一种抗曲霉菌半乳甘露聚糖的单克隆抗体及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种抗曲霉菌半乳甘露聚糖的单克隆抗体及其应用，所述单克隆抗体的重链可变区包括如SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列；所述单克隆抗体的轻链可变区包括如SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列。本发明专利技术的单克隆抗体从新西兰大耳兔内获得，对曲霉菌的半乳甘露聚糖具有较强的结合活性和中和活性，稳定性好，可潜在地应用于曲霉菌感染的临床样本的检测与鉴定以及曲霉菌抑制剂研发等。

A monoclonal antibody against Aspergillus galactomannan and its application

【技术实现步骤摘要】
一种抗曲霉菌半乳甘露聚糖的单克隆抗体及其应用
本专利技术属于生物
，涉及一种抗曲霉菌半乳甘露聚糖的单克隆抗体及其应用。
技术介绍
近年来，由于广谱抗菌药物的大量使用、以及肿瘤患者和器官移植患者的增多，深部真菌感染引起的发病率和病死率逐年升高。烟曲霉菌(Aspergillusfumigatus)是一种条件致病菌，常感染免疫能力低下或者免疫能力缺陷的患者，正逐渐成为一种重要的致病真菌。侵袭性曲霉菌感染的检测金标准是组织活检和无菌体液培养，然而当被曲霉菌感染后，病情发展快，传统的培养方法周期较长、阳性检出率低，往往造成漏诊、误诊现象，容易贻误病情。因此，需要建立新的真菌感染诊断方法。单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对特定抗原表位的抗体，通常采用杂交瘤细胞制备，基于细胞融合技术，将具有分泌特异性抗体能力的致敏B细胞和具有无限繁殖能力的骨髓瘤细胞融合为B细胞杂交瘤，培养成细胞群后，可制备针对一种抗原表位的特异性抗体，即单克隆抗体。抗体检测法由于检测速度快、准确性高，正逐渐成为新的真菌感染诊断方法。CN109609466A公开了鼠抗曲霉菌多糖杂交瘤细胞株，单克隆抗体及应用；CN109628410A公开了一种鼠抗曲霉菌多糖杂交瘤细胞株，单克隆抗体及应用，获得的鼠源性曲霉菌多糖单克隆抗体与曲霉菌多糖具有高效价，且结合特异性强，可用于曲霉菌多糖的检测，但是两种单克隆抗体均为鼠源单克隆抗体，尽管鼠源单克隆抗体属于使用最广泛的抗体，但仍然存在亲和力弱的问题。因此，构建新的针对曲霉菌的单克隆抗体，在真菌感染的诊断和治疗领域具有广泛的应用前景。
技术实现思路
针对现有技术的不足和实际需求，本专利技术提供了一种抗曲霉菌半乳甘露聚糖的单克隆抗体及其制备方法和应用，所述单克隆抗体为兔源单克隆抗体，具有抗原识别位点多、特异性好、亲和力高的特点，解决了鼠源单克隆抗体在实际应用方面的问题，为建立曲霉菌检测、诊断、预防和治疗提供了新的方案。为达此目的，本专利技术采用以下技术方案：第一方面，本专利技术提供了一种抗原结合片段，所述抗原结合片段的重链可变区包括如SEQIDNO:3所示的重链CDR3；所述抗原结合片段的轻链可变区包括如SEQIDNO:6所示的轻链CDR3；SEQIDNO:3：SKTSTTVDLKM；SEQIDNO:6：YSNNRLANCQ。优选地，所述抗原结合片段的重链可变区还包括如SEQIDNO:2所示的重链CDR2、如SEQIDNO:1所示的重链CDR1；所述抗原结合片段的轻链可变区还包括如SEQIDNO:5所示的轻链CDR2、如SEQIDNO:4所示的轻链CDR1；SEQIDNO:2：TGYANWTSPTTED；SEQIDNO:1：YITNYYYVRQ；SEQIDNO:5：DAATYYTPSSTIDSQKP；SEQIDNO:4：QSEACAGYKYTGTWY。本专利技术中，选择新西兰大耳兔作为实验动物，以曲霉菌半乳甘露聚糖作为抗原进行免疫，得到的单克隆抗体特异性好、亲和力强，与人的同源性高。第二方面，本专利技术提供了一种抗曲霉菌半乳甘露聚糖的单克隆抗体，所述单克隆抗体包括如第一方面所述的抗原结合片段。优选地，所述单克隆抗体的重链可变区包括如SEQIDNO:7所示的氨基酸序列；所述单克隆抗体的轻链可变区包括如SEQIDNO:8所示的氨基酸序列；SEQIDNO:7：METGLRWLLLVAVLKGVQCQSVEEVSGFSLSSYITNYYYVRQAPGKSGGRLTGLEYIGMISGANTGYANWTSPTTEDTANGRFDMNWVTYVTPGTPLTLTCFCARTISKTSTTVDLKMYGMDLWGPGTLVTVSS；SEQIDNO:8：MDTRAPTQLLGLLLLWLPGATFAIVMTQSEACAGYKYTGTWYQFTLTISDGSVPVCDQDAATYYTPSSTIDSQKPGSTLASGVPSRFKGSGSGTQVGDTVPPKLLIYQSVYSNNRLANCQAVIAFGGGTEVVVK。优选地，所述单克隆抗体还包括兔源IgG1、IgG2、IgG3或IgG4恒定区中的任意一种或至少两种的组合，优选为兔源IgG1恒定区。第三方面，本专利技术提供了一种杂交瘤细胞，所述杂交瘤细胞产生如第二方面所述的单克隆抗体。优选地，所述杂交瘤细胞命名为DNK-GM2，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.18891，保藏日期为2019年11月25日。第四方面，本专利技术提供了一种核酸分子，所述核酸分子包括编码如第一方面所述的抗原结合片段和/或如第二方面所述的单克隆抗体的重链可变区和/或轻链可变区的DNA片段。优选地，所述单克隆抗体的重链可变区包括如SEQIDNO:9所示的核酸分子；SEQIDNO:9：ATGGAGACCGGCCTGAGGTGGCTGCTGCTGGTGGCCGTGCTGAAGGGCGTGCAGTGCCAGAGCGTGGAGGAGGTGAGCGGCTTCAGCCTGAGCAGCTACATCACCAACTACTACTACGTGAGGCAGGCCCCCGGCAAGAGCGGCGGCAGGCTGACCGGCCTGGAGTACATCGGCATGATCAGCGGCGCCAACACCGGCTACGCCAACTGGACCAGCCCCACCACCGAGGACACCGCCAACGGCAGGTTCGACATGAACTGGGTGACCTACGTGACCCCCGGCACCCCCCTGACCCTGACCTGCTTCTGCGCCAGGACCATCAGCAAGACCAGCACCACCGTGGACCTGAAGATGTACGGCATGGACCTGTGGGGCCCCGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGC。优选地，所述单克隆抗体的轻链可变区包括如SEQIDNO:10所示的核酸分子；SEQIDNO:10：ATGGACACCAGGGCCCCCACCCAGCTGCTGGGCCTGCTGCTGCTGTGGCTGCCCGGCGCCACCTTCGCCATCGTGATGACCCAGAGCGAGGCCTGCGCCGGCTACAAGTACACCGGCACCTGGTACCAGTTCACCCTGACCATCAGCGACGGCAGCGTGCCCGTGTGCGACCAGGACGCCGCCACCTACTACACCCCCAGCAGCACCATCGACAGCCAGAAGCCCGGCAGCACCCTGGCCAGCGGCGTGCCCAGCAGGTTCAAGGGCAGCGGCAGCGGCACCCAGGTGGGCGACACCGTGCCCCCCAAGCTGCTGATCTACCAGAGCGTGTACAGCAACAACAGGCTGGCCAACTGCCAGGCCGTGATCGCCTTCGGCGGCGGCACCGAGGTGGTGGTGAA本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗原结合片段，其特征在于，所述抗原结合片段的重链可变区包括如SEQ IDNO:3所示的重链CDR3；/n所述抗原结合片段的轻链可变区包括如SEQ ID NO:6所示的轻链CDR3。/n

