miR-140在制备抑制乳腺癌增殖和迁移药物中的用途制造技术

本发明专利技术公开了miR‑140在制备抑制乳腺癌增殖和迁移药物中的用途。miR‑140可以通过直接结合到FEN1的3′UTR来抑制FEN1的蛋白表达，从而导致DNA修复受损，并使肿瘤细胞的增殖和迁移受到抑制。在裸鼠移植瘤模型中进一步发现过表达miR‑140可以增加乳腺癌细胞对化疗药物的敏感性，其中，与阿霉素的联合作用效果最佳。该发明专利技术为在临床上利用miR‑140来诊断和治疗乳腺癌，以及提供药物靶点方面提供了应用价值。

The use of mir-140 in the preparation of drugs for inhibiting the proliferation and migration of breast cancer

【技术实现步骤摘要】
miR-140在制备抑制乳腺癌增殖和迁移药物中的用途
本专利技术涉及生物
，特别涉及miR-140在制备抑制乳腺癌增殖和迁移药物中的用途。
技术介绍
乳腺癌的种类很多，其类型性质各异，不同的现代药物被用来治疗乳腺癌，可以使用抗雌激素如雷洛昔芬或他莫昔芬对乳腺癌进行药物治疗，也可根据病人的情况使用化疗药物治疗，化疗药物包括5-氟尿嘧啶、紫杉醇、铂类药物(顺铂、卡铂)、阿霉素、环磷酰胺等。化学治疗的作用原理通常是借由干扰细胞分裂的机制来抑制癌细胞的生长或积累肿瘤细胞的DNA损伤诱导肿瘤细胞凋亡，多数的化疗药物都没有专一性，所以会同时杀死进行细胞分裂的正常组织细胞。化学疗法通常两种或以上的药物联合使用，称做“综合化学疗法”，大多数癌症患者的化疗都是使用这样的方式进行治疗。肿瘤产生耐药性是化疗过程中导致肿瘤治疗失败的一个重要因素。逆转肿瘤细胞的耐药性，提高肿瘤细胞对药物的敏感性，是肿瘤治疗研究领域的一大热门。化疗药物能够通过加剧肿瘤细胞的DNA损伤，从而起到杀死肿瘤细胞的作用。而DNA损伤修复能力的提高与肿瘤化疗过程中耐药性的产生有关。靶向治疗是从90年代后期开始在治疗某些类型癌症上取得了明显的效果，与化学治疗一样可以有效治疗癌症，但是副作用与化疗相较之下减少许多。乳腺癌最常见的靶向治疗药物是赫赛汀，适用于HER2过度表达的转移性乳腺癌。靶向治疗比传统的治疗手段具有靶向性的优点，可以分析特定的癌细胞与正常细胞中的某些基因的表达差异来设计特定的治疗药物，由于靶向治疗具有更高的精准性并对正常细胞的副作用较小，因此目前很多科研工作者和医疗人员都比较重视此治疗方法。但目前用于靶向治疗的特效药很少。MicroRNA(miRNA)是一组长度为18-25nt左右的小分子非编码RNA，可以通过调节下游靶基因来调控相关生物学过程。基于一种miRNA可以调控多种下游靶基因这一特性，赋予了miRNA功能的多样性。miRNA主要通过切割而降解靶基因的mRNA或者抑制靶基因的翻译来参与细胞内的调控。大量研究表明miRNA能够作为癌基因或抑癌基因参与肿瘤的发生发展。FEN1作为一种结构特异性的金属多功能核酸内切酶，参与了DNA复制和DNA损伤修复两种途径。在DNA复制中，FEN1参与了冈崎片段的成熟；而在碱基切除修复(BER)过程中，FEN1则参与长片段碱基切除修复的过程。此外，FEN1还具有维持基因组稳定性和端粒稳定性的功能。
技术实现思路
专利技术目的：本专利技术目的是提供一种miR-140或含有miR-140的表达载体在制备抑制乳腺癌药物中的用途，用于解决现有技术中乳腺癌增殖和迁移的难题。技术方案：本专利技术提供一种miR-140或含有miR-140的表达载体在制备抑制乳腺癌药物中的用途。进一步地，所述药物为抑制乳腺癌增殖和迁移的药物。进一步地，所述miR-140序列如SEQIDNO：1所示。SEQIDNO：1：5’-cagugguuuuacccuaugguag-3’进一步地，所述药物的制剂形式为液体制剂、颗粒制剂、片剂或胶丸。进一步地，所述药物还包括药学上可接受的载体。进一步地，所述miR-140的启动子与转录因子或抑制因子YingYang1结合，所述YingYang1序列如SEQIDNO：2所示。进一步地，所述结合的位点为site4，site4序列如SEQIDNO：3所示。SEQIDNO：3：全部序列为site4chip实验Qpcr的引物识别的序列，其中，大写部分为-(235-225)序列)。