【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】工程化糖基转移酶和甜菊醇糖苷葡糖基化方法本申请要求2017年2月3日提交的美国临时专利申请序号62/454,417和2017年3月30日提交的美国临时专利申请序号62/479,262的优先权，出于所有目的，这两个专利特此通过引用以其整体并入。专利
本专利技术提供了工程化糖基转移酶(GT)酶、具有GT活性的多肽和编码这些酶的多核苷酸、以及包含这些多核苷酸和多肽的载体和宿主细胞。本专利技术提供了工程化蔗糖合酶(SuS)酶、具有SuS活性的多肽和编码这些酶的多核苷酸、以及包含这些多核苷酸和多肽的载体和宿主细胞。本专利技术还提供了包含GT酶的组合物和使用工程化GT酶来制备具有β-葡萄糖键(linkage)的产物的方法。本专利技术还提供了用于产生莱鲍迪苷(rebaudioside)(例如莱鲍迪苷M、莱鲍迪苷A、莱鲍迪苷I和莱鲍迪苷D)的组合物和方法。本专利技术还提供了包含SuS酶的组合物及使用其的方法。还提供了用于产生GT和SuS酶的方法。对序列表、表格或计算机程序的引用序列表的正式副本作为ASCII格式的文本文件经由EFS-We...
【技术保护点】
1.一种工程化糖基转移酶，所述工程化糖基转移酶包含与SEQ ID NO:2具有至少60％、65％、70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多序列同一性的多肽序列。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170203 US 62/454,417;20170330 US 62/479,2621.一种工程化糖基转移酶，所述工程化糖基转移酶包含与SEQIDNO:2具有至少60％、65％、70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多序列同一性的多肽序列。
2.如权利要求1所述的工程化糖基转移酶，其中所述工程化糖基转移酶包含与SEQIDNO:4、8、32、232、348、548、562、696、758、696、770、792、954、696、1002、1054、2600、2718、2814、2884、3016、3082、3244、3502、3346、3502、3696、4256、4684、4838、4876、5066、5290、5372、5562、5708、5976、6138、6288、6468、684、7388和/或8088具有至少60％、65％、70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多序列同一性的多肽。
3.如权利要求2所述的工程化糖基转移酶，其中所述工程化糖基转移酶优先地使用除尿苷二磷酸以外的糖供体。
4.如权利要求2所述的工程化糖基转移酶，其中所述工程化糖基转移酶的所述多肽序列在选自以下的一个或更多个位置包含至少一个突变或突变集：10、262、10/262、278/284/311/339/360、283、307、309、339/361、344/361和361，其中所述位置参照SEQIDNO:4来编号。
5.如权利要求2所述的工程化糖基转移酶，其中所述工程化糖基转移酶的所述多肽序列在选自以下的一个或更多个位置包含至少一个突变或突变集：112/172/283/318、112/261/318、112/282/283/431、137/283、137/283/431、163/318、261/283/306/337、261/283/337、261/337、269/318、282/283、282/283/431、283、283/306/308/360、283/306/337/426、283/318/337/360、283/360、318、360和431，其中所述位置参照SEQIDNO:8来编号。
6.如权利要求2所述的工程化糖基转移酶，其中所述工程化糖基转移酶的所述多肽序列在选自以下的一个或更多个位置包含至少一个突变或突变集：4、6、22、22/84/87/154/198/199/356、22/84/87/154/198/199/306/356、22/84/87/154/199/306/356、22/84/87/154/356、22/84/87/154/198/199/306/356、22/84/87/154/199/306/356、22/84/87/198/199/306/356、22/84/87/198/199/356、22/84/87/198/199/306/356、22/84/87/198/199/356、22/84/87/199/306/356、22/84/87/199/356、22/84/154/198/199/207/306、22/84/154/198/199/306、22/84/154/198/199/356、22/84/154/198/199/356、22/84/154/198/199/356、22/84/154/199/356、22/84/154/199/207、22/84/154/199/356、22/84/154/207/306/356、22/84/154/306/356、22/84/154/198/199/306/356、22/84/154/198/199、22/84/154/198/199/306/356、22/84/154/199/306/356、22/84/154/199/356、22/84/154/199/356、22/84/198/199/306/356、22/84/199/356、22/84/207/356、22/84/356、22/84/154/198/199/306/356、22/87/154/198/199/356、22/87/154/199/306/356、22/87/154/322/356、22/87/154/198/199/356、22/87/154/199/356、22/87/154/198/199/207/306/356、22/87/154/199/207/356、22/87/154/199/356、22/87/154/199/306/356、22/87/198/199/306/356、22/87/198/199/306/356、22/87/198/199/207/356、22/87/198/199/356、22/87/199/356、22/87/199/356、22/154/198/199/207/306/356、22/154/198/199/356、22/154/199/356、22/154/198/199/306/356、22/154/199/356、22/154/199/207/306/356、22/198/199/356、22/198/199/207/329/356、22/199/356、22/207/356、22/356、64、74、84、84/154/198/199、87、97、106、110、112、137、139、154、159、169、179、191、195、198、199、207、233、259、261、262、306、347、356、396、417、421、427和435，其中所述位置参照SEQIDNO:32编号。
7.如权利要求2所述的工程化糖基转移酶，其中所述工程化糖基转移酶的所述多肽序列在选自以下的一个或更多个位置包含至少一个突变或突变集：64/106/109/112/131/159/233/421/427/431、64/106/109/112/417/421/427/431、64/106/109/139/179/417/421/427/431、64/106/109/233/347/427/431、64/106/112/347/417/421、64/106/139/179/233/417/427/431、64/106/417/421、64/106/431、64/106/109/112/131/179/417/427/431、64/106/109/417/421/427/431/439、64/106/112/139/159/179/204/396/417、64/106/112/159/179/417/421、64/106/204/417/421/427、64/109/112/139/159/179/417/431、64/109/112/139/417、64/109/139/233/417/421、64/109/159/179/204/233/417/421、64/109/417/421、64/109/417/421、64/139/233/417/427/431/439、64/139/347/417/421/427/431、64/417/421/431、106/109/112/131/159/179/417/421、106/109/112/131/159/204/347/417/421/427、106/109/112/204/347/421/439、106/109/112/261/417/431、106/109/112/347/427、106/109/139/427/431、106/109/417/421/427、106/112/159/204/233/417/421