用于治疗痤疮的包含痤疮丙酸杆菌噬菌体的组合物制造技术

本文尤其提供了预防或治疗痤疮的组合物、系统和方法。包括包含至少一种痤疮丙酸杆菌噬菌体、至少一种抗痤疮化合物和药学上可接受的载体的组合物、组合、系统和方法。还包括包含痤疮丙酸杆菌噬菌体和酶的组合物、组合和系统。还提供了预防或治疗痤疮的方法。

Composition containing Propionibacterium acnes phage for acne treatment

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于治疗痤疮的包含痤疮丙酸杆菌噬菌体的组合物相关申请的交叉引用本申请要求2017年4月21日提交的美国临时申请第62/488,326号的优先权的权益，其全部内容和/或全部目的通过援引加入本文。政府支持本专利技术是在美国国立卫生研究院资助的基金编号1R43AR068172–01的政府支持下完成的。政府拥有本专利技术的某些权利。序列表的援引加入于2018年4月20日创建、大小为101,782字节、名为“052004-503001WO_SequenceListing.TXT”的文本文件的全部内容，在此通过援引加入。
技术介绍
痤疮是一种几乎全世界的病况，其影响全世界超过80％的人。这种慢性皮肤病况是复杂的，但主要病原体是痤疮丙酸杆菌(Propionibacteriumacnes)，其过度生长导致引起丘疹的炎症。尽管明确需要创新，但30多年来一直没有新型痤疮药物。目前的治疗(包括过氧化苯甲酰和抗生素)效果非常差，并且最有效的治疗——异维甲酸——由于危险的副作用(包括先天缺陷、肝损伤和自杀)仅限于少数患者。需要治疗痤疮的新方法和组合物。
技术实现思路
本文尤其提供了预防或治疗痤疮的组合物、组合、系统和方法。在一方面，本文提供了一种组合物，其包含至少一种痤疮丙酸杆菌(Propionibacteriumacnes)噬菌体、至少一种抗痤疮化合物和药学上可接受的载体，基本上由至少一种痤疮丙酸杆菌(Propionibacteriumacnes)噬菌体、至少一种抗痤疮化合物和药学上可接受的载体组成，或由至少一种痤疮丙酸杆菌(Propionibacteriumacnes)噬菌体、至少一种抗痤疮化合物和药学上可接受的载体组成。在一方面，本文提供了一种组合物，其包括至少一种痤疮丙酸杆菌噬菌体、不超过一种抗痤疮化合物和药学上可接受的载体。在一方面，本文提供了一种组合物，其包括由至少一种痤疮丙酸杆菌噬菌体和不超过一种抗痤疮化合物组成的活性成分，以及药学上可接受的载体。在一方面，本文提供了一种组合物，其包括至少一种痤疮丙酸杆菌噬菌体、至少一种抗痤疮化合物和药学上可接受的载体，其中所述组合物不包含益生细菌。在一方面，本文提供了一种组合物，其包括痤疮丙酸杆菌噬菌体和酶。在一方面，本文提供了一种组合，其包含至少一种痤疮丙酸杆菌噬菌体和至少一种抗痤疮化合物，基本上由至少一种痤疮丙酸杆菌噬菌体和至少一种抗痤疮化合物组成，或由至少一种痤疮丙酸杆菌噬菌体和至少一种抗痤疮化合物组成，其中至少一种痤疮丙酸杆菌噬菌体和至少一种抗痤疮化合物的每个在于还包括药学上可接受的载体的组合物中。在一方面，本文提供了一种组合，其包括痤疮丙酸杆菌噬菌体和酶。在一方面，本文提供了一种预防或治疗有需要的对象中的痤疮的方法，该方法包括施用有效量的本文提供的组合物或组合。附图说明图1.将痤疮丙酸杆菌(P.acnes)(引起痤疮，左半平板)或颗粒丙酸杆菌(P.granulosum)(共生的，右半平板)细菌铺板在RCM-琼脂培养皿上。将浸泡在米诺环素或PHIT-101(107pfu/mL)中的无菌半垫(half-pad)放在每块平板上。在37℃厌氧温育3天后，出现杀灭区(箭头)，这表明米诺环素杀死病原性和共生细菌，而PHIT-101杀死引起痤疮的细菌，而不会干扰共生的颗粒丙酸杆菌。图2.将包括痤疮丙酸杆菌、颗粒丙酸杆菌(P.granulosum)和贪婪丙酸杆菌(P.avidum)的合成的皮肤微生物组(microbiome)在试管中生长至汇合。