一种外泌体经皮递送制剂及其用途制造技术

本发明专利技术公开了一种外泌体经皮递送制剂，其包括外泌体和海绵骨针。该制剂能够用于外泌体经皮递送。

A transdermal delivery preparation of exosomes and its application

【技术实现步骤摘要】
一种外泌体经皮递送制剂及其用途
本专利技术涉及一种外泌体经皮递送制剂及其用途。
技术介绍
干细胞是未充分分化、具有再生各种组织器官的潜在功能的一类细胞。干细胞已广泛用于皮肤再生。近来多个临床研究也证实植入间充质干细胞可以创面修复和再生。除了受损组织的移植替换，干细胞的旁分泌作用是在治疗过程中起着十分重要的作用。外泌体是一种能被大多数细胞分泌的微小膜泡(30-150nm)。外泌体源于细胞内吞体，经胞吐作用排到细胞外。它包含许多功能性mRNA、非编码RNA(如lncRNA和miRNA)以及丰富的蛋白(如与皮肤保持青春相关的各种生长因子)，大量参与细胞间物质交流和通讯。已有研究表明，干细胞外泌体可以激活皮肤活力，减缓皮肤衰老。最近越来越多的公司将注意力转向干细胞外泌体的化妆品产业化，以实现外泌体的快速转化。然而我们知道，皮肤是人体极为重要的保护屏障。皮肤的屏障作用主要来源于表皮最外层的角质层。角质层由15-25层内嵌于层状脂类基质中的扁平状角质细胞构成。细胞间脂类区域是化合物扩散的主要通道，且扩散方式以沿着脂类层状结构侧向移动为主。因此，角质层是疏水性半透膜，极大地阻碍亲水性化合物和生物大分子的透皮吸收。外泌体仅依靠脂质双层膜的类脂质体结构，是无法将其包含的功能性生物大分子有效带入体内的。我们实验也证明，外泌体直接应用于完整皮肤表面时，仅有3％左右的外泌体被吸收。关于促进外泌体皮肤吸收技术，目前国内外尚未见有相关报道。因此，开发一种适合日常使用、成本低、安全有效的外泌体促渗方法是十分有必要的。专利技术内容本专利技术的主要目的，在于提供一种外泌体经皮递送制剂，其包括外泌体和海绵骨针。优选地，所述的海绵骨针为蜂海绵(SpongeHaliclonasp.)骨针。本专利技术的另一目的，在于提供所述的一种外泌体经皮递送制剂在制备化妆品中的用途。优选地，所述的用途，其特征在于：所述的化妆品为抗皮肤衰老化妆品。本专利技术的再一目的，在于提供所述的一种外泌体经皮递送制剂在制备治疗皮肤病药物中的用途。本专利技术所述的一种外泌体经皮递送制剂，外泌体和骨针可以是分开的，也可以是混合的。外泌体的含量可以为制剂的1-99wt％。例如，10％，20％，30％，40％，50％，60％，70％，80％等。使用时，海绵骨针先于外泌体的使用，涂抹于皮肤表面，提前为外泌体的皮肤吸收打开通道；或是与外泌体混合后一起涂抹于皮肤表面。本专利技术蜂海绵骨针可刺入角质层打开皮肤屏障，并长时间滞留于皮肤角质层，为外泌体皮肤吸收提供长久的微通道。同时蜂海绵骨针可不限部位、不限面积的涂抹在皮肤表面，扩大了外泌体的应用范围。该专利技术可明显提高外泌体的皮肤吸收。附图说明下面结合附图和实施例对本专利技术作进一步说明。图1为实施例1不同经皮递送方式促进外泌体皮肤吸收的效果。图2为实施例1不同经皮递送方式促进外泌体在皮肤各层分布情况。图3为实施例2蜂海绵骨针对外泌体体内皮肤吸收的影响。图4为实施例3基于蜂海绵骨针的外泌体外用对小鼠光老化皮肤的皱纹形态和组织病理学的影响。图5为实施例3基于蜂海绵骨针的外泌体外用对小鼠光老化皮肤表皮厚度的影响。图6为实施例3基于蜂海绵骨针的外泌体外用对小鼠光老化皮肤衰老相关因子mRNA表达的影响。图7为实施例4蜂海绵骨针与外泌体联合使用的安全性实验结果。具体实施方式蜂海绵骨针：申请人从人工养殖的蜂海绵(SpongeHaliclonasp.)中分离纯化获得的蜂海绵骨针(SpongeHaliclonasp.spicules简称SHS)，其末端尖锐，性质稳定且机械强度高(SiO2含量95％)，形态单一且尺寸均匀(长度约120μm，直径约7μm)。