/427/431、106/112/233/417、106/112/396/417/421、106/139/159/233/347/417/421/427/431、106/233/421/427、106/417、106/109/139/347/417/421/427、106/109、106/109/139/233/417/421、106/109/139/417、106/109/233/427/431、106/112/159/179/204/417/421、106/112/159/179/233/417/421/427/439、106/131/179/233/421/427/431、106/139/421、106/347/417/427/431、109/112/131/159/179/439、109/112/131/159/417/421、109/112/139/179/417/427、109/112/159/179/417/421、109/112/159/417/427、109/112/179/204/233/417/421/427、109/112/179/347/417、109/112/204/233/417、109/112/204/427、109/112/233/417/431、109/112/417/421/427、109/112/417/427/431、109/131/139/179/261/396/421、109/131/204、109/139/179/417/421/427、109/139/179/417/427、109/179/233/421、109/204/417/431、109/417/421、109/417/427/431、112/131/179/204/417/421/427、112/131/179/347/417/421、112/139/179/204/233/347/427、112/159/417/421、112/417/421、131/179/233/417/427、139/233/417、159/347/417/421/431、179/417/421、233/417/421/427/431和347/417，其中所述位置参照SEQIDNO:232来编号。
8.如权利要求2所述的工程化糖基转移酶，其中所述工程化糖基转移酶的所述多肽序列在选自以下的一个或更多个位置包含至少一个突变或突变集：14/100、28/44/365/407、38/118/290/351/375/401/422、38/178/401、38/290/351/401/422、54/413、74/102/137/161/259/289、92/118、98/233、102/161/250/435、106/112/204/347/396/417、106/112/204/347/396/417/427、106/112/204/347/396/417/427/431、110/222/250/259/435、112/204/347/396/417/427、112/204/347/396/417/427/431、118/156/178/290/375/401/422、137/161/435、137/169、159/169/173/300/424/438、185/290/401/422、204/347/396/417/431、290/351/401和435/438，其中所述位置参照SEQIDNO:348来编号。
9.如权利要求2所述的工程化糖基转移酶，其中所述工程化糖基转移酶的所述多肽序列在选自以下的一个或更多个位置包含至少一个突变或突变集：14/28/38/74/100/102/118/161/169/178/233/250/407/422/438、14/28/38/74/102/156/159/233/250/289/413/422/424/435/438、14/28/38/100/102/110/159/161/233/259/290/300/351/435、14/28/38/110/137/161/222/289/401、14/28/44/74/98/102/137/159/161/185/222/250、14/28/44/92、14/28/44/161/169、14/28/44/375、14/28/54/161/185/413、14/28/54/365、14/28/74/98/100/102/161/173/178/233/250/259/290/407、14/28/92/100/102/159/161/169/233、14/28/92/100/102/159/161/233/351/422、14/28/92/100/102/422/424/435、14/28/92/100/161/222/233/289/300、14/28/100/137/156/161/222/259/289/365/401/435/438、14/28/100/156/161/250、14/28/102/118/137/161/185/222/250/259/401、14/28/159/289/290/300、14/28/159/365/435、14/28/35、14/38/74/110/156/161/173/178/222/300、14/38/100/102/161/173/178/222/250/375/401/413、44/74/100/102/161/233/365/435/438、14/74/110/159/161/169/173/250/259/290/375/407/422、14/74/161/375/401、14/92/98/100/159/161/259/365/422/424/435、14/110/156/161/375/401/435/438、14/159/161/365/435/438、14/161/222/250/259/289/375/401/413、14/161/222/250/435/438、14/161/300、28、28/38/92/98/100/102/156/161、28/44/74/401、28/44/92/161/222/300/413、28/44/98/100/102/118、28/44/118/156/161/222/289/435/M438、28/44/289/290/351/422、28/44/435/438、28/54/92/159/161/290、28/54/159/290/438、28/54/250/439、28/74/156/159/161/178/300/365/435/438、28/74/156/161/365/407、28/74/161/290/365、28/92/100/102/110/161/185/250/300/375/435、28/92/98/100/110/156/161/401、28/92/118/159/222/250/259/300/407、28/156/161/185/435/438、28/156/161/233/259/300/435、28/98/100/102/161/185/351/401/435/438、38/161/300/438、74/98/100/102/110/118/161/178/250/289/290/300/435/438、74/98/100/102/118/156/159/161/435/438、74/156/161/173/178/424/435、74/375/435、98/100/118/159/161/300、98/100/156/159/161/178/259/289/290/351/422、102/137/159/161/422/424、118、137/159/161/185/300/351/365/435、156/159/161/169、159/161/222/290/375/407、159/161/401和161/259/289/435/438，其中所述位置参照SEQIDNO:548来编号。
10.如权利要求2所述的工程化糖基转移酶，其中所述工程化糖基转移酶的所述多肽序列在选自以下的一个或更多个位置包含至少一个突变或突变集：19/44/110/191/198/199/208/300/365、19/75/76/87/92/199/207/208、19/87/92/191/199/209/413/435、44/76/197/199/208/351、44/87/92/137/159/199/209、44/87/137/159/169/191/199/208、44/87/137/191/197/209/289/401、44/87/199/208、75/76/87/92、75/76/87/92/290/300、75/76/87/191、75/76/87/191/197/199/209/300、75/87/92/169/207/208/300/413/435、75/87/110/137/169/191/199/208/209/289/435、75/87/110/191/197/198/207/208/289/290/300/401/413、75/87/300、75/110/197/199/208/290/300/401/413、76/92/199/209、87/92/197/198/199/208/300、87/137/435、87/169/191/199/207/209/401/413、87/191/198/199/222/244/289/300/435、87/92/110/169/199/207/209/290/300、87/92/159/169/191/198/290/413/435、87/92/159/191/199/208/209/289/290、87/92/208/401、87/435、92/137/191/199/209、92/197/199/207/208/401、137/198/199/207/208/426/435、137/199/208/209/290/435、137/365、159/197/199/207/209、169/191/197/199/207/208、169/197/199/207/209/222/300/413/435、191/207/208/289/290/413/435和197/198/199/208/209，其中所述位置参照SEQIDNO:562来编号。
