microRNA-29a-3p作为胶质瘤血管拟态防治靶点的应用制造技术

本发明专利技术具体涉及microRNA‑29a‑3p作为胶质瘤血管拟态防治靶点的应用。本发明专利技术研究表明miR‑29a‑3p显著抑制胶质瘤细胞的侵袭迁移能力及血管拟态形成能力，同时降低血管拟态相关分子标志的表达。进一步的，ROBO1是miR‑29a‑3p的直接作用靶点，介导了miR‑29a‑3p对胶质瘤细胞血管拟态形成的调控作用。对过表达miR‑29a‑3p的外泌体的研究也证实，其可以通过上调胶质瘤细胞内的miR‑29a‑3p含量，从而抑制胶质瘤的侵袭迁移及血管拟态的形成。过表达miR‑29a‑3p的人间充质干细胞外泌体可以用以对抗胶质瘤血管拟态的形成，并有望作为抗血管治疗的补充，改善胶质瘤患者的预后。

Application of microrna-29a-3p as a target for the prevention and treatment of glioma angiomimetic

【技术实现步骤摘要】
microRNA-29a-3p作为胶质瘤血管拟态防治靶点的应用
本专利技术属于脑胶质瘤防治靶点
，具体涉及microRNA-29a-3p作为胶质瘤血管拟态防治靶点的应用。
技术介绍
公开该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。胶质瘤占所有原发性脑肿瘤的80％，是成年人中最普遍和致命的中枢神经系统原发性肿瘤。血管生成是胶质瘤的突出特征之一，其造成胶质瘤患者的不良预后。抗血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)药物Avastin，被认为是抗胶质瘤的重要药物。在胶质母细胞瘤(glioblastoma,GBM)中，尽管Avastin可抑制血管内皮细胞介导的血管生成，但该治疗方案的益处有限，GBM患者的预后仍然很差。因此可以推断，在胶质瘤当中必然存在某种不依赖于VEGF及血管内皮细胞的类血管结构，可以作为胶质瘤血管的替代而不受Avastin抑制。最近有报道显示，血管拟态(vasculogenicmimicry,VM)是由肿瘤细胞直接形成，且不依赖于经典的血管生成的途径的另一种血管系统，在维持GBM恶性行为中起着重要作用。多篇研究已证明VM存在于多种恶性肿瘤中，其中包括GBM。它的形成与低氧诱导的胶质瘤上皮-间质转化(epithelial-mesenchymaltransition,EMT)密切相关。研究表明，VM能够增加血液中的营养和氧气供应，从而促进GBM的发展。因此，深入研究VM的形成机制，并依据其机制发现新的抑制VM的方法，对于延长胶质瘤患者，尤其是表现出Avastin耐药的胶质瘤患者的生存期至关重要。微小RNA(microRNA,miR)在恶性肿瘤发生发展中起着至关重要的作用。在专利技术人在先研究发现，几种miR能够抑制胶质瘤的迁移和VM形成。然而，由于缺乏理想的递送系统，令miR在肿瘤治疗过程中难以利用，因此这些胶质瘤抑制性miR的临床应用受到严重限制。外泌体是直径为30-100nm的纳米颗粒，包含许多生物分子，例如非编码RNA(包括各种miR)。外泌体被细胞选择性包装并分泌到细胞外微环境或循环中，并被靶细胞获取继而改变靶细胞中miR的表达谱并诱导生物学行为的变化。最近的研究表明，在外泌体中未发现与miR合成及降解相关的蛋白，这提示外泌体可以作为胶质瘤抑制性miR的稳定转运载体。间充质干细胞(mesenchymalstemcell,MSC)是能分化为多种细胞类型的多能基质细胞，其可分化为成骨细胞，软骨细胞，肌细胞和脂肪细胞等。数项研究已利用MSC衍生的外泌体将抑癌miR传递给包括肝细胞癌、肺癌和乳腺癌在内的癌症。此外，已有研究证明，过表达miR-124a，miR-146b和miR-584的MSC可分泌抑制胶质瘤的外泌体，表明使用MSC衍生的外泌体在胶质瘤治疗中的巨大潜力。然而，这些研究中只有一项进行了胶质瘤细胞的原位植入，从而部分模拟了人脑胶质瘤的实际发展情况。此外，尽管血管生成在胶质瘤的进展中起着至关重要的作用，但以上研究均未对该过程有所涉及。
技术实现思路