然后在存在或不存在PHIT-101的情况下将其温育48小时。通过使用IlluminaMiSeq平台对洗涤后的细菌沉淀物的16S扩增子进行NGS测序，对这三种物种的相对比例进行定量。PHIT-101几乎能够完全清除引起痤疮的痤疮丙酸杆菌，而不会影响其他两种共生物种的生长。图3.痤疮丙酸杆菌菌株之间的生物膜产生是高度可变的。96株痤疮丙酸杆菌在96孔聚苯乙烯微量滴定板中生长以刺激生物膜产生，并定量由各个菌株产生的生物膜。在这组菌株中证明的可变性表明，有必要在与人类毛孔中发现的条件更相似的生长条件下量化生物膜的形成。图4.选择可以降解痤疮丙酸杆菌生物膜的酶的筛选。痤疮丙酸杆菌在聚苯乙烯微量滴定板中生长以刺激生物膜产生。将酶以0.01mg/mL添加到孔中，并在30℃温育30分钟。用磷酸盐缓冲盐水(PBS)洗去降解的生物膜，并通过用结晶紫染色并记录在590nm处的吸光度来定量每个孔中的残留生物膜。蛋白酶如蛋白酶K和枯草杆菌蛋白酶表现出良好的活性，而dispersin是测试过的最佳糖苷解聚酶。图5.用生物膜降解酶(BDE)增强噬菌体大大增加细菌杀灭。将固着的痤疮丙酸杆菌细胞与PBS(未处理)、PHIT-101或PHIT-101和Dispersin温育。使用CellTiter-Blue试剂测量细胞存活，并在560Ex/590Em记录荧光。PHIT-101不能像在液体培养物中一样有效地杀死痤疮丙酸杆菌，但是添加生物膜降解酶Dispersin将细菌杀灭大大提高到类似于液体培养物的水平。图6.益生菌株在附着(adherent)培养中产生低水平的脂肪酶。具有已知基因型的益生菌痤疮丙酸杆菌菌株在生物膜条件下在微量滴定板中生长。生长72小时后，将培养物上清液过滤灭菌，并与4-MU棕榈酸酯在37℃温育4小时，以确定细胞外脂肪酶的产生。与病原体相比，益生菌株(Pr#C)的脂肪酶产生非常低，表明较低的炎症潜力。图7.益生菌株对上皮细胞的粘附比致病性痤疮丙酸杆菌显著更少。将选定的益生菌株与汇合的A-431上皮细胞温育(MOI10)。洗涤孔后，使用0.1％Tween80溶液洗下(lifted)细胞，并铺板在BHI板上。厌氧温育72小时后，对菌落计数。数据显示益生菌株显示出与上皮细胞的结合显著更低(*p<0.05，**p<0.005)。图8A-8D.益生菌株在小鼠耳部炎症模型中具有较低的炎症潜力。向CBA/J小鼠(每组5只小鼠)注射痤疮丙酸杆菌菌株，并在第5天进行细胞因子分析。益生菌株Pr#C显示出比致病性菌株显著更低水平(*P<0.05，**P<0.01，***P<0.0001)的炎性细胞因子IL-1β(图8A)、IL-6(图8B)、IL-17(图8C)和TNFα(图8D)。Pr-C具有ProII16S序列。图9.痤疮丙酸杆菌菌株在浮游和固着培养物中具有不同的脂肪酶谱。评估了一组两种致病性(Path-1、Path-2)和两种益生性(Pr-1至Pr-6)痤疮丙酸杆菌菌株在浮游(灰色柱)和固着(黑色柱)培养物中脂肪酶的产生。虽然益生菌株的脂肪酶产生与液体(浮游)培养物的致病性菌株没有显著差异，但在附着培养物中它们的脂肪酶输出始终低于相应的致病性培养物。有趣的是，在益生菌株之间观察到脂肪酶产生的可变性。选择具有最低脂肪酶活性的菌株。图10示出示例性噬菌体的生命周期。从左下方逆时针方向：噬菌体颗粒识别并吸附到宿本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种组合物，其包含至少一种痤疮丙酸杆菌(Propionibacterium acnes)噬菌体、至少一种抗痤疮化合物和药学上可接受的载体。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170421 US 62/488,3261.一种组合物，其包含至少一种痤疮丙酸杆菌(Propionibacteriumacnes)噬菌体、至少一种抗痤疮化合物和药学上可接受的载体。