11.如权利要求2的工程化NDP-糖基转移酶，其中所述工程化NDP-糖基转移酶的所述多肽序列在选自以下的一个或更多个位置包含至少一个突变或突变集：69/173/175/243/246/354/365/383/399、69/173/243/383/399、56/191/354/383/399、70/225/246/409/413、70/115/225/409、70/225/413、70/225/247、74/310/396/424、74/396和173/175/191/365/383/399，其中所述位置参照SEQIDNO:758来编号。
12.如权利要求2的工程化NDP-糖基转移酶，其中所述工程化NDP-糖基转移酶的所述多肽序列在选自以下的一个或更多个位置包含至少一个突变或突变集：24、24/28、24/28/262、24/28/262/264、24/28/262/264/423、24/264/294、28、28/262/264、28/423、32、56/69/70/175/191/246、56/69/70/175/191/246/354、56/69/70/175/354、56/69/70/191/246/354/365、56/69/70/246/354、56/69/175/191/246/354、56/69/175/246/354、56/69/175/246/354/365、56/69/246/354、56/69/246/365、56/70/175/191/246、56/70/175/191/246/354、56/70/175/191/354/365、56/70/175/246/354、56/70/175/246/365、56/70/191/246/354/365、56/70/191/354、56/175/246、56/175/354、56/175/354/365、56/191/246/354、56/191/354/383/399、56/246、56/246/354/365、56/354、69、69/70/175/191/246/354/365、69/70/191/246/354/365、69/70/246、69/70/354/365、69/173/175/243/246/354/365/383/399、69/173/243/383/399、69/175/191/246/354、69/175/354、69/246/354/365、69/354、70、70/115/225/409、70/175/191/246/354/365、70/175/191/354/365、70/191/246/354/365、70/191/246/365、70/225/246/409/413、70/225/247、70/225/413、74/310/396/424、74/396、126、126/220、126/403、173/175/191/365/383/399、175、175/191、175/191/246/354/365、175/191/354、175/191/354/365、175/246/354、175/246/354/365、175/354、191/246/354、246/354、262/264、264、264/29、269、325、341、351、354、354/365和366，其中所述位置参照SEQIDNO:770来编号。
13.如权利要求2所述的工程化糖基转移酶，其中所述工程化糖基转移酶的所述多肽序列在选自以下的一个或更多个位置包含至少一个突变或突变集：24/32/264/269/330/402/403、24/32/264/269/382/403/406、24/32/264/330、24/32/269、24/32/269/382/385/389/402/406、24/32/269/403、24/32/330、24/264/269/389/402/406、70/126/175/191/246/325/354/366、70/126/175/325/330/351/354/366、70/126/191/246/325/351/354/366/423、70/126/191/246/325/351/354/423、70/126/191/246/325/351/366/423、70/126/191/246/354/366、70/126/246/330/366、70/126/246/354/366、126/211/220/253/316/342、126/211/220/275/279/323、126/211/260/423、126/220/260、126/220/316、56/220/260/423、220/260和220/260/423，其中所述位置参照SEQIDNO:792来编号。
14.如权利要求2所述的工程化糖基转移酶，其中所述工程化糖基转移酶的所述多肽序列在选自以下的一个或更多个位置包含至少一个突变或突变集：24/32/97/162/202、24/32/126/198/201/367、24/32/126/198/202/220/226/260/269S、24/32/146/226、24/32/198/201/220/226、24/32/198/201/226、24/97/260/367、32/97/198/202/226/260、32/202/367、32/226/367、56/175/197/211/330/382/385、56/175/197/253/385/389、56/175/264/382/385/389/402/406、56/197/264/279/330/382/389/402/403/406、56/211/253/316/323、56/211/264/316/389、56/211/279/323/330/402、56/264/385/389、97/202/367、162/220/226/367、175/197/211/264/330、175/211/264/279/316/323、175/211/279/323/330/402/403/406、175/211/323/382/402/403/406、175/211/403/406、175/264/316/323/330/403/406、175/264/316/389/402、175/264/323/330、197/211/316/342/406、197/211/316/382/389/402/403、197/211/402、197/279/323、198/201/367、198/202/220/269/367、201/202/367、211/382/406、211/385/389、211/402/403和389，其中所述位置参照SEQIDNO:954来编号。
15.如权利要求2所述的工程化糖基转移酶，其中所述工程化糖基转移酶的所述多肽序列在选自以下的一个或更多个位置包含至少一个突变或突变集：24/32/175/211/260/330/403/406、24/32/175/226/253/275/316、24/32/201/226/260/264/330/402/406、24/162/175/198/211/226/275/316/323/389、24/162/175/201/275/316、24/162/198/201/211/226/323/351、24/162/198/201/226/351、24/162/201/253/264/351/402/406、24/175/198/211/226/253/316、24/175/201/275/316/351、24/175/201/316、24/175/211/220/260/275/330/389、24/175/211/253/316、24/175/211/316/330、24/175/226/323/351、24/198/201、24/198/201/211、24/198/201/211/220/260、24/198/201/220/275/389/402/406、24/198/201/226/330/389、24/198/201/351、24/201/211/253/323/351/366/389/402/403、24/201/226/253/402/403/406、24/226/330/351/403、175/198/201/211/226/260/264/323/402/406和175/198/226/260/351/402/403/406，其中所述位置参照SEQIDNO:1054来编号。
