一种复合缓冲体系在制备α-淀粉酶测定试剂盒中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种复合缓冲体系在制备α‑淀粉酶测定试剂盒中的应用，所述复合缓冲体系为含有MES、ACES和PIPES的混合缓冲液。本发明专利技术的α‑淀粉酶测定试剂盒稳定性良好，同时确保了试剂盒检测结果的准确性。含有本发明专利技术方案复合缓冲体系的α‑淀粉酶测定试剂盒在(2‑8)℃可稳定保存21个月以上，该试剂盒成本低廉，配制简单，值得进一步广泛推广。

Application of a compound buffer system in the preparation of a-amylase test kit

【技术实现步骤摘要】
一种复合缓冲体系在制备α-淀粉酶测定试剂盒中的应用
本专利技术涉及体外诊断
，具体涉及一种复合缓冲体系在制备α-淀粉酶测定试剂盒中的应用。
技术介绍
血清淀粉酶即血淀粉酶，是淀粉酶的一种，主要由唾液腺和胰腺分泌，另外近端十二指肠、肺、子宫、泌乳期的乳腺等器官也有少量分泌。其功能主要是能分解多糖，如淀粉和糖原。血清淀粉酶测定是急性胰腺炎最常用的诊断指标，目前国内各临床实验室用于血清淀粉酶测定的方法有200多种，反应原理不一，导致血清淀粉酶测定难以标准化。为了测定结果统一最有效的手段是建立参考系统，国际临床化学和检验医学联合会(Internationalfederationofclinicalchemistryandlaboratorymedicine，IFCC)于2006年发表的一级参考测量程序(37℃)中表明试剂原料对测量结果存在影响。α-淀粉酶(α-Amylase，AMY)是一种常用的血清淀粉酶测定原料，参考方法中规定的α-葡萄糖苷酶和4,6-亚乙基-4-硝基苯-α-D麦芽七糖(Ethylidene-4-nitrophenyl-α-D-maltoheptaoside4,6-ethylidene(G7)-p-nitrophenyl(G1)-α,D-maltoheptaoside，pNP-G7或EPS)作为关键底物。目前，市场上使用较多的AMY试剂盒均是基于pNP-G7检测的试剂盒，然而该类试剂盒稳定性欠佳，且受样本中蛋白浓度、离子强度及激活剂等影响。因此，研究一种性能稳定的α-淀粉酶测定试剂盒，将具有良好的市场价值。缓冲溶液通常是由弱酸及其弱酸盐或弱碱及其弱碱盐组成的一对共轭体，在生化研究工作中主要用于维持体系的酸碱度和离子强度，以保证反应体系处于动态平衡。不同的反应体系需要选择不同的缓冲体系，普通的缓冲溶液都是利用单一的弱酸-共轭碱或弱碱-共轭酸之间的酸碱平衡来达到缓冲作用。然而，对于某些反应体系，单一酸和碱组成的缓冲体系难以满足其要求。Pridraux于1916年提出了广泛缓冲体系，该体系的共存离子基本不变，但使用pH范围扩宽(2-12之间)，这类缓冲液改进后被命名为Britton-Robinson广泛缓冲液。除维持体系的酸碱度以外，缓冲溶液离子强度对生化反应试剂的稳定性也有很大的作用，因此，控制酸碱度和离子强度对于维持生化反应试剂的稳定性具有重要意义。基于此，开发一种复合缓冲体系有望解决现有技术中存在的α-淀粉酶测定试剂盒稳定性不佳缺陷。
技术实现思路
本专利技术旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本专利技术提出一种复合缓冲体系在制备α-淀粉酶测定试剂盒中的应用，该复合缓冲体系能够提升α-淀粉酶测定试剂盒的稳定性。本专利技术还提出一种含有上述复合缓冲体系的α-淀粉酶测定试剂盒。本专利技术还提出利用上述试剂盒进行α-淀粉酶检测的方法。根据本专利技术的第一方面实施例的复合缓冲体系在制备α-淀粉酶测定试剂盒中的应用，所述复合缓冲体系为含有2-(N-吗啡啉)乙磺酸(2-MorpholinoethanesulfonicAcidmonohydrate，MES)、N-(乙酰氨基)-2-氨基乙烷磺酸(N-(2-Acetamido)-2-Aminoethanesulfonicacid，ACES)和哌嗪-1,4-二乙磺酸(Piperazine-1,4-bisethanesulfonicacid，PIPES)的混合缓冲液。根据本专利技术的一些实施例，所述复合缓冲体系中，MES的质量百分含量为(1～2)％，ACES的质量百分含量为(0.5～1)％，PIPES的质量百分含量为(0.5～1)％。根据本专利技术的一些实施例，所述复合缓冲体系中，MES的质量百分含量为1％，ACES的质量百分含量为0.8％，PIPES的质量百分含量为0.5％。根据本专利技术的一些实施例，所述α-淀粉酶测定试剂盒的制备原料中还包括第一试剂和第二试剂，所述第一试剂为溶解有α-Glucosidase、氯化钠、吐温-20和叠氮化钠的复合缓冲体系；所述第二试剂为溶解有pNP-G7和叠氮化钠的复合缓冲体系。