【技术特征摘要】
1.一种抗原结合片段，其特征在于，所述抗原结合片段的重链可变区包括如SEQIDNO:3所示的重链CDR3；
所述抗原结合片段的轻链可变区包括如SEQIDNO:6所示的轻链CDR3。


2.根据权利要求1所述的抗原结合片段，其特征在于，所述抗原结合片段的重链可变区还包括如SEQIDNO:2所示的重链CDR2、如SEQIDNO:1所示的重链CDR1；
所述抗原结合片段的轻链可变区还包括如SEQIDNO:5所示的轻链CDR2、如SEQIDNO:4所示的轻链CDR1。


3.一种抗曲霉菌半乳甘露聚糖的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体包括如权利要求1或2所述的抗原结合片段；
优选地，所述单克隆抗体的重链可变区包括如SEQIDNO:7所示的氨基酸序列；
所述单克隆抗体的轻链可变区包括如SEQIDNO:8所示的氨基酸序列；
优选地，所述单克隆抗体还包括兔源IgG1、IgG2、IgG3或IgG4恒定区中的任意一种或至少两种的组合，优选为兔源IgG1恒定区。


4.一种杂交瘤细胞，其特征在于，所述杂交瘤细胞产生如权利要求3所述的单克隆抗体；
优选地，所述杂交瘤细胞命名为DNK-GM2，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.18891，保藏日期为2019年11月25日。


5.一种核酸分子，其特征在于，所述核酸分子包括编码如权利要求1或2所述的抗原结合片段和/或如权利要求3所述的单克隆抗体的重链可变区和/或轻链可变区的DNA片段；
优选地，所述单克隆抗体的重链可变区包括如SEQIDNO:9所示的核酸分子；
优选地，所述单克隆抗体的轻链...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘春龙，翟栓柱，付成华，张舟，盛长忠，周泽奇，粟艳，
申请(专利权)人：丹娜天津生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：天津;12