16.如权利要求2所述的工程化糖基转移酶，其中所述工程化糖基转移酶的所述多肽序列在选自以下的一个或更多个位置包含至少一个突变或突变集：21/127/129/161、21/127/129/161/162、21/127/129/162/199/200、127/129/161/162/199、127/129/161/199/200、127/129/162、156、156/161、156/161/162、156/162/199和156/199/200，其中所述位置参照SEQIDNO:1002来编号。
17.如权利要求2所述的工程化糖基转移酶，其中所述工程化糖基转移酶的所述多肽序列在选自以下的一个或更多个位置包含至少一个突变或突变集：2/7/12/15/175/260/318、7/12/400/435、7/318/451、12/15/57/71/175/260/400/402、12/15/57/220/254/260/318/402、12/15/57/318/402/435、12/15/318/400/402/406、12/57/175/451、12/175/260/264/318/400、12/175/400/402/406、12/318/402/404/406/451、12/318/402/404/451、15/175/318/400/402、32、57/175/220/260/264/402、57/175/404、57/220/260/400/402/406、57/260/400/402/404、57/400/402、57/402、135、148、152、152/192/195、160/186/195、186、195、260、237、239、240、323、325、326、327、330、331、356和400/402，其中所述位置参照SEQIDNO:2600来编号。
18.如权利要求2所述的工程化糖基转移酶，其中所述工程化糖基转移酶的所述多肽序列在选自以下的一个或更多个位置包含至少一个突变或突变集：11、14/23/274/326/329、14/31/184/274/322/326/329/330、14/56/184/185/194/238/239/274/329/399、14/56/184/194/234/315/326/329/399/401、14/56/194/238/315/325/326/329/330/399、14/56/252/274/315/326/329/330/401、14/184/185/194/234/325/326/329、14/184/185/194/388/399/401、14/184/194/355/399、14/185/194/238/399、14/185/236/238/239/274/322/326/329/355/399/401、14/194、14/322/326/330、14/326/330、14/355、14/355/399、23/31/147/184/185/238/252/325/329/330/388/401、31/56/315/329/330、45、55、56、58、65、65/114/132/238、65/238/240、104、113、114、132、135、138、147/236/238/243/315/329/330/399/401、165、185/194/236/239/325/326、223/412、238、256、273、286、309、391、422、430和449，其中所述位置参照SEQIDNO:2718来编号。
19.如权利要求2所述的工程化糖基转移酶，其中所述工程化糖基转移酶的所述多肽序列在选自以下的一个或更多个位置包含至少一个突变或突变集：23/31/185/324/401、23/31/185/355、31/134/185/252/274/324/388、31/134/238/252/322/324/388、31/134/252/324、31/184/185/238/239/322、31/236、31/322、31/388、122、134/184/185/234/236/239/274/324/388、164、176、177、184/185/322、234/236/238/322/324/355、236、238/324/329/355、316、322/324、324/329/355/401、325、400、425、426、427、440和446，其中所述位置参照SEQIDNO:2814来编号。
20.如权利要求2所述的工程化糖基转移酶，其中所述工程化糖基转移酶的所述多肽序列在选自以下的一个或更多个位置包含至少一个突变或突变集：11、11/45/58/132/138/286、11/58、11/58/65/104/107/138/286、11/58/65/107/135/223/286/391/430、11/58/65/135/138、11/58/104/107/114/138/223/391、11/58/114/286/309/391、11/58/132/165/286/391/422/430、11/58/138/309、11/65/104/107/138/165/286/391/430、11/65/107/135/165/391/430、11/65/132/135/138/223/391、11/65/132/135/252、11/65/132/391/430、11/65/135/138、11/104/132/138/309/391、11/104/132/138/391、11/107/114/223/309/430、11/107/138、11/114/135/138/223、11/114/223/252/286/391、11/132/135/138/223/286、11/132/138/223/286/391、11/138/165/223/309、58/65/138、58/65/138/165、58/65/165/309/430、58/104/114/165/391、107/114/132/138、107/430、135/138/165/309/430和223/309，其中所述位置参照SEQIDNO:2884来编号。
21.如权利要求2所述的工程化糖基转移酶，其中所述工程化糖基转移酶的所述多肽序列在选自以下的一个或更多个位置包含至少一个突变或突变集：8/448、9、58/107/122/176/236/324/325/400/426/427、58/107/122/236/324/400/425/446、58/107/122/322/400/425/427/440/446、58/107/164/400、58/107/236/400、58/107/400、58/122/164/236/446、58/122/176/236/400/446、58/122/176/322/324/426/427、58/122/176/400/425/426/427/446、58/122/322/325、58/122/325、58/122/440、58/164/176、58/164/324/425/427、58/176/236、58/236、65、106、107/122/236/425/426/446、107/164/236/400/446、107/176/322/325/440/446、107/176/400/425/427/440、107/236、107/440、115、116、122/164/176/324/400、122/164/400/440、122/164/400/440/446、122/176/236/400、122/176/324/400/440、122/400、122/425/426/446、122/440/446、139、139/252、164、164/271/425/426、164/322/324/325/400/425/440/446、164/400、172、176/400、178、189、200、210、213、240、242、245、255、324/400/425/426/440/446、324/423、385、408、409、411、412、415、416、423、447和448，其中所述位置参照SEQIDNO:3016来编号。