根据本专利技术的一些实施例，所述第一试剂中含有α-Glucosidase5KU/L、氯化钠0.1g/L、吐温-200.1g/L和叠氮化钠0.1g/L；所述第二试剂中含有pNP-G710g/L和叠氮化钠0.1g/L。根据本专利技术的一些实施例，所述第一试剂和第一试剂的体积比为3:1。根据本专利技术的一些实施例，所述应用包括以下步骤：第一试剂的制备：称取MES、ACES和PIPES，加水溶解后，加入吐温-20作为乳化剂，乳化后加入生物防腐剂叠氮化钠、离子稳定剂氯化钠、α-Glucosidase和水，搅拌后，过滤即得；第二试剂的制备：称取MES、ACES和PIPES，加水溶解后，加入生物防腐剂叠氮化钠、pNP-G7和水，搅拌后，过滤即得。根据本专利技术的一些实施例，所述试剂盒的制备原料中还包括校准品。根据本专利技术实施例的应用，至少具有如下有益效果：本专利技术方案中的淀粉酶测定试剂盒的反应体系中选用了多种缓冲溶液来控制酸碱度和离子强度，从而保证试剂的反应强度以及稳定性。由于α-淀粉酶测定试剂盒的原理是淀粉酶裂解底物4,6-亚乙基-对硝基苯-α-D-麦芽七糖苷(Ethylidene-4-nitrophenyl-a-D-maltoheptaoside，EPS-pNP-G7)，其产物G2pNP，G3pNP和G4pNP可被葡糖苷酶水解为对硝基苯酚和葡萄糖。对硝基苯酚的生成量在一定范围内与AMY活性成正比，在405nm/700nm处连续监测即可测出AMY的活性。由于试剂R1中葡糖苷酶保存时间短会直接影响到临床使用，因此，本专利技术方案采用混合缓冲液为葡糖苷酶建立了一个稳定的体系环境；氯化钠也可作为葡糖苷酶的金属离子稳定剂；吐温-20可以形成激活剂，促进反应；此外，由于保存时间的延长，空气、水中微生物会对试剂产生污染，因此还可加入一定量的防腐剂。试剂R2中PNP-G7的吸光系数容易受pH、温度、样本中蛋白浓度、离子强度及激活剂等影响，添加本专利技术方案的混合缓冲体系可为PNP-G7隔绝了该一系列的干扰，保证了PNP-G7的稳定性，进而提升整个试剂盒的稳定性。根据本专利技术第二方面实施例的试剂盒，所述试剂盒中含有复合缓冲体系，所述复合缓冲体系为含有MES、ACES和PIPES的缓冲液。根据本专利技术实施例的试剂盒，至少具有如下有益效果：含有本专利技术方案复合缓冲体系的α-淀粉酶测定试剂盒在(2-8)℃可稳定保存21个月以上，该试剂盒成本低廉，配制简单，值得进一步广泛推广。根据本专利技术第三方面实施例的检测方法，包括以下步骤：将上述试剂盒中的检测试剂加入到待测样本中进行催化反应，反应完成后，利用检测仪对反应产物进行检测，记录检测结果，根据检测结果计算α-淀粉酶的浓度。根据本专利技术第三方面实施例的检测方法，至少具有如下有益效果：本专利技术的α-淀粉酶测定试剂盒稳定性良好，同时确保了试剂盒检测结果的准确性。本专利技术的附加方本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种复合缓冲体系在制备α-淀粉酶测定试剂盒中的应用，其特征在于：所述复合缓冲体系为含有MES、ACES和PIPES的混合缓冲液。/n

【技术特征摘要】
1.一种复合缓冲体系在制备α-淀粉酶测定试剂盒中的应用，其特征在于：所述复合缓冲体系为含有MES、ACES和PIPES的混合缓冲液。


2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述复合缓冲体系中，MES的质量百分含量为(1～2)％，ACES的质量百分含量为(0.5～1)％，PIPES的质量百分含量为(0.5～1)％。


3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述复合缓冲体系中，MES的质量百分含量为1％，ACES的质量百分含量为0.8％，PIPES的质量百分含量为0.5％。


4.根据权利要求1至3任一项所述的应用，其特征在于：所述α-淀粉酶测定试剂盒的制备原料中还包括第一试剂和第二试剂，所述第一试剂为溶解有α-Glucosidase、氯化钠、吐温-20和叠氮化钠的复合缓冲体系；所述第二试剂为溶解有pNP-G7和叠氮化钠的复合缓冲体系。


5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述第一试剂中含有α-Glucosidase5KU/L、氯化钠0.1g/L、吐温-200.1g/L和叠氮化钠0.1g/L；所述第二试剂中含有pNP-G710g/L和叠...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄清媚，崔海林，曾晓君，于云飞，
申请(专利权)人：中山市创艺生化工程有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44