制备方法可参见CN201610267764.6“高纯度海绵骨针的制备方法”。猪皮的处理：家猪处死后，立即取下背部两侧皮肤，除去皮下脂肪组织。在不伤及皮肤的情况下尽可能剔除猪毛，使用磷酸缓冲盐溶液(PBS)清洗皮肤表面及底部，擦干后存于-20℃以备后用。外泌体制备：收集人脐带间充质干细胞前三代的无血清培养基，在低温条件下(4℃)按下述方案实施梯度离心：400g×10min，保留上清；2000g×30min，保留上清；10,000g×60min，保留上清；200,000g×120min，吸弃上次。用PBS重悬沉淀，离心200,000g×120min，小心弃去上清液。用少量PBS将沉淀重悬分装，-80℃保存备用。外泌体荧光标记：使用市售的ExoGlowTM-ProteinEVLabeling试剂，按照说明书操作对外泌体的蛋白进行荧光标记。实施例1蜂海绵骨针对模型外泌体皮肤吸收的促进效果体外透皮实验：取出冷冻皮肤，使用打孔器取圆形皮肤(直径为28mm)置于室温中解冻半小时，并用蒸馏水清洗皮肤表面。本实验通过皮肤的导电性来评价皮肤的完整性，皮肤电阻大于30KΩ-cm2，则认为皮肤表面完整适合后续的渗透实验。将皮肤表面朝上放置于Franz扩散池，接收池装满PBS溶液。按以下四种方式进行递送外泌体:外泌体组：给药池中加入150μL的荧光标记外泌体溶液；外泌体(按摩)组：使用电动按摩棒按摩皮肤2min，加入150μL的荧光标记外泌体溶液；外泌体(微滚针)组：在皮肤放上Franz扩散池前，使用DermarollerTM微滚针在皮肤表面共滚动2min。皮肤放上扩散池后，直接加入150μL的荧光标记外泌体溶液；外泌体(骨针)组：给药池中加入10mg/100μL的蜂海绵骨针PBS混悬液，并使用电动按摩棒按摩2min。用PBS清洗掉皮肤表面残余骨针，并加入150μL的荧光标记外泌体溶液。透皮16小时后，取出皮肤，进行冷冻切片，经抗荧光淬灭封片剂封片，激光共聚焦显微镜拍照分析。使用ImageJ软件分析共聚焦显微图片中皮肤各层的荧光信号强度。对比不同递送方式经皮吸收效果(结果见图1)及外泌体在皮肤各层的分布情况(结果见图2)。实施例2以蛋白标记荧光的人脐带间充质干细胞外泌体为模型外泌体，比较有无使用蜂海绵骨针促渗情况下，外泌体的小鼠活体皮肤吸收，如图3所示。方法：异氟烷麻醉下，使用电动剃毛刀去除六周龄SPF级昆明种小鼠给药部位的毛发，并用动物组织胶将Franz给药池固定在给药部位。外泌体(骨针)组：给药池中加入10mg/100μL的蜂海绵骨针PBS混悬液，并使用电动按摩棒按摩2min。用PBS清洗掉皮肤表面残余骨针，并加入150μL的荧光标记外泌体溶液。外泌体组：直接向给药池中加入150μL的荧光标记外泌体溶液。在小鼠麻醉的情况下透皮8小时，然后取下皮肤组织，进行冷冻切片，通过共聚焦显微镜分析两组皮肤样品中的荧光信号。实施例3以人脐带间充质干细胞外泌体为活性测试外泌体，通过紫外诱导的小鼠皮肤光老化模型，评价在有无使用蜂海绵骨针促渗的情况下，脐带间充质干细胞外泌体的抗本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种外泌体经皮递送制剂，其特征在于：包括外泌体和海绵骨针。/n

【技术特征摘要】
1.一种外泌体经皮递送制剂，其特征在于：包括外泌体和海绵骨针。


2.根据权利要求1所述的一种外泌体经皮递送制剂，其特征在于：所述的海绵骨针为蜂海绵(SpongeHaliclonasp.)骨针。


3.根据权利要求1或2所述的一种外泌体经皮递送制剂在制备化妆品中的用途。


4.根据权利要求3所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：张柯达，陈铭，李富荣，王浙锋，张驰，
申请(专利权)人：深圳市人民医院，厦门大学，
类型：发明
国别省市：广东;44