22.如权利要求2所述的工程化糖基转移酶，其中所述工程化糖基转移酶的所述多肽序列在选自以下的一个或更多个位置包含至少一个突变或突变集：2、3、8、8/107/139/164/415/416/440/448、8/107/139/255/322/325/415/416/440/448、8/107/164/255、8/107/164/423/440、8/139、8/139/164/200/236/240/322/440/448、8/139/164/236/416/423/440、8/139/189/240/325/416、8/139/200/236/240/255/423、8/139/255/415/416、8/164、8/164/189/200/322/324/325/416/448、8/164/240/423、8/164/252/255/448、8/164/448、8/236/240/252/448、8/240/423、8/252/255/322/325/448、12/164/440、20/126/128/155/161、20/126/128/160/161、20/126/128/160/161/198、20/126/128/161、20/126/128/161/198/199、20/126/155/160/198、20/126/155/161、20/126/160、20/126/160/161、20/126/161、20/128/155/160/161/198、20/128/155/161/199、20/128/155/199、20/128/160/161/198、20/155/160、20/155/160/161、20/155/161、20/155/161/199、20/160/161/198、34、72、73、75、107/139、107/139/200/240/322/324/325/448、107/236/240/325/440、107/240/252/423/448、107/423、113、114、121/126/128/161/369、126/128/155/160/161、126/128/155/160/161/199、126/128/155/161/199、126/128/160/161/369、126/128/160/198/369、126/128/160/199/369、126/128/160/369、126/128/161/199/369、126/128/161/369、126/128/369、126/160/161/199/369、126/160/198/369、126/196/198/369、126/198/369、126/199/369、126/369、128/155/160/161、128/155/160/161/199、128/155/160/198、128/155/199、128/160/161/369、128/161/199/369、128/198/199/369、128/199/369、128/369、139、139/164/236/240、139/255/325/415/440、155/161/198/199、155/199、160/161/369、161/198/369、161/369、164/189、164/189/236/240、164/189/240/252/415/423、164/200/236、164/200/236/240/324/416/440、164/200/236/255/322/324/423/440、164/236、164/236/240/440、164/236/423、164/322/325、164/322/325/416/423、164/416/448、186、189、199/369、200/236/322/325/416、200/322/325/415/448、221、235、236/415/416、237、239、240、240/252/255/322/415/416、240/252/255/415/448、255/423、256、286、299、305、309、312、313、323、325、355、389、406、415/416/448、422、438和446，其中所述位置参照SEQIDNO:3082来编号。
23.如权利要求2所述的工程化糖基转移酶，其中所述工程化糖基转移酶的所述多肽序列在选自以下的一个或更多个位置包含至少一个突变或突变集：14、35、42、46、49、105、106/164/172/200/409、106/164/172/210/240/415、106/164/172/242/409/416、106/164/200/210/242、106/164/200/210/415、106/164/200/240/408/409/416、106/164/210/240/408/409/416、106/164/210/408/409、106/164/240/415、106/164/409/415/423、106/172/200/210/240/242/408/415/416/423、106/172/200/210/242、106/172/240、106/172/240/242/409/415、106/172/242、106/172/242/416/423、106/172/408/409、106/172/409/423、106/200/210/409、106/210/240、106/210/240/408/415、106/240/242、106/240/242/409、106/242/408/409、134、143、164/172/200/210/242/409、164/172/240/242/415、164/172/242/408、164/200/408/415/416、164/240/242/408、164/240/242/415/423、164/423、172/200/210/240/408、172/200/240、172/200/408/416、172/210/415、172/240、172/240/242/415、172/240/409、179、181、200/210/240/242/409、200/240/242/407、200/242/415/416/423、200/408/409、210/240、232、240、240/242、240/242/408/416、240/242/415/423、240/408、240/415、278、290、336、373、381、401、409/415和441，其中所述位置参照SEQIDNO:3244来编号。
24.如权利要求2所述的工程化糖基转移酶，其中所述工程化糖基转移酶的所述多肽序列在选自以下的一个或更多个位置包含至少一个突变或突变集：21、91、125、127、130/187、143、143/150、145、152、156、186、187、195、197、200、201、202、264、268、364、365和415，其中所述位置参照SEQIDNO:3346来编号。
25.如权利要求2所述的工程化糖基转移酶，其中所述工程化糖基转移酶的所述多肽序列在选自以下的一个或更多个位置包含至少一个突变或突变集：2/5/113/186/237/406、2/73/186/237、2/189/286、2/286/355/416/422、5/34/73/113/406、5/73/186/406、5/113/237/406、5/186/237/245/256/406、5/186/237/406、5/256/406、34/113/186/237/406、72/73/172/235/240/242/438、72/172/239/240/242/408、72/172/240/242、73/172、73/172/235/239/240、73/172/235/239/242、73/172/239/240、73/172/239/240/242、73/172/240/242/408、73/172/240/408、73/186/237/406、73/235/240/323、73/235/240/408、73/237、73/239/242、96、113/186/406、127、132、144、153、155、156、172、172/188/323、172/235、172/235/239/240/242、172/235/239/408、172/235/240、172/235/240/242/438、172/239/240/242/323/408、172/240、172/240/299/323、186、186/237、186/237/286、186/406、187、189/333/355/421,196、199、200、235/239/240、235/240/242、237、239/240、239/240/242/256/323、239/240/242/323/408、239/240/408、239/242/408、240/242/256/438和242/408，其中所述位置参照SEQIDNO:3502来编号。
