沉香四氢2-（2-苯乙基）色酮类化合物及其分离方法和应用技术

本发明专利技术公开了沉香四氢2‑(2‑苯乙基)色酮类化合物及其分离方法和应用，主要通过溶剂浸提、蒸馏水溶解分散、极性溶剂萃取、有机溶剂梯度洗脱和液相色谱分离等多级分离步骤，得到本发明专利技术结构新颖的化合物A1、A2和A3。药物活性实验表明本发明专利技术化合物具有明显的抗炎活性，说明其在预防或治疗炎症方面具有良好的应用前景。

2 - (2-phenylethyl) chromones from Aloe and their separation methods and Applications

【技术实现步骤摘要】
沉香四氢2-(2-苯乙基)色酮类化合物及其分离方法和应用
本专利技术涉及沉香四氢2-(2-苯乙基)色酮类化合物及其分离方法和应用，属于植物化学

技术介绍
沉香为常绿乔木瑞香科(Thymelaeaceae)沉香属(Aquilaria)和拟沉香属(Gyrinops)植物含有树脂的木材。白木香(A.sinensis)是我国主要的沉香树种，产于广东、海南和云南等地区。《中国药典》记载沉香具有“行气止痛、温中止呕、纳气平喘”功效，可用于胸腹胀闷疼痛，畏寒呕吐呃逆，肾虚气逆喘急等。这些功效与现代医学的抗炎作用十分相似。沉香的主要化学成分为2-(2-苯乙基)色酮类与倍半萜类化合物，国内已有报道从沉香中分离鉴定2-(2-苯乙基)色酮类化合物超过200余个。刘洋洋等在《通体结香技术产沉香的2-(2-苯乙基)-色酮类化合物及其抗炎活性研究》中指出得到10个2-(2-苯乙基)-色酮类化合物，其中化合物2-4和10具有显著的抗炎活性，化合物1、5、6具有较弱的抗炎活性，其他化合物抗炎活性不明显。可见，研究表明部分沉香色酮类化合物具有抗炎作用。但目前发现的具有抗炎作用的化合物较少。本专利技术旨在对“通体香”化学成分进一步分离，以期得到一种新的具有抗炎作用的色酮类化合物。
技术实现思路
鉴于现有技术的不足，本专利技术提供一种沉香四氢2-(2-苯乙基)色酮类化合物，并具体公开得到具有抗炎作用的化合物的分离方法，还进一步验证了所得化合物的抗炎效果。本专利技术技术方案如下：本专利技术提供一种沉香四氢2-(2-苯乙基)色酮类化合物，分别为化合物A1、A2和A3，其结构为：本专利技术还提供了化合物A1、A2和A3的分离方法，包括以下步骤：(1)将干燥沉香片粉碎，用乙醇溶液加热50～60℃提取至少2次，每次提取1～3h，合并提取液，减压浓缩得粗提物；(2)将粗提物用水稀释制成悬浮液后，依次用石油醚、二氯甲烷萃取至少3次，合并有机相，减压浓缩得浸膏；(3)取步骤(2)二氯甲烷萃取得到的浸膏，先经正相硅胶柱层析，采用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂作为洗脱剂进行梯度洗脱，洗脱梯度为(20:1)～(1:1)，根据极性大小共得到4个组分，即Fr.1～Fr.4；然后用二氯甲烷-甲醇混合溶剂进行梯度洗脱，洗脱梯度为(100:0)～(0:100)，根据极性大小得到5个组分，即Fr.5～Fr.9；(4)将Fr.2先经正相硅胶柱层析，采用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂作为洗脱剂进行梯度洗脱，洗脱梯度为(10:1)～(1:1)，减压浓缩后再经SephadexLH-20凝胶柱层析，洗脱剂为MeOH，洗脱3～6个柱体积，减压浓缩后再经高效液相色谱HPLC制备，得到化合物A1；(5)将Fr.3先经SephadexLH-20凝胶柱层析，洗脱剂为MeOH，洗脱3～6个柱体积，减压浓缩后再经高效液相色谱HPLC制备，依次得到化合物A2、A3。优选的，步骤(1)中，乙醇溶液体积分数为75～95％，其用量为每千克沉香粉末用2～3L乙醇溶液；步骤(2)中水的用量为每100克粗提物加水300～400mL，每次萃取的有机溶剂的体积用量是水体积的1.2倍。优选的，步骤(3)中，石油醚-乙酸乙酯混合溶剂的洗脱梯度为20:1、10:1、5:1、1:1，每个梯度收集三个柱体积，每个梯度得到一个组分，共得到4个组分，即Fr.1～Fr.4。优选的，步骤(3)中，二氯甲烷-甲醇混合溶剂的洗脱梯度为100:0、90:10、80:20、70:30、60:40、50:50、40:60、30:70、20:80、10:90、0:100，每个梯度收集两个柱体积，根据极性大小分成5个组分，其中梯度100:0～90:10洗脱得到的为组分5，梯度80:20～70:30洗脱得到的为组分6，梯度60:40～50:50洗脱得到的为组分7，梯度40:60～30:70洗脱得到的为组分8，梯度20:80～0:100洗脱得到的为组分9，即Fr.5～Fr.9。优选的，步骤(4)中，石油醚-乙酸乙酯混合溶剂的洗脱梯度为10:1、5:1、1:1，每个梯度洗脱2～5个柱体积；高效液相色谱的条件为：色谱柱WatersC18，流速为2mL/min，流动相为体积比25:75的MeCN:H2O。优选的，步骤(5)中，高效液相色谱的条件为：色谱柱WatersC18，流速为2mL/min，流动相为体积比35:65的MeCN:H2O。优选的，沉香为七年生白木香采用通体结香技术结香20个月后所产沉香。本专利技术还通过药理活性实验，确认所得化合物A1、A2和A3具有良好的抗炎效果，提示化合物A1、A2和A3在制备预防或治疗炎症的药物中具有良好的应用前景。所述炎症为系统性炎症反应综合症、神经炎症、支气管炎、胃炎、肠炎、肺炎或肝炎。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：本专利技术通过溶剂浸提、蒸馏水溶解分散、极性溶剂萃取、溶剂梯度洗脱和液相色谱分离等多级分离提取方法，从“通体香”中同时得到具有新颖结构的3种四氢2-(2-苯乙基)色酮类化合物，并进一步发现三种化合物均具有良好的抗炎效果。其中化合物A2具有最优的抗炎效果，浓度低至5μM时仍然表现出一定的抗炎作用。附图说明图1：化合物A1的1H-NMR谱(CDCl3)图2：化合物A1的13C-NMR谱(CDCl3)图3：化合物A1的DEPT(135°)谱(CDCl3)图4：化合物A1的HSQC谱(CDCl3)图5：化合物A1的HMBC谱(CDCl3)图6：化合物A1的NOESY谱(CDCl3)图7：化合物A1的1H-NMR谱(DMSO-d6)图8：化合物A1的13C-NMR谱(DMSO-d6)图9：化合物A1的1H-1HCOSY谱(DMSO-d6)图10：化合物A1的HSQC谱(DMSO-d6)图11：化合物A1的HMBC谱(DMSO-d6)图12：化合物A1的NOESY谱(DMSO-d6)图13：化合物A1的HRESIMS谱图14：化合物A2的1H-NMR谱(MeOD-d4)图15：化合物A2的13C-NMR谱(MeOD-d4)图16：化合物A2的DEPT(135°)谱(MeOD-d4)图17：化合物A2的1H-1HCOSY谱(MeOD-d4)图18：化合物A2的HSQC谱(MeOD-d4)图19：化合物A2的HMBC谱(MeOD-d4)图20：化合物A2的NOESY谱(MeOD-d4)图21：化合物A2的HRESIMS谱.图22：化合物A3的1H-NMR谱(MeOD-d4)图23：化合物A3的13C-NMR谱(MeOD-d4)图24：化合物A3的DEPT(135°)谱(MeOD-d4)图25：化合物A3的1H-1HCOSY谱(MeOD-d4)图26：化合物A3的HSQC谱(MeOD-d4)图27本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.沉香四氢2-(2-苯乙基)色酮类化合物，其特征在于，所述沉香四氢2-(2-苯乙基)色酮类化合物的结构为：/n

