猪流行性腹泻-猪梭菌性肠炎二联亚单位的口服疫苗及制备方法技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，具体而言，提供了一种猪流行性腹泻‑猪梭菌性肠炎二联亚单位的口服疫苗及制备方法。本发明专利技术提供的猪流行性腹泻‑猪梭菌性肠炎二联亚单位的口服疫苗，该疫苗包括灭活猪流行性腹泻病毒S蛋白和灭活猪产气荚膜梭菌β毒素蛋白两种抗原，以及疫苗佐剂和口服佐剂。该疫苗使得猪同时获得猪流行性腹泻病毒抗体和猪产气荚膜梭菌β毒素抗体，避免猪感染流行性腹泻和梭菌性肠炎。同时，该疫苗以口服的途径进行给药，改变了免疫途径，减少机体免疫应激，副作用小，有效提高了疫苗的免疫效果。本发明专利技术提供的上述口服疫苗的制备方法简单易操作，并不需要特殊的生产设备，该口服疫苗的生产成本较低。

Oral vaccine and preparation of swine epidemic diarrhea Clostridium suis enteritis

【技术实现步骤摘要】
猪流行性腹泻-猪梭菌性肠炎二联亚单位的口服疫苗及制备方法
本专利技术涉及生物
，具体而言，涉及一种猪流行性腹泻-猪梭菌性肠炎二联亚单位的口服疫苗及制备方法。
技术介绍
猪流行腹泻病毒(PEDV)，属于冠状病毒科，冠状病毒属。猪流行性腹泻是由病毒引起的仔猪和育肥猪的一种急性肠道传染病。本病与传染性胃肠炎很相似，在我国多发生在每年12月份至翌年1-2月，夏季也有发病的报道。可发生于任何年龄的猪，年龄越小，症状越重，死亡率高。各种年龄的猪都能感染发病。哺乳猪、架子猪或肥育猪的发病率很高，尤以哺乳猪受害最为严重，母猪发病率变动很大，约为15-90％。病猪是主要传染源。梭菌性肠炎俗称仔猪红痢，是由C型和/或A型产气荚膜梭菌引起的1周龄内仔猪高度致死性的肠毒血症，以出血性腹泻、病程短、病死率高、小肠后端的弥漫性出血或坏死性变化为特征。C型产气荚膜梭菌产生的主要致死性毒素为α与β毒素。β毒素被认为是C型对人和动物起主要致病作用的毒素。目前预防本病最有效的办法是通过给妊娠母猪注射疫苗，仔猪出生后吸吮母猪初乳可获得被动免疫。梭菌毒素疫苗已在一些发展中国家试用成功，但目前无商品化制剂。目前的猪流行性腹泻病毒与猪产气荚膜梭菌β毒素的感染防御都是通过分批次分别注射疫苗进行的，重复性操作过多，成本较大同时免疫效果也不是很理想。有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的第一目的在于提供一种猪流行性腹泻-猪梭菌性肠炎二联亚单位的口服疫苗，以缓解现有技术中需要分别注射两种疫苗，免疫效果差并且免疫动物刺激应激大的技术问题。本专利技术的第二目的在于提供上述猪流行性腹泻-猪梭菌性肠炎二联亚单位的口服疫苗的制备方法，该制备方法简单易操作，没有要求特殊设备。为了实现本专利技术的上述目的，特采用以下技术方案：一种猪流行性腹泻-猪梭菌性肠炎二联亚单位的口服疫苗，所述口服疫苗包括免疫抗原、疫苗佐剂和口服佐剂；所述免疫抗原包括灭活猪流行性腹泻病毒S蛋白和灭活猪产气荚膜梭菌β毒素蛋白。在优选地实施方式中，所述灭活猪流行性腹泻病毒S蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。在优选地实施方式中，所述灭活猪产气荚膜梭菌β毒素蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示。在优选地实施方式中，所述疫苗佐剂包括GEL佐剂、氢氧化铝胶佐剂、ISM佐剂、251C佐剂或VG佐剂，优选为GEL佐剂。在优选地实施方式中，所述口服佐剂包括角鲨烯、黄原胶或葡聚糖中的至少一种；优选地，所述口服佐剂还包括香味剂和/或免疫增强剂。在优选地实施方式中，每ml单位的免疫抗原中含有20-80μg灭活猪流行性腹泻病毒S蛋白和20-80μg灭活猪产气荚膜梭菌β毒素蛋白，优选为30-60μg灭活猪流行性腹泻病毒S蛋白和30-60μg灭活猪产气荚膜梭菌β毒素蛋白，进一步优选为50μg灭活猪流行性腹泻病毒S蛋白和50μg灭活猪产气荚膜梭菌β毒素蛋白。在优选地实施方式中，疫苗佐剂的用量为免疫抗原体积的10v/v％-80v/v％，优选为20v/v％-60v/v％，进一步优选为30v/v％。在优选地实施方式中，口服佐剂的用量为疫苗佐剂和免疫抗原的体积总和的10v/v％-90v/v％，优选为20v/v％-70v/v％，进一步优选为50v/v％。上述口服疫苗的制备方法，将免疫抗原依次与疫苗佐剂和口服佐剂乳化混合，得到猪流行性腹泻-猪梭菌性肠炎二联亚单位的口服疫苗。在优选地实施方式中，灭活猪流行性腹泻病毒S蛋白和灭活猪产气荚膜梭菌β毒素蛋白的灭活方法均独立地包括：利用灭活剂在2℃-8℃混合灭活22-26h，然后36-38℃混合水解1-3h，再经除菌得到灭活猪流行性腹泻病毒S蛋白或灭活猪产气荚膜梭菌β毒素蛋白。与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：本专利技术提供一种猪流行性腹泻-猪梭菌性肠炎二联亚单位的口服疫苗，该疫苗包括灭活猪流行性腹泻病毒S蛋白和灭活猪产气荚膜梭菌β毒素蛋白两种抗原，将这两种抗原与疫苗佐剂制备成疫苗后，又与口服佐剂制备成了口服疫苗。该疫苗使得猪同时获得猪流行性腹泻病毒抗体和猪产气荚膜梭菌β毒素抗体，避免猪感染流行性腹泻和梭菌性肠炎，避免了二次免疫，利用上述二种蛋白制备得到的灭活疫苗杂蛋白少，每批疫苗批间差异小。同时，该疫苗与口服佐剂配伍，以口服的途径进行给药，改变了免疫途径，减少机体免疫应激，副作用小，肠道黏膜免疫应答，机体产生黏膜抗体高，有效提高了疫苗的免疫效果，利用灭活疫苗免疫动物，动物主要产生中和抗体(IgG)，专利技术人研究发现，血清IgG对PED的免疫保护效果不理想，肠道黏膜免疫所产生的分泌型抗体(sIgA)是抵抗PEDV感染的有效抗体；虽然注射产气荚膜梭菌梭菌灭活疫苗可有效的保护猪只抵抗产气荚膜梭菌的感染，但注射免疫刺激性大，注射部位易出现脓包，影响猪肉品质，而口服免疫所产生的保护效果与注射免疫相当。目前针对流行性腹泻和梭菌性肠炎的防控都是注射疫苗，免疫效果较差、副反应大、免疫困难。因此，选择安全无毒、能够通过胃酸进入肠道传递抗原物质的疫苗，从而有效地刺激黏膜免疫系统产生黏膜免疫应答对流行性腹泻和梭菌性肠炎的防控和动物福利具有重要意义。本专利技术提供的上述口服疫苗的制备方法简单易操作，并不需要特殊的生产设备，该口服疫苗的生产成本较低。具体实施方式下面将结合实施例对本专利技术的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本专利技术，而不应视为限制本专利技术的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。除非另有说明，本文中所用的专业与科学术语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法或材料也可应用于本专利技术中。一种猪流行性腹泻-猪梭菌性肠炎二联亚单位的口服疫苗，所述口服疫苗包括免疫抗原、疫苗佐剂和口服佐剂，其中，免疫抗原包括灭活猪流行性腹泻病毒S蛋白和灭活猪产气荚膜梭菌β毒素蛋白。该疫苗包括灭活猪流行性腹泻病毒S蛋白和灭活猪产气荚膜梭菌β毒素蛋白两种抗原，将这两种抗原与疫苗佐剂制备成疫苗后，又与口服佐剂制备成了口服疫苗。该疫苗使得猪同时获得猪流行性腹泻病毒抗体和猪产气荚膜梭菌β毒素抗体，避免猪感染流行性腹泻和梭菌性肠炎，避免了二次免疫，利用上述二种蛋白制备得到的灭活疫苗杂蛋白少，每批疫苗批间差异小。同时，该疫苗与口服佐剂配伍，以口服的途径进行给药，改变了免疫途径，减少机体免疫应激，副作用小，肠道黏膜免疫应答，机体产生黏膜抗体高，有效提高了疫苗的免疫效果，灭活疫苗免疫动物，动物主要产生中和抗体(IgG)，专利技术人研究发现，血清IgG对PED的免疫保护效果不理想，肠道黏膜免疫所产生的分泌型抗体(sIgA)是抵抗PEDV感染的有效抗体；虽然注射产气荚膜梭菌梭菌灭活疫苗可有效的保护猪只抵抗产气荚膜梭菌的感染，但注射免疫刺激性大，注射部位易出现脓包，影响猪肉品质，而口服免疫所产生的保护效果与注射免疫相当。目前针对流行性腹泻和梭菌性肠炎的防控都是注射疫苗，免疫效果较差本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种猪流行性腹泻-猪梭菌性肠炎二联亚单位的口服疫苗，其特征在于，所述口服疫苗包括免疫抗原、疫苗佐剂和口服佐剂；/n所述免疫抗原包括灭活猪流行性腹泻病毒S蛋白和灭活猪产气荚膜梭菌β毒素蛋白。/n