26.如权利要求2所述的工程化糖基转移酶，其中所述工程化糖基转移酶的所述多肽序列在选自以下的一个或更多个位置包含至少一个突变或突变集：2/5/35/105/143/237/373/416/422、2/5/35/143/232/237/416/422/441、2/5/35/232/278/373/416、2/5/105/143/232/373/416/422、2/5/278、2/105/143/232/237/278/373/441、2/143/232/373/441、2/143/373/441、3、5/35/232/373/416/422、5/105/232/237/373/416/441、5/105/237/278/422/441、5/105/237/416/422/441、5/143/189/232/237/441、5/143/232/237/278、5/143/232/237/416/422、5/143/232/373/422/441、5/143/237/278/373/416/422、5/143/373、5/189/237/278/373/416/422/441、5/232/416/422、5/237/373/422、5/373/416、8、26/42、26/42/46/49、26/42/46/49/134、26/42/46/49/134/186、26/42/46/134、26/42/49/134、26/42/49/134/186/355、26/42/49/134/401、26/42/134/401、26/49/134、26/134、26/134/186/355/401、26/134/355、26/134/401、26/355/401、35、35/105/189/232/373/416、42/46/49/97/134/401、42/46/49/134、42/46/49/134/186、42/46/49/134/186/355、42/46/49/134/235/355/401、42/46/49/134/401、42/46/49/186、42/49/134/186/355、42/49/134/186/401、42/49/134/355/401、42/134/186、42/186/355、46/49/134、49/134/355、50、61、62、101、105/143/232/237/373/416/422/441、105/143/278/373、105/189/237、105/237/278/373/416/422、105/237/373/422/441、105/373、105/373/441、134/401、137、143、143/189、143/189/232/422/441、143/189/237/373/416/422、143/232、143/237、143/237/422/441、158、161、164、176、186/355、189/232/373/416/422/441、189/237/278/416/441、193、223、223/243、232/237、237/373、235、237、237/373/441和239、240、243、244、248、249、301、323、330、352、364、426和427，其中所述位置参照SEQIDNO:3696来编号。
27.如权利要求2所述的工程化糖基转移酶，其中所述工程化糖基转移酶的所述多肽序列在选自以下的一个或更多个位置包含至少一个突变或突变集：5/73/113/186/187/373/423、5/73/143/144/179/186/187/422、5/73/144/179/186/373/423、5/73/144/187/373/422、5/143/144/179/181/186/187/373、5/144/179/181/373/422、5/144/373/422、11、12、41、44、44/187、45、49/96/127/132/156/196、49/96/127/153/278、49/96/132/153/155/156/237/278/406、49/96/132/153/199/200、49/96/132/155、49/96/132/155/237/278、49/96/155/199/200/406、49/153/155、55、56、57、65、66、70、72、73、73/113/143/179/181/422、73/113/179/181/186/187、73/143/144/179/186/187/373/423、73/179/181/186/187/373、73/179/181/186/373/422、73/181/186/187、74/238、82、83、85、96/127/132/153/278、96/127/153/155、96/132/153/155、96/132/153/155/156、96/132/153/155/156/200、96/132/153/156、96/132/196/199、96/132/278、96/153/155/156、96/153/155/199/200/237、96/153/406、103、111、113、113/143/179/186/187、113/144/186/423、113/144/373、113/181/186/373/422、113/373/422、114、117、127/132、127/132/153/156、127/132/155/156/406、127/153/155/199/200/237、127/406、132、132/153/155、132/153/237/406、132/155、132/237、135、138、140、143/144/179/181/186/187/422、143/179/181/186/187/422/423、144/179/181/186/187/373、144/179/186/187/373、153/155/156/237、153/155/196/199/237、153/199/406、153/237、155/199、159、160、162、167、179/181/186、179/181/186/187/423、179/186/187、179/187/373/422、181/186/187/422/423、182、214、220、222、223、226、236、238、256、286、299、309、373/423、387、388、389、391、393、406、408、412、418、422、429、430、449和450及373/423，其中所述位置参照SEQIDNO:3956来编号。
28.如权利要求2所述的工程化糖基转移酶，其中所述工程化糖基转移酶的所述多肽序列在选自以下的一个或更多个位置包含至少一个突变或突变集：7、8/375、9、10、12、50/137/189/375、53、62/153/155/156/159、62/153/155/156/159/427、62/153/155/199/406、65、68、99、106、110、115、116、131、132、136、137/164/375、153、153/155/156、153/155/156/159/199/238/406、153/155/237/238/239/406、153/155/238/239、153/155/427、153/156/159、153/156/199/237/427、153/156/427、153/159/237/238/352、153/176/181/427、155/156、155/156/176/181/199、155/156/176/238/427、155/181/199/238/406、156/199、156/199/427、164/375/433、170、178、190、192、194、200、220、223/375、238、242、245、257、272、280、302、304、335、375、385、395、399、402、408、412、416、423、427、445、447和449，其中所述位置参照SEQIDNO:4256来编号。
29.如权利要求2所述的工程化糖基转移酶，其中所述工程化糖基转移酶的所述多肽序列在选自以下的一个或更多个位置包含至少一个突变或突变集：11/41/44/127/132/406、11/41/44/127/278/406、11/41/45/73/127/278/406/408、11/41/45/127/278/406、11/41/132/278、11/44/45/127、11/44/73/127/132/135、11/44/73/127/132/135/406/408、11/44/127、11/44/132/278/406、11/45/73/127/135、11/45/127/132/135/138/182、11/45/406、11/73/127/132/135/182/278、11/73/127/132/278/406/408、11/73/127/132/406/408、11/73/132、11/73/132/135/408、11/127/132/135、11/127/132/135/182、11/127/132/135/406、11/127/132/138/182、11/127/132/182、11/132/135/406、11/182/406、41/44/45/73/127/132/278、41/45/127/132/135/278/406、41/73/132/135/406、44/45/73/132/135/406、44/45/127/132/135/138/182/406/408、44/45/127/132/278、44/73/127/135、44/73/127/135/182/278/406/408、44/73/132/135/406/408、45/73/127/132/135/406/408、45/73/132、45/73/132/135/182、45/73/278/406/408、45/127/132、45/127/132/135/182、45/127/132/135/182/406/408、45/127/135、45/132/408、45/406、56/309/449、57、65/114/422/427、65/114/427、65/143、65/143/235/427、73/127、73/127/132、127、127/132/135/182、127/132/135/182/406、132/135、132/135/182、132/135/406、132/406、164、164/220/309/449、164/220/449、164/449、182、220/449、309、309/449、406、418/427、427、427/429和449，其中所述位置参照SEQIDNO:4550来编号。
