS101，DSE的活化、扩繁培养/n将低温保存的DSE菌株活化后，无菌条件下，接种到盛有马铃薯蔗糖琼脂培养基的培养皿中，于28℃恒温黑暗培养45d；/nS102，AMF扩繁/n将含有AMF纯菌种的沙土菌剂与灭菌沙土(W/W3:1)混合后放置于灭菌花盆中，再将无菌植物苗移栽至花盆中，按时浇洒无菌水以保证植物根系正常生长的水分需求，培养90d；/n将花盆置于日光下暴晒3d使沙土培养基处于干燥状态，除去植株地上部分，随机选取少量须根用于侵染状况检测,剩余根系烘干粉碎放入沙土培养基中混合后...

【技术特征摘要】
1.一种建立DSE和AMF与植物共生体系的方法，其特征在于：包括如下步骤：
S1，DSE和AMF的活化和培养
S101，DSE的活化、扩繁培养
将低温保存的DSE菌株活化后，无菌条件下，接种到盛有马铃薯蔗糖琼脂培养基的培养皿中，于28℃恒温黑暗培养45d；
S102，AMF扩繁
将含有AMF纯菌种的沙土菌剂与灭菌沙土(W/W3:1)混合后放置于灭菌花盆中，再将无菌植物苗移栽至花盆中，按时浇洒无菌水以保证植物根系正常生长的水分需求，培养90d；
将花盆置于日光下暴晒3d使沙土培养基处于干燥状态，除去植株地上部分，随机选取少量须根用于侵染状况检测,剩余根系烘干粉碎放入沙土培养基中混合后，装入塑封袋进行低温保存；
S2，植物无菌苗的培养
用75％乙醇和10％次氯酸钠对植物种子进行表面消毒，先将植物种子置于75％乙醇侵泡30-60秒，再将种子置于10％次氯酸钠溶液中消毒10min，最后用无菌水冲洗种子4-5次后，再将种子置于无菌水中浸泡20min使种子充分吸水饱胀；
充分吸水饱胀的植物种子接种到垫有无菌水浸湿已灭菌培养皿中，加入少量无菌水，于28℃光照培养箱中暗处理3d，待种子萌发露白1cm，挑选无污染且生长一致的幼苗备用；
S3，DSE和植物共生体系的建立
S301，共生培养基的制备
选取圆柱形玻璃容器，定量加入珍珠岩和霍格兰溶液，用无菌透气封口膜封口，于高压蒸汽灭菌锅121℃灭菌1h，取出置于无菌操作台中冷却备用；另取一份河沙灭菌备用；
S302，DSE与无菌植物幼苗的接种
无菌条件下，将培养于马铃薯蔗糖琼脂培养基中的DSE菌株切成2-3cm的正方形菌快置于圆柱形共生培养基质内，混匀；
在每个共生培养基质中接入2棵无菌幼苗，用培养基将幼苗根部埋好，上部覆一层1cm左右的灭菌沙盖住幼苗，用无菌透...

【专利技术属性】
技术研发人员：湛方栋，张光群，范旭杪，李天国，何永美，李明锐，阎凯，祖艳群，
申请(专利权)人：云南农业大学，
类型：发明
国别省市：云南;53