【技术特征摘要】
1.沉香四氢2-(2-苯乙基)色酮类化合物，其特征在于，所述沉香四氢2-(2-苯乙基)色酮类化合物的结构为：





2.权利要求1所述的沉香四氢2-(2-苯乙基)色酮类化合物的分离方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将干燥沉香片粉碎，用乙醇溶液加热50～60℃提取至少2次，每次提取1～3h，合并提取液，减压浓缩得粗提物；
(2)将粗提物用水稀释制成悬浮液后，依次用石油醚、二氯甲烷萃取至少3次，合并有机相，减压浓缩得浸膏；
(3)取步骤(2)二氯甲烷萃取得到的浸膏，先经正相硅胶柱层析，采用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂作为洗脱剂进行梯度洗脱，洗脱梯度为(20:1)～(1:1)，根据极性大小共得到4个组分，即Fr.1～Fr.4；然后用二氯甲烷-甲醇混合溶剂进行梯度洗脱，洗脱梯度为(100:0)～(0:100)，根据极性大小得到5个组分，即Fr.5～Fr.9；
(4)将Fr.2先经正相硅胶柱层析，采用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂作为洗脱剂进行梯度洗脱，洗脱梯度为(10:1)～(1:1)，减压浓缩后再经SephadexLH-20凝胶柱层析，洗脱剂为MeOH，洗脱3～6个柱体积，减压浓缩后再经高效液相色谱HPLC制备，得到化合物A1；
(5)将Fr.3先经SephadexLH-20凝胶柱层析，洗脱剂为MeOH，洗脱3～6个柱体积，减压浓缩后再经高效液相色谱HPLC制备，依次得到化合物A2、A3。


3.根据权利要求2所述的沉香四氢2-(2-苯乙基)色酮类化合物的分离方法，其特征在于，步骤(1)中，乙醇溶液体积分数为75～95％，其用量为每千克沉香粉末用2～3L乙醇溶液；步骤(2)中水的用量为每100克粗提物加水300～400mL，每次萃取的有机溶剂的体积用量是水体积的1.2倍。


4.根据权利要求2所述的沉香四氢2-(2-苯乙基)色酮类化合物的分离方法，其特征在于，步骤(3)中，石油醚-乙酸乙酯混合溶剂...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏建和，余章昕，刘洋洋，王灿红，杨云，
申请(专利权)人：中国医学科学院药用植物研究所海南分所，
类型：发明
国别省市：海南;46