30.如权利要求2所述的工程化糖基转移酶，其中所述工程化糖基转移酶的所述多肽序列在选自以下的一个或更多个位置包含至少一个突变或突变集：2、4、7/10/73/127/132/385/423、10、10/53/73/99、10/53/272/423/427、10/53/423、10/73、10/73/127、10/127/132/385、10/132/302/385、11/44、11/71、11/287、11/441、37、40、42、42/138、42/141、43、46、47、48/398、49、49/406/408、51、53/73/200/423、53/127/132/385、53/127/136/385、53/132/136/302/423/427、53/132/302/385/423/427、64、65/106/445/447/449、65/143/220、65/220/309/445/447、65/220/445/449、65/399/406/447/449、65/402/406/445/449、65/445/447/449、65/447/449、71、73、73/127/427、73/132/136/385/427、73/385、73/385/427、76、97、100、106/220/399/402/406、108、108/172、109、112、115/116/278、115/170/190/238/412、115/190/194、115/245/278、116/170/190、116/190/406/408、116/238、116/238/245、116/416、117/157/301、118、118/406/408、119、119/172、127、130、132、133、134、141、143/220/445/447、143/309/402、143/309/445/447/449、157、169、170、170/190/192/194、170/192、170/192/194/278、170/192/194/335、170/194、170/194/335/416、170/238、170/335、170/335/416、172/420、172/437、179、181、190、190/192/194、190/194、190/194/238/245、190/194/335/416、190/194/412、190/245/412、192/194、192/194/242/406/408、194、200、200/385、220/399、220/445、220/445/447、257/385、259、272/302、272/385、274、275、278、287、288、302/385、309/399/449、309/445/447/449、333/398、333/406/408、338、356、357、376、381、385、394/420、396、397/406/408、398、401、385、385/427、399/406、399/406/449、402/445/449、406/408、406/445/447/449、406/445/449、410、417、420、423/427、434、437、441、445/447/449、445/449、447和449，其中所述位置参照SEQIDNO:7324来编号。
31.如权利要求2所述的工程化糖基转移酶，其中所述工程化糖基转移酶的所述多肽序列在选自以下的一个或更多个位置包含至少一个突变或突变集：10、10/144、10/199、11、11/64/109、11/445、13、14、15、15/394、16、22、36、42/43、42/44/71/73/116、43/73/141、46/47/51、46/51、47/49、47/51、64、64/65/109、64/65/112、64/112、64/134、64/445、65/112、65/112/445、71、71/73、71/73/141、71/141、71/302、73、73/116/141、73/141、73/302、89、93、96、109、109/112、109/115/118、109/134、109/406、112、112/445、116、116/123、116/287、116/143、116/350、123、125、127、127/169/172、127/169/287、127/169/376/398/399、127/169/398/399、127/287、127/376、141、141/302、143、144、149、156、169/172/287、169/172/288、169/172/288/398/399/420/423/427、169/172/398/399、169/287、169/398、169/398/399、186、187、197、198、199、201、202、203、268、287、287/288、287/376、287/398、287/399、287/420/423/427、288、288/376/398、288/398、288/399、302、324、331、350、376、376/398、376/399、398、398/399、398/399/420、398/427、399和420，其中所述位置参照SEQIDNO:7784来编号。
32.如权利要求2所述的工程化糖基转移酶，其中所述工程化糖基转移酶的所述多肽序列在选自以下的一个或更多个位置包含至少一个突变或突变集：22、25、51、56、71、78、80、81、88、157、185/208/230/252/255/290/365、189/206/208/365、200、208/365/435、243、245、249、259、262/401、279、282、284、304/322/365/401、308、338、339、352、362、364、365/401/413/435、366和374，其中所述位置参照SEQIDNO:696来编号。
33.如权利要求2所述的工程化糖基转移酶，其中所述工程化糖基转移酶的所述多肽序列在选自以下的一个或更多个位置包含至少一个突变或突变集：51/56、51/56/243/249/282/353/362/366、51/56/243/249/308/362/364、51/56/249/353、51/56/249/362/364、51/56/249/362/366、51/243/249/308/353、51/243/249/348/362/366、51/249、51/249/282/284/364、51/249/282/353/366、51/249/284/308/362/366、51/249/353/362/364、51/353/362、56、56/243/249/282/364/366、56/243/364/366、56/249、56/249/284/353、56/249/353、56/284/366、243/249/282/284/362/364/366、243/249/308/353/366、243/249/353/362/366、243/282/353/362/364、243/282/362/364/366、243/308/353、249/353/362/366、282、308/366和362/366，其中所述位置参照SEQIDNO:4684来编号。
34.如权利要求2所述的工程化糖基转移酶，其中所述工程化糖基转移酶的所述多肽序列在选自以下的一个或更多个位置包含至少一个突变或突变集：25、25/56/353、25/243/249/259/366、25/243/249/362、25/362/366、51、51/56/200/243/249/259/338、51/56/362、51/71/249/279/284/362/366、56/243/249、56/362/366、70/198/259/313、85、88、88/173、110、159、163、171、174、175、177、198、198/313、198/313/428、200/243/249/259、208、208/320、209、209/234、222、226、234、234/408、243/338/362/366、253、256、259、265、272、289、322、336、353/362、405、411、428和439，其中所述位置参照SEQIDNO:4838来编号。
