检测SOS1基因突变的方法、引物和试剂盒技术

本发明专利技术公开了检测Noonan综合征相关的SOS1基因突变的方法、引物和试剂盒，所述引物、试剂盒均包括针对SOS1基因致病突变对应显子的扩增引物和测序引物。基于PCR扩增和Sanger测序，本发明专利技术可快速地检测Noonan综合征相关的SOS1基因突变位点的突变情况。

【技术实现步骤摘要】
检测SOS1基因突变的方法、引物和试剂盒
本专利技术属生命科学和生物
，特别涉及检测Noonan综合征相关的SOS1基因突变的方法、引物和试剂盒。
技术介绍
Noonan综合征(NS)是一种先天遗传性疾病，为常染色体显性遗传病，呈完全外显率，但表现度不一，而且大多数的病例属散发类型。该病由Noonan在1968年首次报道，存活的新生儿中发病率约为1/25001～1/1000，男女均可发病。该病的主要特征包括特殊面容、身材矮小、胸部畸形，并且会伴有先天性心脏病等。Noonan综合征的病理生理机制还不明确，但是目前已经确定该病与RAS/RAF/MEK/ERK信号转导通路上的部分基因突变相关，RAS/RAF/MEK/ERK信号转导通路是细胞生长的重要调控因素。其中约50％的患者出现PTPN11基因突变，10％～13％患者出现SOS1突变，另外RAF1、RIT1、RAS、NRAS、BRAF等基因突变也有出现，但患者数量较少。因此检测非PTPN11基因突变的Noonan综合征的患者可以尝试检测SOS1基因的突变。SOS1基因定位于人的2号染本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.检测SOS1基因突变的引物，其特征在于，SOS1基因突变选自R552G、Q477R、P894R、I733F突变；所述引物包括至少一对用于扩增SOS1基因的扩增引物和一对测序引物M13F和M13R，所述扩增引物选自SOS1-E1-F/SOS1-E1-R、SOS1-E2-F/SOS1-E2-R、SOS1-E3-F/SOS1-E3-R、SOS1-E4-F/SOS1-E4-R、SOS1-E5-F/SOS1-E5-F、SOS1-E6-F/SOS1-E6-R、SOS1-E7_8-F/SOS1-E7_8-R、、SOS1-E9-F/SOS1-E9-R、SOS1-E10-F/SOS1-E10-R、SOS1-...

【技术特征摘要】
1.检测SOS1基因突变的引物，其特征在于，SOS1基因突变选自R552G、Q477R、P894R、I733F突变；所述引物包括至少一对用于扩增SOS1基因的扩增引物和一对测序引物M13F和M13R，所述扩增引物选自SOS1-E1-F/SOS1-E1-R、SOS1-E2-F/SOS1-E2-R、SOS1-E3-F/SOS1-E3-R、SOS1-E4-F/SOS1-E4-R、SOS1-E5-F/SOS1-E5-F、SOS1-E6-F/SOS1-E6-R、SOS1-E7_8-F/SOS1-E7_8-R、、SOS1-E9-F/SOS1-E9-R、SOS1-E10-F/SOS1-E10-R、SOS1-E11_12-F/SOS1-E11_12-R、SOS1-E13-F/SOS1-E13-R、SOS1-E14-F/SOS1-E14-R、SOS1-E15-F/SOS1-E15-R、SOS1-E16_17-F/SOS1-E16_17-R、SOS1-E18_19-F/SOS1-E18_19-R、SOS1-E20-F/SOS1-E20-R、SOS1-E21-F/SOS1-E21-R、SOS1-E22-F/SOS1-E22-R、SOS1-E23-F/SOS1-E23-R，其碱基序列为：
SOS1-E1-F：TAGTCATCACCCACCCTTGCTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E1-R：ATGTCAACACCGAGAGCCAGAACAGCTATGACCATG
SOS1-E2-F：AGTGCTGGCATTACAGGCATTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E2-R：GTGCTGGGATTACAGGCTTGAACAGCTATGACCATG
SOS1-E3-F：AGGACAAGTGAGTGAGAACTGGATTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E3-R：TCTAACCAACAAGAAAGGAGGAGTAACAGCTATGACCATG
SOS1-E4-F：AAATGTTGTTGGTAAGCACAGGTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E4-R：GCGACAGAGTGAGATTCCGTAACAGCTATGACCATG
SOS1-E5-F：AATAAAGTGATGATGGCAGGGTTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E5-F：GTTGGCATTGATGAAGTGTAGGTAACAGCTATGACCATG
SOS1-E6-F：GGAGTCCTGAGACCAGAAAGTTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E6-R：GTCACACAACTAATAAGCAGCAGAAACAGCTATGACCATG
SOS1-E7_8-F：ATTGTGCTCGCATAGTCGTGTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E7_8-R：TGAGTCCCTGAGTCTGCTGAAACAGCTATGACCATG
SOS1-E9-F：CCCAAGGTCACACAGAAGTAGAGTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E9-R：GACAGAATAACGATGCCAACATAACAGCTATGACCATG
SOS1-E10-F：TTACATGAGCTCTAGGTTTTCTGTCTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E10-R：CAATAAACCCATGCAGGAAAGAACAGCTATGACCATG
SOS1-E11_12-F：TGGCAAAACATTTTGGAACTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E11_12-R：GTCACCCCTCTCCTTGTTTGAACAGCTATGACCATG
SOS1-E13-F：AATTTGGTAAGAGTTACTGCATTTTCTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E13-R：TTACTGAGCCCCAATGACATCAACAGCTATGACCATG
SOS1-E14-F：ACCGGGAAATGGAAAAGGTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E14-R：AGAACAGGAACTGCCTGCCAACAGCTATGACCATG
SOS1-E15-F：AGAGGCTCAGGCAGGAGAATTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E15-R：TGGGAGGTGGAGGTTTCAGTAACAGCTATGACCATG
SOS1-E16_17-F：CTGCCTTCCTTCTATCAGTCACTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E16_17-R：TCTAATGGCTGCCTAAGATGAAACAGCTATGACCATG
SOS1-E18_19-F：TCAAATAACAATGGCTTGGAGGTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E18_19-R：ATCTTGGGAGAGGCTTAGGGTAACAGCTATGACCATG
SOS1-E20-F：ACCAGGGCTTTAGCAAAATAGTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E20-R：GAAATTTCAAGTTGGTGGAGTTTAGAACAGCTATGACCATG
SOS1-E21-F：TTTTGCTTGAATTGGGTTTCTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E21-R：AGGTACCAATGCTGCCAGACAACAGCTATGACCATG
SOS1-E22-F：TGGTTTATTGAACAGCTTTTGGTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E22-R：CTGCATGCTAAATCTATATGTAATCCAACAGCTATGACCATG
SOS1-E23-F：TTTGAAAACCCCAACTTAATTCTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E23-R：ATTGCCAGCAATGGATTTGAACAGCTATGACCATG
M13F：TGTAAAACGACGGCCAGT；
M13R：AACAGCTATGACCATG。


