【技术实现步骤摘要】
上皮细胞活性肽复合物纳米微脂囊的应用及其备制
本专利技术涉及上皮细胞活性肽复合物纳米微脂囊的应用及其制备方法。通过对上皮细胞的培养、鉴定,上皮细胞活性肽的获取,与番茄红素树脂、薰衣草精油、牛至油精油合成复合物,利用纳米脂质载体技术(NLC)逆相蒸发-冷冻干燥法制备上皮细胞活性肽复合物柔性纳米微脂囊,达到与相关受体结合,诱导细胞间连接通讯,将内信号传到通路开放,显著激活表型相关细胞活性,淬灭单线态氧和清出过氧化自由基,有效抑制淀粉样蛋白(Aβ)介导的氧化应激和细胞凋亡。促进表皮细胞修复、再生;利用其无毒安全、天然防腐、容易实现工业化生产等优点,提供一种因多种原因引起的皮肤、组织损害修复、再生的化妆品和组织修复剂。
技术介绍
作为人体与外环境间第一道屏障的皮肤,是人体最大的器官,有助阻断外来物质入侵、防止理化损伤、阻止体液流失、感受外界刺激的器官;还具有调节体温、分泌多种活性物质等重要功能。同时皮肤也时刻与各种化学、物理和生物危害因素相接触,极易受到伤害、患病。一旦受到伤害而未得到修复将会使机体产生很大的影响甚至患病。表皮组织在受到伤害后一般都能自行修复。但受到某些疾病、因素、自身基因的影响,阻碍了表皮细胞的分化、增殖,导致细胞组织长久不能修复、异常增殖或老化、变性(老年斑、淀粉样蛋白(Aβ)介导)。基于人表皮活性因子的这些生物特性,hEGF已广泛应用于医学临床领域,除了烧伤、烫伤、胃肠道的修复以外,还主要用于促进表皮的修复和再生,用于术后皮肤伤口的愈合、激光的伤口愈合、皮肤溃疡的愈合;上皮细胞活性肽复合物纳米微 ...
【技术保护点】
1.本专利技术公开了一种上皮细胞活性肽复合物纳米微脂囊的应用及其备制,其特征在于,利用逆相蒸发-冷冻干燥法制备上皮细胞活性肽,与番茄红素树脂、薰衣草精油、牛至精油复合形成微脂囊至少一种形成复合物柔性纳米微脂囊,考察其包封率或载药量、变形性及稳定性;上皮细胞活性肽复合物纳米微脂囊为多室脂质体。所述的微脂囊其平均粒径为(78.86±4.32)nm,Zeta电位为(61.22±7.62)mV,包覆率可以为80.2~90.0%,载药量可以为22.0~26.0%。上皮细胞活性肽复合物纳米微脂囊柔性纳米脂质体具有较高的稳定性。含量测定方法简单、可靠,稳定性和变形性高,可能成为透过皮肤屏障转运的有效载体。番茄红素通过清道夫受体B类1型蛋白(SR-B1)的转运被人体吸收,到达各种靶器官,抑制氧化应激、维持线粒体功能、抗细胞凋亡。所述的上皮细胞活性肽复合物由上皮细胞活性肽、番茄红素树脂、薰衣草精油、牛至精油复合而成:/n上皮细胞活性肽10μg/L 20~30份、亚麻籽油番茄红素570mg/L 10~15份、薰衣草精油3~10份、牛至精油3~10份。/n
【技术特征摘要】
1.本发明公开了一种上皮细胞活性肽复合物纳米微脂囊的应用及其备制,其特征在于,利用逆相蒸发-冷冻干燥法制备上皮细胞活性肽,与番茄红素树脂、薰衣草精油、牛至精油复合形成微脂囊至少一种形成复合物柔性纳米微脂囊,考察其包封率或载药量、变形性及稳定性;上皮细胞活性肽复合物纳米微脂囊为多室脂质体。所述的微脂囊其平均粒径为(78.86±4.32)nm,Zeta电位为(61.22±7.62)mV,包覆率可以为80.2~90.0%,载药量可以为22.0~26.0%。上皮细胞活性肽复合物纳米微脂囊柔性纳米脂质体具有较高的稳定性。含量测定方法简单、可靠,稳定性和变形性高,可能成为透过皮肤屏障转运的有效载体。番茄红素通过清道夫受体B类1型蛋白(SR-B1)的转运被人体吸收,到达各种靶器官,抑制氧化应激、维持线粒体功能、抗细胞凋亡。所述的上皮细胞活性肽复合物由上皮细胞活性肽、番茄红素树脂、薰衣草精油、牛至精油复合而成:
上皮细胞活性肽10μg/L20~30份、亚麻籽油番茄红素570mg/L10~15份、薰衣草精油3~10份、牛至精油3~10份。
2.根据权利要求1所述的上皮细胞活性肽复合物纳米微脂囊,其特征在于,上皮细胞活性肽复合物由以下质量份的物质复合而成:
上皮细胞活性肽30份、番茄红素树脂15份、薰衣草精油6、牛至精油6份。
3.根据权利要求1~2中任一项所述的上皮细胞活性肽复合物纳米微脂囊,其特征在于,所述的微脂囊的包覆率为80.2~90.0%,载药量为22.0~26.0%。