【技术特征摘要】
1.一种猪流行性腹泻-猪梭菌性肠炎二联亚单位的口服疫苗，其特征在于，所述口服疫苗包括免疫抗原、疫苗佐剂和口服佐剂；
所述免疫抗原包括灭活猪流行性腹泻病毒S蛋白和灭活猪产气荚膜梭菌β毒素蛋白。


2.根据权利要求1所述的口服疫苗，其特征在于，所述灭活猪流行性腹泻病毒S蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。


3.根据权利要求1所述的口服疫苗，其特征在于，所述灭活猪产气荚膜梭菌β毒素蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示。


4.根据权利要求1所述的口服疫苗，其特征在于，所述疫苗佐剂包括GEL佐剂、氢氧化铝胶佐剂、ISM佐剂、251C佐剂或VG佐剂，优选为GEL佐剂。


5.根据权利要求1所述的口服疫苗，其特征在于，所述口服佐剂包括角鲨烯、黄原胶或葡聚糖中的至少一种；
优选地，所述口服佐剂还包括香味剂和/或免疫增强剂。


6.根据权利要求1所述的口服疫苗，其特征在于，每ml单位的免疫抗原中含有20-80μg灭活猪流行性腹泻病毒S蛋白和20-80μg灭活猪产气荚膜梭菌β毒素蛋白，优选为30-60μg灭活...

【专利技术属性】
技术研发人员：贺笋，杜久斌，潘毅平，唐慧芬，范斌，张慧敏，
申请(专利权)人：天康生物股份有限公司，天康生物上海有限公司，
类型：发明
国别省市：新疆;65