进一步地，所述miR-140过表达。FEN1在多种不同的肿瘤中都是高表达的，而在正常细胞中低表达。通过抑制FEN1表达能够降低肿瘤细胞的增殖能力，同时增强肿瘤细胞对化疗药的敏感性，因此FEN1能够作为肿瘤治疗的一个潜在的靶点。所述FEN1用于PCR扩增的引物为：FEN1-F：5’-cggggtaccaatgggaattcaaggcctggc-3’-F(SEQIDNO：4)FEN1-R：5’-tgctctagattattttccccttttaaacttcc-3’-R(SEQIDNO：5)miR-140可以通过直接结合到FEN1的3′UTR来抑制FEN1的蛋白表达，从而导致DNA修复受损，并使肿瘤细胞的增殖和迁移受到抑制。在裸鼠移植瘤模型中进一步发现过表达miR-140可以增加乳腺癌细胞对化疗药物的敏感性，其中，与阿霉素的联合作用效果最佳。利用乳腺癌阿霉素耐药细胞株，发现过表达miR-140可以逆转乳腺癌的耐药性，使乳腺癌耐药细胞重新对阿霉素敏感。此外，过表达FEN1可以减轻miR-140导致的乳腺癌细胞DNA损伤的积累和降低乳腺癌细胞对化疗药物阿霉素的敏感性，从而证明miR-140对乳腺癌细胞的损伤的积累，以及对化疗药物的影响是通过下调FEN1发挥作用的。另外，通过生物信息学分析和实验的验证，证明了转录因子/抑制因子YingYangl(YY1)直接与miR-140启动子结合，激活miR-140表达，并找到了最优的结合位点site4。YY1可以直接与FEN1的启动子结合抑制FEN1的表达，而本专利技术证明YY1还可以通过激活表达miR-140来间接抑制FEN1的表达，在乳腺癌耐阿霉素细胞中，miR-140低表达，而YY1高表达。在阿霉素耐药条件下，YY1结合miR-140启动子的能力显著下降。有益效果：本专利技术研究结果表明，miR-140通过抑制FEN1来抑制DNA损伤修复，进而抑制乳腺癌细胞的增殖和迁移，增强乳腺癌细胞对化疗药物敏感性和降低其耐药性。miR-140能够作为一种新的乳腺癌辅助治疗的抗肿瘤因子，为制备治疗乳腺癌的药物设计和筛选提供新的靶点和思路。附图说明图1为miR-140直接影响FEN1的表达，(A)qPCR检测四种乳腺癌细胞中过表达miR-140对FEN1mRNA水平的影响，(B)WestonBlotting检测四种乳腺癌细胞中过表达miR-140对FEN1蛋白水平的影响，(C)miR-140与FEN1的3′UTR的结合序列，矩形框区域内是FEN13′UTR与miR-140结合位点的突变碱基(D)HEK-293中过表达野生型(WT)或突变型(MT)FEN1的3′UTR荧光素酶报告质粒及miR-140或阴性参照核进行荧光素酶活性分析；图2为FEN1与miR-140在肿瘤的表达检测与预后关系，(A)和(B)分别是TCGA数据库中FEN1和miR-140在乳腺癌与癌旁组织中的相对表达差异，(C)和(D)分别是FEN1和miR-140的表达与患者预后的关系，(ns，无显著性差异，**，P＜0.01；***，P＜0.001)；图3为miR-140对细胞增殖的影响，(A)qPCR检测稳转细胞系中的miR-140的表达量，(B)连续细胞计数，测量细胞的增殖速率，(C)结晶紫染色后，比较克隆形成的数量，(D)是(C)克隆数量的统计分析(ns，无显著性差异，**，P＜0.0本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.miR-140或含有miR-140的表达载体在制备抑制乳腺癌药物中的用途。/n

【技术特征摘要】
1.miR-140或含有miR-140的表达载体在制备抑制乳腺癌药物中的用途。


2.如权利要求1所述的用途，其特征在于：所述药物为抑制乳腺癌增殖和迁移的药物。


3.如权利要求1所述的用途，其特征在于：所述miR-140序列如SEQIDNO：1所示。


4.如权利要求1所述的用途，其特征在于：所述药物的制剂形式为液体制剂、颗粒制剂、片剂或胶丸。


5.如权利要求1所述的用...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭志刚，胡志刚，鲁潇，
申请(专利权)人：南京师范大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32