4.权利要求3所述的上皮细胞活性肽复合物纳米微脂囊的制备方法,其特征包括以下步骤:
(1)用公开的方法获取上皮细胞活性肽:小分子细胞活性物质成为细胞活性转移因子。大分子细胞活性物质为大分子细胞活性因子。分离培养上皮细胞;收获上皮细胞培养液:用相应的培养基和因子培养细胞生长到一定阶段,取上清液;可多次传代收获。上皮细胞活性肽获取后:
①透析提取小分子上皮细胞活性肽,将上皮细胞裂解物适当处理后,装入透析袋或玻璃透析装置内,在一定温度下透析,12-30h收取透析液。
②中空纤维柱分离提取上皮细胞活性肽将上皮细胞裂解物经处理后,用分子截留孔径(如0.2KD、5KD、10KD、15KD等)的中空纤维柱分离截取上皮细胞活性肽,按分子量不同区分转移因子和活性因子。
③离子交换器和层析提取上皮细胞活性肽。
(2)鉴定①蛋白质浓度鉴定;②核糖和多核苷酸的浓度鉴定;③蛋白质和核酸类物质鉴定;④上皮细胞活性肽鉴定。
(3)上皮细胞活性肽含量检测[酶联免疫吸附法(ELISA)]:分别配制质量浓度为15,30,50,100,200,300,400,500ng/mL的上皮细胞活性肽系列溶液,以0.2%聚乙二醇辛基苯基醚(TritonX-100)破坏脂质膜的空白柔性纳米微脂囊做空白对照,按照EGF-ELISA检测试剂盒说明书的方法和步骤检测样品,以样品中上皮细胞活性肽的质量浓度(X)为横坐标、检测的OD值(Y)为纵坐标,采用四参数回归方法进行运算,得回归方程Y=(A-D)/[1+(X/C)^B]+D,以检测样品中神经干细胞活性因子的含量。
(4)亚麻籽油提取番茄红素树脂:22%番茄固体物:亚麻籽油按1:1用微波萃取法制成570mg/L番茄红素的亚麻籽番茄油;
(5)蒸馏方法提取薰衣草精油;
(6)蒸馏方法提取牛至精油;
(7)上皮细胞活性肽复合物纳米微脂囊(逆相蒸发-冷冻干燥法)制备:精密称取大豆磷脂、胆固醇和维生素E,置瓶中,加入适量氯仿(含1%无水乙醇),于4℃水浴中溶解脂质。取甘露醇、胆酸钠和上皮细胞活性肽溶解于4℃磷酸盐缓冲液(PBS)(pH=7.4)溶液中。脂质溶解后,将PBS溶液倒入脂质溶液中,在水浴式超声仪中(低于10℃)超声10min(超10s,停5s),形成均匀乳液。室温下放置30min。将溶液于旋转蒸发仪上减压蒸发(负压0.07MPa,转速500r/min),形成水相脂质体混悬液后,继续蒸发15min,以彻底去除有机溶剂。再在水浴式超声仪中(低于10℃)超声10min(超声10s,停5s)。将脂质体混悬液转移高压均质挤出机中,高压均质3次,再通过0.1μm微孔滤膜挤出10次后,-40℃预冻24h后,于冷冻干燥机中制备成冻干粉末。
(8)上皮细胞活性肽复合物纳米微脂囊分离采用由Fry等提出的交联葡聚糖-50(SephadexG-50)微柱离心法分离柔性纳米微脂囊和游离神经干细胞活性因子。将交联葡聚糖-50用适量PBS溶液浸泡24h后装柱,以3000r/min离心3min以去除其中多余的PBS,先用不含上皮细胞活性肽复合物的空白柔性纳米微脂囊0.25mL过柱,然后向柱中加入0.25mL上皮细胞活性肽复合物柔性纳米微脂囊混悬液,离心,收集离心液,微脂囊就和仍然滞留于柱中的游离药物分离。
(9)观察形态;柔性纳米微脂囊径1.0%磷钨酸负染,将柔性纳米微脂囊用PBS缓冲液稀释10倍,在室温下用粒径和电位分析仪测定其粒径和电位;包封率(EE)采用以下公式计算:EE(%)=柔性纳米脂质体EGF含量/柔性纳米脂质体混悬液中EGF总含量×100%;载药量:取上皮细胞活性肽复合物冻干微脂囊1mg置5mL容量瓶中,加入0.2mL10%TritonX-100,加PBS至刻度,测定总上皮细胞活性肽复合物量;冻干微脂囊载药量=上皮细胞活性肽复合物的量/1mg×100%。本方法所制备的上皮细胞活性肽复合物柔性纳米微脂囊应为多室脂质体。其平均粒径为(78.86±4.32)nm,Zeta电位为(61.22±7.62)mV,包覆率可以为80.2~90....
【专利技术属性】
技术研发人员:周文亚,李占和,谢党恩,
申请(专利权)人:上海瑞思德生物科技有限公司,
类型:发明
国别省市:上海;31
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