2.权利要求1的组合物，其不包含益生细菌。


3.权利要求1或2的组合物，其中所述组合物还包含痤疮丙酸杆菌(P.acnes)生物膜降解酶。


4.权利要求1的组合物，其中所述至少一种抗痤疮化合物是水杨酸。


5.权利要求4的组合物，其中所述水杨酸以0.5％至2％(重量/体积)的浓度存在。


6.权利要求5的组合物，其中所述水杨酸以小于0.5％但大于约0.1％(重量/体积)的浓度存在。


7.权利要求1的组合物，其中所述至少一种抗痤疮化合物是硫。


8.权利要求7的组合物，其中所述硫以3％至10％(重量/体积)的浓度存在。


9.权利要求7的组合物，其中硫以小于3％但大于约0.1％、0.5％、1％、1.5％、2％或2.5％(重量/体积)的浓度存在。


10.权利要求1的组合物，其中所述至少一种抗痤疮化合物是间苯二酚和硫。


11.权利要求10的组合物，其中所述间苯二酚以2％的浓度存在并且所述硫以3％至8％(重量/体积)的浓度存在。


12.权利要求1的组合物，其中所述至少一种抗痤疮化合物包含间苯二酚单乙酸酯和硫。


13.权利要求12的组合物，其中所述间苯二酚单乙酸酯以3％的浓度存在并且硫以3％至8％(重量/体积)的浓度存在。


14.权利要求1的组合物，其中所述抗痤疮化合物是抗生素、类视黄醇或α-羟基酸。


15.权利要求1的组合物，其中所述痤疮丙酸杆菌噬菌体是天然存在的痤疮丙酸杆菌噬菌体。


16.权利要求1的组合物，其中所述痤疮丙酸杆菌噬菌体是裂解性痤疮丙酸杆菌噬菌体。


17.权利要求1的组合物，其中所述痤疮丙酸杆菌噬菌体包含线性双链DNA基因组。


18.权利要求1的组合物，其中所述痤疮丙酸杆菌噬菌体在长尾噬菌体科(Siphoviridae)内。


19.权利要求1的组合物，其中所述痤疮丙酸杆菌噬菌体的基因组包含与SEQIDNO：1的核苷酸序列至少约80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％相同的核苷酸序列。


20.权利要求3的组合物，其中所述酶是痤疮丙酸杆菌生物膜降解酶。


21.权利要求20的组合物，其中所述酶是糖苷酶、蛋白酶、DNAse或限制性核酸内切酶。


22.权利要求20的组合物，其中所述酶是糖苷酶。


23.权利要求22的组合物，其中所述糖苷酶是糖苷水解酶。


24.权利要求23的组合物，其中所述酶催化N-乙酰基-D-葡糖胺的线性聚合物的水解。


25.权利要求24的组合物，其中所述酶是β-己糖胺酶。


26.权利要求25的组合物，其中所述酶水解乙酰基葡糖胺聚合物的β-1,6-糖苷键。


27.权利要求20的组合物，其中所述酶是DNAseI、限制性核酸内切酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、胰蛋白酶、蛋白酶K、枯草杆菌蛋白酶、沙氏菌蛋白酶、dispersin、藻酸盐裂解酶、淀粉酶或纤维素酶。


28.权利要求20的组合物，其中所述酶是DispersinB。


29.权利要求20的组合物，其中所述酶是蛋白酶，并且所述蛋白酶是蛋白酶K或枯草杆菌蛋白酶。


30.权利要求1的组合物，其还包含抗衰老酶。


31.权利要求30的组合物，其中所述抗衰老酶是超氧化物歧化酶或过氧化物酶。


32.权利要求1的组合物，其进一步包含益生细菌。


33.权利要求32的组合物，其中所述益生细菌是益生的丙酸杆菌物种(P.sp.)、葡萄球菌物种(Staphylococcussp.)和/或棒状杆菌物种(Corynebacteriumsp.)的细菌。


34.权利要求32的组合物，其中所述益生细菌是β-变形菌(Betaproteobacteria)纲内的细菌。


35.权利要求33的组合物，其中所述益生细菌是益生的痤疮丙酸杆菌细菌。


36.权利要求35的组合物，其中所述痤疮丙酸杆菌细菌
(a)包含与SEQIDNO：2所示的KPA171202型菌株16SrDNA序列相比具有T992C突变的16SrDNA序列；
(b)包含与SEQIDNO：2所示的KPA171202型...

【专利技术属性】
技术研发人员：Y·瓦尔马，N·万普鲁彦，
申请(专利权)人：Phi治疗股份有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US