35.如权利要求2所述的工程化糖基转移酶，其中所述工程化糖基转移酶的所述多肽序列在选自以下的一个或更多个位置包含至少一个突变或突变集：8、9、25、25/198/209、25/200/209/338、25/200/243/249、25/209/243、25/209/243/249、25/209/243/259、25/209/249/259/366、25/209/259、25/209/279/366、25/209/289/366、25/249、25/259/279、25/259/279/289、25/279/284、25/279/284/289、25/289、34、53、54、55、61、69、70、73、79、87、91、107、108、111、141、153、158、174、190、194、198、198/200/209/243/249/289、198/249/338、200/209/366、201、205、209、209/249/259/279/338/366、209/249/259/289、209/249/279/284/289、209/249/338、209/279/289、209/366、234/297、238、247、249/259、252、253、254、256、259/366、279、279/338、289、297、308、321、322、327、336、338、341、342、364、366、388、392、411、412、414、426、430、432、446和449，其中所述位置参照SEQIDNO:4876来编号。
36.如权利要求2所述的工程化糖基转移酶，其中所述工程化糖基转移酶的所述多肽序列在选自以下的一个或更多个位置包含至少一个突变或突变集：88、88/110、88/110/159/198/200、88/110/159/198/234/259/265、88/110/159/198/259、88/110/198、88/110/234、88/159/198、88/198、88/198/200/259、88/198/259、88/259、88/259/265、110/259/265/411、159/198/411、159/259/411、171/174/175/177/208/320/428/439、171/175/177/208/320/428、171/177、171/177/226/428/439、171/208/320、171/208/320/428、171/208/428、174/175/177/208/320/428、174/175/428、174/320、198、198/200、198/200/234、198/234、198/259、208、208/320/331/428、208/320/428、208/428、234、259、320/428和428，其中所述位置参照SEQIDNO:5066来编号。
37.如权利要求2所述的工程化糖基转移酶，其中所述工程化糖基转移酶的所述多肽序列在选自以下的一个或更多个位置包含至少一个突变或突变集：2、7、25/61/208/252/253、25/61/428、25/107/208/320/428、25/208/247/252/253/364/428、25/247/249/252/364/428、38、53/54/55/153/201、53/54/308/392、53/171/308/392、54、61/107/208/252/253/254/364/428、61/208/252/254/428、64、68、73/87/201、91/201/439/444、99、106、107、107/208/320/364/428、107/247/249/252/254/364、107/247/252、107/247/428、109、159、169、171、172、177、179、190、190/208/247/252/428、222、233、233/269、247/249/252/254/320/428、249/252/253/254、249/252/254/428、251、252/253/254、253/320、259、264、289、296、300、308、308/327/439、317、318、320、320/364/428、320/428、347、404、408、417、424、427、428、428/434、431、435和438，其中所述位置参照SEQIDNO:5290来编号。
38.如权利要求2所述的工程化糖基转移酶，其中所述工程化糖基转移酶的所述多肽序列在选自以下的一个或更多个位置包含至少一个突变或突变集：2、49、73、87、87/88、87/88/94/159/177/208、87/88/159/198、87/88/177/198/249、87/88/208、87/159/177、87/159/320、87/177/249、87/198、87/198/199、87/198/208/320、87/208、87/208/320、87/320、88、88/177、88/177/208、88/177/320、88/198、88/199、88/199/208、88/208、88/208/249/320、88/320、113、134、135、158、159/177/198、159/177/208、159/198/208/320、171、173、177/198、177/208、195、214、222、253、256、257、268、272、289、300、302、330、348、374、392、399、408、411、412、437、439、445和453，其中所述位置参照SEQIDNO:5372来编号。
39.如权利要求2所述的工程化糖基转移酶，其中所述工程化糖基转移酶的所述多肽序列在选自以下的一个或更多个位置包含至少一个突变或突变集：2/7/107/233/252/253/320、2/7/107/233/252/253/320/408/428、2/7/233/252/253/320/427/428、2/233/252/317/320、7/107/190/233/252/253/317/408/427、7/107/233/252/253、7/107/233/252/317/320、7/107/233/252/317/408、7/190/233/252/253/320/427、7/190/233/252/317/320/427/428、7/190/233/252/408/427、7/233/252/253/317/408/427、7/233/252/253/408、7/233/252/317/320/427、7/233/252/317/428、14、55、56、64/169/201/347/392、64/172/264/268/347/392/417、91/94/171/172/201/264/347、91/201/264/347/392、94/201/264/347/435、107/190/233/252、107/190/233/252/317/320、107/233/252/253、107/252/317、169/171/172/264/392/435、169/171/201/264/392/435、169/172/201/264/347、169/172/201/264/347/392/435、169/172/201/347/392、169/172/201/417/435、171/172/201/264/392/417/435、171/201/392/417、190/233/252、190/233/252/253/317/320/408/428、190/233/252/317/408、190/233/252/320/408、201/264/347/392/417/435、201/264/347/392/435、201/264/347/417/435、233/252/253/317/320/427/428、233/252/253/408/427、233/252/317/408、233/252/317/427、233/252/320、233/252/320/408/428、255、282、308、336、342、348/374/435、364、374、391、407和422，其中所述位置参照SEQIDNO:5562来编号。
40.如权利要求2所述的工程化糖基转移酶，其中所述工程化糖基转移酶的所述多肽序列在选自以下的一个或更多个位置包含至少一个突变或突变集：2/4/113/158/163/302/364/399/449、2/4/113/158/163/330/449、2/4/113/163/449、2/4/158/163/364/449、2/4/158/222/257/302/330、2/4/158/330、2/4/163/222/302/330/364/449、2/4/163/...
【专利技术属性】
技术研发人员：乔纳森·弗罗姆，斯蒂芬妮·苏·加兰妮，尼基·德拉斯，杰克·梁，刘至中，大卫·恩特韦斯特尔，考特尼·黛安娜·莫菲特，
申请(专利权)人：科德克希思公司，
类型：发明
国别省市：美国;US
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