针对上述研究背景，专利技术人认为进一步发掘血管拟态形成机制，对于抑制胶质瘤发展、提供新型脑胶质瘤防治药物具有重要的意义。本专利技术通过TCGA数据库筛选得到microRNA-29a-3p在脑胶质瘤细胞中表达含量低于正常脑细胞，并且microRNA-29a-3p的含量与胶质瘤中血管拟态的形成相关。通过荧光素酶报告基因方法，本专利技术进一步确定了miR-29a-3p通过调控下游靶点ROBO1实现对血管拟态相关靶点的调控作用。最后，本专利技术通过间充质干细胞外泌体研究结果证明了过表达miR-29a-3p的人间充质干细胞外泌体可以用以对抗胶质瘤血管拟态的形成，并有望作为抗血管治疗的补充，作为一种新型抗血管拟态生物药物。基于上述研究成果，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术第一方面，提供miR-29a-3p作为脑胶质瘤抑制剂的应用。优选的，所述脑胶质瘤抑制剂为用于预防/治疗血管拟态的抑制剂。优选的，所述脑胶质瘤抑制剂为用于预防/治疗脑胶质瘤迁移和/或侵袭的抑制剂。本专利技术第二方面，提供miR-29a-3p作为ROBO1抑制剂的应用，或miR-29a-3p抑制剂作为ROBO1激动剂的应用。本专利技术第三方面，提供miR-29a-3p作为MMP2/LAMB2/N-cad抑制剂的应用。本专利技术第四方面，提供ROBO1作为血管拟态和/或胶质瘤侵袭、迁移治疗靶点的应用。优选的，所述ROBO1抑制剂作为血管拟态和/或胶质瘤侵袭、迁移治疗药物的应用。优选的，所述ROBO1作为MMP2/LAMB2/N-cad的激动剂。本专利技术第四方面，提供一种血管拟态治疗药物，所述治疗药物以miR-29a-3p作为活性成分。优选的，所述治疗药物包括采用基因工程手段改造后能够分泌miR-29a-3p的生物载体。进一步优选的，所述治疗药物包括过表达miR-29a-3p的人间充质干细胞。本专利技术第五方面，提供一种血管拟态治疗方法，所述治疗方法包括血管拟态结构中miR-29a-3p的表达含量。优选的，所述治疗方法包括采用导入外源性的miR-29a-3p、或通过基因工程手段提高血管拟态组织中miR-29a-3p的分泌量。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：现有研究结果提供了外泌体miR-29a-3p与脑胶质瘤存在一定的相关性，本专利技术相比现有技术从血管拟态的形成机制出发，证实了miR-29a-3p与胶质瘤中血管拟态的结构形成机制相关。并且证实了miR-29a-3p通过直接调节ROBO1靶点对血管拟态及侵袭、迁移相关靶点进行调节，提供了完整的通路研究。最后，本专利技术通过过表达间充质细胞分泌外泌体证实了miR-29a-3p切实具有治疗效果，有望开发为新型的血管拟态治疗药用，弥补目前Avastin等药物的不足。附图说明构成本专利技术的一部分的说明书附图用来提供对本专利技术的进一步理解，本专利技术的示意性实施例及其说明用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的不当限定。图1为实施例1中胶质瘤VM结构与miR-29a-3p表达关系图；其中，图1A为TCGA数据库不同亚型的胶质瘤中miR-29a-3p的表达水平；图1B为NHA、U87和A172细胞中miR-29a-3p的表达量；图1C为正常脑组织标本和不同级别的神经胶质瘤中的VM结构(箭头指示)。(*P<0.05；**P<0.01；***P<0.001；****P<0.0001。ns：无统计学意义)图2为实施例1中miR-29a-3p抑制胶质瘤细胞的迁移和VM形成结果图。其中，图2A为transwell评估miR-29a-3p对细胞迁移的影响；图2B为miR-29a-3p对VM形成能力的影响结果图；图2C为蛋白质本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.miR-29a-3p作为脑胶质瘤抑制剂的应用。/n

【技术特征摘要】
1.miR-29a-3p作为脑胶质瘤抑制剂的应用。


2.如权利要求1所述miR-29a-3p作为脑胶质瘤抑制剂的应用，其特征在于，所述脑胶质瘤抑制剂为用于预防/治疗血管拟态的抑制剂。


3.如权利要求1所述miR-29a-3p作为脑胶质瘤抑制剂的应用，其特征在于，所述脑胶质瘤抑制剂为用于预防/治疗脑胶质瘤迁移和/或侵袭的抑制剂。


4.miR-29a-3p作为ROBO1抑制剂的应用，或miR-29a-3p抑制剂作为ROBO1激动剂的应用。


5.miR-29a-3p作为MMP2/LAMB2/N-cad抑制剂的应用。


6.ROBO1作为血管拟态和/或胶质瘤侵袭、迁移治疗靶点的应用。


7.如权利要求6所述ROBO1作为血管拟态和/...

【专利技术属性】
技术研发人员：李刚，薛皓，郭兴，张宗谱，徐建业，赵荣荣，薛付忠，刘宏，
申请(专利权)人：山东大学齐鲁医院，
类型：发明
国别省市：山东;37