2.一种检测SOS1基因突变的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)提取样品DNA；
(2)利用至少一对扩增引物对步骤(1)中的DNA进行扩增，获得扩增产物，其中，所述扩增引物选自SOS1-E1-F/SOS1-E1-R、SOS1-E2-F/SOS1-E2-R、SOS1-E3-F/SOS1-E3-R、SOS1-E4-F/SOS1-E4-R、SOS1-E5-F/SOS1-E5-F、SOS1-E6-F/SOS1-E6-R、SOS1-E7_8-F/SOS1-E7_8-R、、SOS1-E9-F/SOS1-E9-R、SOS1-E10-F/SOS1-E10-R、SOS1-E11_12-F/SOS1-E11_12-R、SOS1-E13-F/SOS1-E13-R、SOS1-E14-F/SOS1-E14-R、SOS1-E15-F/SOS1-E15-R、SOS1-E16_17-F/SOS1-E16_17-R、SOS1-E18_19-F/SOS1-E18_19-R、SOS1-E20-F/SOS1-E20-R、SOS1-E21-F/SOS1-E21-R、SOS1-E22-F/SOS1-E22-R、SOS1-E23-F/SOS1-E23-R；
(3)利用测序引物M13F与M13R对步骤(2)中的扩增产物分别进行正向和反向测序，获得扩增产物的基因序列；
(4)将步骤(3)中的基因序列与野生型SOS1基因序列进行比较，确定SOS1基因是否发生突变；
所述扩增引物和测序引物的碱基序列为：
SOS1-E1-F：TAGTCATCACCCACCCTTGCTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E1-R：ATGTCAACACCGAGAGCCAGAACAGCTATGACCATG
SOS1-E2-F：AGTGCTGGCATTACAGGCATTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E2-R：GTGCTGGGATTACAGGCTTGAACAGCTATGACCATG
SOS1-E3-F：AGGACAAGTGAGTGAGAACTGGATTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E3-R：TCTAACCAACAAGAAAGGAGGAGTAACAGCTATGACCATG
SOS1-E4-F：AAATGTTGTTGGTAAGCACAGGTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E4-R：GCGACAGAGTGAGATTCCGTAACAGCTATGACCATG
SOS1-E5-F：AATAAAGTGATGATGGCAGGGTTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E5-F：GTTGGCATTGATGAAGTGTAGGTAACAGCTATGACCATG
SOS1-E6-F：GGAGTCCTGAGACCAGAAAGTTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E6-R：GTCACACAACTAATAAGCAGCAGAAACAGCTATGACCATG
SOS1-E7_8-F：ATTGTGCTCGCATAGTCGTGTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E7_8-R：TGAGTCCCTGAGTCTGCTGAAACAGCTATGACCATG
SOS1-E9-F：CCCAAGGTCACACAGAAGTAGAGTGTAAAACGACGGCCAGT；
SOS1-E9-R：GACAGAATAACGATGCCAACATAACAGCTATGACCATG
SOS1-E10-F：TTACATGAGCTCTAGGTTTTCTGTCTGTAAAACGACGG...

【专利技术属性】
技术研发人员：柏忠良，
申请(专利权)人：武汉艾迪康医学检验所有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42